国家自然科学基金(30971974)
- 作品数：10 被引量：79H指数：5
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- 银杏组织培养及次生代谢分子生物学的研究进展被引量：3
- 2011年
- 为深入了解银杏组织培养与次生代谢分子生物学的研究概况,从外植体来源、培养条件及其对培养物中次生代谢物质含量的影响等方面阐述了银杏固体培养和悬浮培养的研究进展,综述了银杏次生代谢过程中相关基因的克隆状况。
- 孙楠楠许锋黄小花程水源王燕
- 关键词：银杏基因克隆次生代谢
- 银杏胞质抗坏血酸过氧化物酶基因(APX)克隆及表达特性分析(英文)被引量：2
- 2013年
- 【目的】分离和克隆银杏细胞质抗坏血酸过氧化物酶基因GbAPX1(GenBank登录号为FJ555021),了解其在银杏正常组织发育以及响应环境胁迫和逆境相关激素诱导的表达情况。【方法】利用同源克隆及RACE技术从银杏叶片细胞质中分离得到GbAPX1全长cDNA序列,用生物信息学方法对获得的cDNA序列及推测的氨基酸序列进行分析,并用实时定量PCR方法研究GbAPX1在不同组织、不同激素和胁迫处理下的表达模式。【结果】克隆GbAPX1基因全长cDNA序列为965 bp,包含一个759 bp的最大读码框,编码252个氨基酸;预测该基因编码蛋白质分子量为27.6 kDa,其等电点为5.81。系统进化树分析表明,GbAPX1和其他裸子植物同源性较高并聚为一类。qRT-PCR分析结果显示,GbAPX1表达具有组织和发育时期差异性,在成熟叶片和雄蕊中具有最高表达水平,在茎和嫩叶中表达水平较低。诱导表达分析表明,GbAPX1受到激素和环境压力诱导。其中,脱落酸、水杨酸、茉莉酸甲酯和紫外辐射均能诱导其转录上升,而乙烯利和伤害处理对GbAPX1转录水平无显著影响。【结论】确认获得序列为GbAPX1基因cDNA序列;GbAPX1不仅参与了银杏正常的组织生长发育,还与一些环境胁迫和逆境相关激素诱导表达有关。
- 程华李琳玲许锋袁红慧吴聪华程水源王燕
- 关键词：银杏
- 银杏EPSPS基因克隆及表达分析被引量：11
- 2010年
- 利用RACE技术,克隆到银杏EPSPS合酶基因(GbEPSPS)的cDNA序列并对其进行生物信息学分析。结果表明:银杏GbEPSPScDNA长1 403 bp(GenBank登录号GU084139),其包含一个1 035 bp的ORF框,编码344个氨基酸;预测该基因编码蛋白质分子量为36.87 kD,其等电点为5.75。系统进化树分析表明,银杏EPSPS蛋白质序列与其他物种的EPSPS同源性较高。半定量RT-PCR分析结果显示,EPSPS基因在银杏的叶和果实中表达量最高,其次为茎,根中表达水平最低。草甘膦处理能显著诱导银杏EPSPS基因表达量升高;紫外光对银杏EPSPS基因的表达具有诱导作用;ABA诱导GbEPSPS表达量先升后降;GbEPSPS转录水平受到42℃高温显著诱导。
- 程华李琳玲王燕姜德志程水源
- 关键词：银杏EPSP合酶基因克隆RACE技术
- 银杏GbPAL基因启动子表达载体的构建被引量：2
- 2012年
- 为弄清GbPAL启动子调控类黄酮代谢的功能,采用双酶切方法,用BamH I+HindⅢ将GbPALp与植物表达载体pBI121分别酶切纯化,通过T4DNA连接酶将GbPALp片段连接到已切除35S启动子的植物表达载体pBI121上,并转化到农杆菌LBA4404上,然后进行菌落PCR及酶切鉴定。结果表明:扩增到的GbPALp片段成功引入了BamH I和HindⅢ酶切位点,GbPALp酶切后与酶切前的条带大小一致;将酶切后的空质粒和引入酶切位点的目的片段进行连接转化后,含目的基因pBI121:GbPALp:LBA4404菌落培养成功。成功构建了GbPAL基因启动子真核表达载体pBI121:GbPALp。
- 李金宝唐寅许锋程华李琳玲程水源
- 关键词：银杏表达载体构建
- 银杏MECPs基因启动子克隆及其植物表达载体的构建被引量：1
