国家自然科学基金(30271311)
- 作品数：8 被引量：31H指数：4
- 相关作者：吴燕峰沈慧勇唐勇杨睿黄霖更多>>
- 相关机构：中山大学附属第二医院中山大学中山医科大学孙逸仙纪念医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 延迟植入嗅鞘细胞修复成鼠的胸髓损伤(英文)被引量：2
- 2007年
- 背景:脊髓损伤后在一定的微环境中有再生的能力。嗅鞘细胞兼具星形胶质细胞和许旺细胞的特性,具有促进脊髓轴突再生的能力。目的:制作成鼠胸髓损伤模型,观察嗅鞘细胞对损伤脊髓轴突再生的作用。设计:观察性实验。单位:中山大学附属第二医院。材料:实验于2001-01/2002-11在中山大学附属第二医院完成。20只成年SD雄性大鼠,体质量(380±20)g,由中山大学实验动物中心提供(机构许可证号:SYXK(粤)2004-0020)。低糖的DMEM培养液(L-DMEM,GibcoBRL公司)、胎牛血清(Hyclone公司)、MBP(髓磷脂碱性蛋白,Sigma公司)、抗神经生长因子受体抗体(Sigma公司)。应用随机数字表完全随机化分为细胞移植组和对照组,每组10只。方法:将成年SD大鼠麻醉断颈处死,无菌条件下取出完整嗅球分嗅神经。采用改良Allen法打击脊髓建立胸髓损伤模型。细胞移植组于损伤脊髓处注入10μL嗅鞘细胞悬液(2.5×1010L-1),对照组仅注入相同剂量DMEM/F12(1∶1)培养液。移植后6周通过组织学和免疫组织化学方法观察嗅鞘细胞对脊髓轴突再生的影响。主要观察指标:①抗神经生长因子受体抗体染色鉴定嗅鞘细胞。②髓磷脂碱性蛋白染色观察髓鞘的修复。③嗜银染色观察神经轴突再生。结果:细胞移植组有2只动物死亡,对照组有3只死亡,共15只大鼠进入结果分析。①细胞移植组可见损伤脊膜完整,较正常脊髓稍变细。苏木精-伊红染色见损伤区有多极细胞,且与脊髓组织有移行过度现象,说明存活的嗅鞘细胞与宿主融合良好。新生的轴突多呈束状,周围有小圆淋巴细胞浸润。嗜银染色可见再生轴突长入损伤区组织中,多与束状排列的多极细胞伴行;对照组脊髓损伤处明显变细,脊膜尚完整。苏木精-伊红染色见脊髓损伤区未见新生轴突。嗜银染色未见再生轴突。②细胞移植组可见多极细胞,多呈束状排列,胞浆内有大量抗�
- 唐勇吴燕峰史玉朋沈慧勇
- 关键词：嗅鞘细胞脊髓损伤轴突再生
- 大鼠脑源性神经营养因子基因T载体的构建及鉴定被引量：3
- 2006年
- 目的:探讨利用T载体完成大鼠脑源性神经营养因子(BDNF)聚合酶链式反应(polymerasechainreac-tion,PCR)产物克隆的可行性。方法:提取大鼠脑组织总RNA,利用M-MLV逆转录酶及oligo-dT引物逆转录合成cDNA第一条链,再利用exTaq酶及BDNF上、下游引物扩增出BDNFcDNA,最后利用BufferⅠ连接液将BDNF基因克隆入T载体用于测序及下一步克隆。结果:成功构建了BDNF基因T载体,经双脱氧链终止法测序证实为大鼠BDNF基因。结论:利用T载体克隆BDNF基因PCR产物简便、快捷,成功率高。
- 吴燕峰王鹏唐勇黄霖杨睿沈慧勇
- 关键词：脑源性神经营养因子T载体基因克隆
- 人嗅鞘细胞的免疫学特性研究被引量：5
- 2005年
- 目的探讨人嗅鞘细胞的免疫学特征。方法应用流式细胞仪分析人嗅鞘细胞的相应标记抗原的阳性表达率,用单向混合淋巴细胞反应测定人嗅鞘细胞的组织相容性和免疫耐受性,并与骨髓间充质干细胞对比。结果人嗅鞘细胞与骨髓间充质干细胞表面与移植免疫排斥发生密切相关的标志:HLADR、B71(CD80)、B72(CD86)、CD40和CD40L均为阴性。单向混合淋巴细胞反应显示人嗅鞘细胞、骨髓间充质干细胞均对混合淋巴细胞反应无明显的刺激作用。结论人嗅鞘细胞可能是一种免疫缺陷细胞,在体外有诱导细胞移植免疫耐受性的作用。
- 沈慧勇吴燕峰唐勇周敦华杨睿黄霖王鹏史玉朋贺小玉殷德振
- 关键词：嗅鞘细胞免疫学免疫学特征骨髓间充质干细胞流式细胞仪分析
- 人胚胎嗅鞘细胞植入鼠半横断脊髓的初步观察(英文)被引量：9
- 2003年
- 目的观察人胚胎嗅鞘细胞(olfactoryensheathingcells,OECs)移植对成鼠脊髓轴突再生的影响。方法将分离、纯化、培养2周的人胚胎OECs,移植于10只成年SD大鼠半横断胸髓(T10)的两端;对照组10只同样方法给予等量的DMEM培养液。6周后组织切片,行HE染色、嗜银染色以及髓鞘碱性蛋白(MBP)和抗神经生长因子受体抗体(NGFR)免疫组化检查。结果OECs移植组6周后脊髓大体标本显示初步愈合现象;组织学观察,OECs呈NGFR阳性表达,显示OECs仍然存活,且与宿主组织整和良好;部分再生轴突长入断端间组织,呈MBP阳性表达。结论人胚胎OECs对成鼠胸髓损伤后的轴突再生有促进作用。
