国家自然科学基金(30600419)
- 作品数：4 被引量：22H指数：3
- 相关作者：周常勇刘金香李中安唐科志田晓更多>>
- 相关机构：中国农业科学院柑桔研究所西南大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 褐色橘蚜中柑橘衰退病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用被引量：12
- 2013年
- 【目的】建立SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR方法,测定褐色橘蚜(Toxoptera citricida)中柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)含量。【方法】根据CTV CP25保守序列,设计特异性引物HD-F/R,通过优化得到最佳反应条件建立橘蚜中CTV实时荧光定量RT-PCR,并进行灵敏性、重复性检验,评价该方法的可行性。应用该方法测定单头橘蚜中CTV含量。【结果】该实时荧光定量RT-PCR方法最低检测限为9.0拷贝/μL,其灵敏度是常规RT-PCR的100倍。标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,相关性系数为0.998,扩增效率达104.7%。批内和批间变异系数均小于3.24%,表明该方法重现性好。获毒24 h单头橘蚜中CTV最低含量为2.5×103拷贝,最高含量为1.24×106拷贝。【结论】本研究建立的实时荧光定量RT-PCR检测方法能够准确检测褐色橘蚜中的CTV,可用于研究褐色橘蚜-CTV-寄主互作关系及CTV的流行。
- 李玲娣周常勇李中安田晓王永江唐科志周彦刘金香
- 关键词：柑橘衰退病毒实时荧光定量RT-PCR
- 柑橘黄化脉明病毒和衰退病毒的二重RT-PCR检测体系的建立与应用被引量：7
- 2017年
- 选用柑橘黄化脉明病毒(Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)和柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)两种病毒外壳蛋白保守序列及内参基因Ubiquitin的特异性引物,优化影响二重RT-PCR反应的Mg^(2+)浓度、dNTPs浓度、引物浓度和退火温度,建立了针对两种病毒的一步法二重RT-PCR检测体系。二重RT-PCR获得CYVCV、CTV及Ubiquitin的特异性片段大小分别为614、373和194 bp,克隆测序和序列对比结果显示它们与已报道的病毒序列具有较高的同源性。该体系最低能从40 ng·μL^(-1)总核酸中检测出CYVCV,从4 ng·μL^(-1)总核酸中检测出CTV,其灵敏度与单一RT-PCR检测灵敏度一致。利用该体系对33份田间样品进行检测,CYVCV和CTV感染率分别为54.5%和66.7%,复合侵染率高达36.4%。该一步法二重RT-PCR技术体系可用于大量田间样品中CYVCV和CTV的快速同步检测。
- 赵恒燕关桂静周常勇于云奇王洪苏李中安刘金香
- 关键词：柑橘
- 应用多重PCR技术同步检测柑橘4种重要嫁接传播病原(英文)被引量：3
- 2014年
- 柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV),柑橘碎叶病毒(Citrus tatter-leaf virus,CTLV),柑橘裂皮病类病毒(Citrus exocortis viroid,CEVd)和柑橘黄龙病(Huanglongbing,HLB)亚洲种病原(Candidatus liberobacter asiaticus)是重要的柑橘嫁接传播病原。本文建立了同时检测HLB病菌、CTV、CEVd和CTLV 4种柑橘嫁接病原的一步法、双温多重PCR检测技术体系,同时在体系中设置内参基因。应用该体系快速评价了4种嫁接传播病原在田问侵染情况,结果表明28个田间样品CTV、CEVd、CTLV和HLB感染率分别为89.3%、17.9%、10.7%和28.6%,接近半数样品为混合感染。并且将该方法应用于快速评价茎尖嫁接苗病毒的脱除情况。
- 刘金香周常勇唐科志李玲娣刘科宏田晓李中安
- 关键词：柑橘衰退病毒柑橘碎叶病毒多重PCR
- 柑橘衰退病毒p20基因的克隆、序列分析及原核表达
- 以柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)弱毒分离株CTV11为材料,运用RT-PCR对p20基因进行扩增、克隆和序列分析,CTV11分离株p20与典型茎陷点分离物SY568、T318A和Nua...
- 刘金香徐明李中安唐科志周常勇
- 关键词：柑橘衰退病毒基因克隆原核表达
- 文献传递
- 柑桔衰退病及其防治被引量：1
- 2008年
- 徐明周常勇刘金香
- 关键词：柑桔衰退病毒柑桔生产VIRUS地中海地区果树树种
