江苏省青年科技基金(BK2006504)
- 作品数：6 被引量：11H指数：2
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- 发文基金：江苏省青年科技基金国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- PScgpd1启动子融合GUS基因在酿酒酵母中的瞬时表达
- 2008年
- 利用PCR技术从酿酒酵母基因组克隆得到甘油代谢关键酶基因gpd1启动子,并成功构建真核生物穿梭表达载体pYX212-zoecin-PScgpd1-GUS,并将其电击转入酿酒酵母中。将构建成功的酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae基因工程菌分别在0.2,0.5,1.0 mol/L NaCl的盐胁迫下培养,首次通过GUS组织化学染色法和荧光法测定GUS报告基因的瞬时表达酶活检测gpd1启动子的酶活表达。研究发现,酵母甘油代谢关键酶基因gpd1启动子在不同渗透压下的表达有明显的差异。证实了gpd1启动子是受渗透压调节的,属于诱导型启动子,这可能与渗透压胁迫下的甘油代谢密切关联,相关研究未见报道。
- 王俊杰饶志明沈微方慧英诸葛健
- 超声波萃取烟叶中3-磷酸甘油脱氢酶的研究被引量：2
- 2008年
- 将超声波萃取手段引入到烟叶中3-磷酸甘油脱氢酶提取方法中,并通过正交实验确定了超声波萃取烟叶中3-磷酸甘油脱氢酶(GPDH)的最佳条件为:超声波破碎功率为75w,超声波破碎间歇时间为2s,超声波破碎时间为3s,料液比为1∶15g/ml;在此最佳条件下测得烟叶中3-磷酸甘油脱氢酶为0.3937U/mg蛋白,均比其他提取手段的酶活要高。
- 王俊杰饶志明沈微方慧英诸葛健
- 关键词：甘油3-磷酸甘油脱氢酶超声波萃取
- 产甘油假丝酵母甘油合成关键酶基因CgGPD1多拷贝表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2008年
- 采用PCR的方法从产甘油假丝酵母(Candida glycerinogenes)中扩增出3-磷酸甘油脱氢酶的编码基因及侧翼序列CgGPD1,分别构建了含不同CgGPD1拷贝数的根癌农杆菌双元载体pCAM3300?zeocin-CgGPD1(Ⅰ)、pCAM3300-zeocin-CgGPD1-CgGPD1(Ⅱ)和pCAM3300-zeocin-Cg GPD1-CgGPD1-CgGPD1(Ⅲ)。在大肠杆菌JM109中,研究了其在不同质量浓度NaCl、葡萄糖胁迫下表达情况。结果表明,在大肠杆菌中GPDH的活性随着NaCl、葡萄糖质量浓度的升高而增加。当NaCl质量浓度达到2.5 g/dL时,GPDH的酶活比在0.5 g/dL NaCl下平均提高31.2%;当葡萄糖质量浓度提高至10 g/dL时,GPDH的酶活比2 g/dL葡萄糖下平均提高31.8%;在相同的NaCl、葡萄糖质量浓度下,GPDH的活性随着CgGPD1拷贝数的增加而升高,JM109(Ⅱ)比JM109(Ⅰ)的GPDH酶活平均提高8.2%,JM109(Ⅲ)比JM109(Ⅱ)的GPDH酶活平均提高9.9%。以上结果表明,在大肠杆菌中CgGPD1基因的表达同样受渗透压胁迫调节。
- 王震饶志明诸葛斌沈微方慧英诸葛健
- 关键词：产甘油假丝酵母
- 荧光素酶编码基因luc在大肠杆菌中的克隆、表达及纯化被引量：4
- 2008年
- 以荧光虫荧光素酶报告载体pXP2 DNA为模板,扩增得到编码萤火虫荧光素酶(LUC)的基因(luc),构建了诱导型表达载体pQE30-luc。将载体导入E.coliM15获得高效诱导表达萤火虫荧光素酶基因的重组菌M15/pQE30-luc。SDS-PAGE电泳分析显示:重组蛋白的相对分子质量为60 000,表达量占全菌胞内可溶性蛋白质的50.9%.利用表达载体pQE30上的His.Tag标记选用Ni柱纯化表达具有活性的萤火虫荧光素酶(LUC),纯化后比酶活达到1.43×109RFU/mg,纯化倍数达10.6倍,回收率为25.3%.
- 夏蕾饶志明沈微方慧英诸葛健
- 关键词：萤火虫荧光素酶克隆纯化
- 荧光素酶基因luc在大肠杆菌中表达条件优化被引量：1
- 2009年
- 对重组荧光素酶大肠杆菌菌株M15/pQE30-luc进行了表达条件的优化研究。单因素结果表明:在初始pH值7.0,装液量为20%,2%的接种量,终浓度为0.5mmol/L的IPTG,添加10～30mmol/L的Mg2+,摇床转速为200r/min,37℃诱导3.5h酶的表达量最高。正交试验结果表明:初始pH值为7.0,添加40mmol/LMg2+,接种量2%,装液量为20%时表达量最高,比酶活达1.63×108RFU/mg蛋白。
- 夏蕾饶志明沈微方慧英诸葛健
- 关键词：萤火虫荧光素酶发酵条件正交试验设计
- 产甘油假丝酵母两种转化方法的比较被引量：3
- 2007年
- 为了研究产甘油假丝酵母高产甘油和耐高渗的机制,以Zeocin作为选择标记,考察和比较了两种转化方法,即醋酸锂法和电转化法的转化效果,以建立简单有效的产甘油假丝酵母转化体系。结果表明,细胞生长时期是影响转化率的关键因素。在OD600约为1.3时制备感受态细胞,在电压为1.5 kV时进行电击,可获得较高转化率,为每微克DNA 139个转化子。在OD600约为1.0时制备感受态细胞,醋酸锂预处理细胞1 h,获得的转化率为每微克DNA 154个转化子。综合考虑,醋酸锂法更适合于产甘油假丝酵母的转化。
- 张永光陈献忠饶志明沈微方慧英诸葛健
- 关键词：产甘油假丝酵母