- 王学文唐勇吴燕峰殷德振杨睿黄霖沈慧勇
- 关键词：组织切片嗜银染色髓鞘碱性蛋白免疫组化脊髓轴突再生神经再生
- 大鼠BDNF基因复制缺陷型重组腺病毒的构建与鉴定被引量：2
- 2006年
- 【目的】构建携带大鼠脑源性神经营养因子(brainderivedneurotrophicfactor,BDNF)目的基因的复制缺陷型重组腺病毒,并初步检测其体外表达目的基因的能力。【方法】提取大鼠脑组织总RNA,使用RT-PCR方法扩增BDNF目的基因并将其克隆入pMD18-TSimple载体测序,将测序完全正确的BDNF目的基因克隆入pShuttle2中,然后利用体外连接法将BDNF目的基因克隆入Adeno-XTM腺病毒骨架中,LipofectamineTM2000法转染HEK293细胞包装携带BDNF目的基因的重组腺病毒,少量提取重组腺病毒DNA检测证实为复制缺陷型BDNF基因重组腺病毒后大量扩增,蛋白电泳及Westernblot法初步检测BDNF目的基因在HEK293细胞中的表达。【结果】成功构建了携带大鼠BDNF目的基因的复制缺陷型重组腺病毒,并证实其在HEK293细胞中可高水平表达BDNF目的基因。【结论】利用体外连接法可方便、快捷地构建携带BDNF目的基因的复制缺陷型重组腺病毒,并可在体外高水平表达表达其所携带的目的基因。
- 王鹏吴燕峰黄文林唐勇黄霖杨睿沈慧勇
- 关键词：脑源性神经营养因子基因重组腺病毒载体
- 人胚胎嗅鞘细胞植入鼠半横断脊髓对脊髓轴突再生的影响被引量：7
- 2004年
- 目的:嗅鞘细胞(olfactoryensheathingcells,OECs)植入脊髓后可促进再生的轴突长入远段脊髓,观察人胚胎嗅鞘细胞移植对成鼠脊髓轴突再生的影响。方法:实验于2003-04/2004-10在中山大学第二附属医院实验中心脐血库完成。20只清洁级雌性SD大鼠被随机分为两组,实验组10只,将分离、纯化、培养2周的人胚胎OECs,移植于大鼠半横断胸髓(T10)的两端;对照组10只同样方法给予等量的DMEM。6周后组织切片,行苏木精-伊红染色、嗜银染色以及髓鞘碱性蛋白(MBP)和抗神经生长因子受体抗体(NGFR)免疫组化检查。结果:OECs移植组6周后脊髓大体标本显示初步愈合现象;组织学观察,OECs呈NGFR阳性表达,显示OECs仍然存活,且与宿主组织整合良好;部分再生轴突长入断端间组织,呈MBP阳性表达。结论:人胚胎OECs对成鼠胸髓损伤后的轴突再生有促进作用。
- 沈慧勇王学文唐勇吴燕峰杨睿黄霖殷德振
- 关键词：脊髓损伤嗅神经神经再生
- 复制缺陷型重组腺病毒Adeno-X-脑源性神经营养因子的构建与鉴定被引量：4
- 2006年
- 目的制备能高水平表达大鼠脑源性神经营养因子(BDNF)的复制缺陷型重组腺病毒。方法首先TRIzol法提取大鼠脊髓组织总RNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增 BDNF基因并将其克隆入pMD18-T载体测序,测序后将其插入pShuttle2中,然后利用体外连接法将BDNF基因克隆入Adeno-XTM腺病毒骨架中,脂质体法转染HEK 293细胞包装携带BDNF基因的重组腺病毒,少量提取重组腺病毒DNA利用PCR法检测为复制缺陷型BDNF基因重组腺病毒后大量扩增,蛋白电泳及Western blot法检测BDNF基因在HEK 293细胞中的表达。结果成功构建了能高水平表达大鼠BDNF的复制缺陷型重组腺病毒。结论利用Adeno-XTM系统体外连接法可方便、快捷的构建BDNF基因复制缺陷型重组腺病毒,并可在体外高水平表达其所携带的目的基因。
- 吴燕峰王鹏唐勇黄霖杨睿史玉朋贺晓玉沈慧勇
- 关键词：脑源性神经营养因子基因克隆腺病毒载体
- 细胞移植的人嗅鞘细胞培养方法的研究
- 2007年
- 目的探讨适用于细胞移植的人嗅鞘细胞(OECs)分离与培养的方法。方法无菌条件下取自愿捐献孕5个月流产胎儿的完整嗅球进行嗅鞘细胞提取分离、纯化,并对嗅鞘细胞进行免疫组化染色及纯度检测,观察其形态学特点,检测其免疫组化染色的阳性率。结果本方法分离、培养的嗅鞘细胞大多呈三角形、梭形,有些突起较长,生长活跃,增殖迅速,P75、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组化染色呈阳性,嗅鞘细胞阳性率为95.3%。结论该方法简便易行且不影响细胞功能,适用于细胞移植的研究。
- 唐勇吴燕峰沈慧勇
- 关键词：嗅球嗅鞘细胞细胞培养