- 2013年
- 为深入研究银杏MECPs基因启动子的结构及功能特点,以前期获得的银杏MECPs基因的cDNA序列为模板,采用染色体步移技术(Genome Walking),从银杏基因组中扩增到一段GbMECPs基因启动子序列。结果表明:该启动子片段长度约为744bp,含有多个基本顺式作用元件TATA和CAAT-box及典型的光调节元件GT-1motif(GRWAAW)和Circadian box(CAANNNNATC)等。进一步分析发现,该调控序列还包含多个对生长素、赤霉素、乙烯利、细胞分裂素、脱落酸等各种激素应答相关的调控元件和MYB、MYC转录因子介导的多种逆境胁迫诱导元件。将克隆的GbMECPs启动子替换质粒pBI121中的35S启动子,成功构建了由GbMECPs启动子驱动GUS报告基因的植物表达载体pBI121+GbMECPs。
- 袁红慧程华李琳玲许锋程水源
- 关键词：银杏染色体步移
- 银杏幼胚培养的多因子正交试验研究被引量：1
- 2012年
- 以MS为基本培养基,选用银杏幼胚为试验材料,采用L9(34)正交设计分析比较2,4-D(A因素)、6-BA(B因素)、酸水解酪蛋白(CH,C因素)3个因素及其组合对银杏幼胚愈伤组织诱导率、褐化率及生长量的影响。结果表明:2,4-D 1.0mg/L+6-BA 1.0mg/L+CH 500mg/L组合银杏的幼胚愈伤诱导率最高,为100%,同时该组合处理愈伤组织生长量也最大,增长倍数达8.11倍;而2,4-D 0.5mg/L+6-BA 0.5mg/L组合褐化率最高,为60.3%。经直观分析、方差分析和主因素效应的多重比较后认为,3个因素中,2,4-D对银杏幼胚愈伤诱导率及褐化率的影响最大,极差分别为74.196和63.702;CH对银杏幼胚愈伤生长量影响最大,极差为2.148。银杏愈伤组织诱导及生长的培养基最优组合为MS+2,4-D 1.0mg/L+6-BA 0.5mg/L+CH 500mg/L。
- 袁红慧李琳玲程华姜德志吴聪华程水源
- 关键词：银杏幼胚正交设计生长量褐化率
- 银杏查尔酮合成酶基因启动子(GbCHSP)调控元件及功能分析被引量：13
- 2010年
- 通过染色体步移方法从银杏(Ginkgo biloba L.)基因组中克隆到查尔酮合成酶基因(CHS)翻译起始位点上游1711bp的启动子序列。生物信息学分析表明,该启动子片段中存在多个顺式作用元件,包括紫外/蓝光响应单元、植物激素响应单元、真菌诱导元件、MYB结合位点、TATA-box和CAAT-box等。亚克隆了CHS转录起始位点上游1402bp序列,将其与GUS基因构建融合表达载体pBI121+CHSP,以pBI121-35S作为负对照,通过农杆菌(LBA4404)介导法分别转入烟草。结果表明,银杏CHS启动子序列能驱动GUS基因在烟草中的表达,表达具有组织特异性。GbCHSP的功能研究将有助于揭示银杏叶黄酮的积累与GbCHS基因表达的分子机理。
- 李琳玲程华程水源许锋王燕姜德志
- 关键词：银杏GUS
- 银杏过氧化物酶基因POD1的克隆及表达分析被引量：26
- 2010年
- 利用RACE技术从银杏中克隆到过氧化物酶基因(GbPOD1,FJ599670)的cDNA全长。GbPOD1基因编码序列为1 092 bp,编码一条长为329Aa的成熟阴离子POD蛋白,预测成熟蛋白分子量为35.8 kDa,等电点为8.10。Southern杂交及进化树分析结果表明,GbPOD1和其他物种的POD源自于相同的祖先,属于植物类型III的POD同工酶编码基因,为多基因家族。RT-PCR分析表明,GbPOD1在银杏的根、茎、叶和果中都有表达,在茎中的相对表达量最高,其次为根和果,而叶部位表达水平最低。植物激素MeJA、金属离子Cu和Cd以及MV和WOU的处理能显著诱导GbPOD1基因的表达。研究结果显示,在银杏叶片中,GbPOD1属于多功能基因,具有潜在的参与重金属污染清除及伤害处理防御方面的功能。
- 程华李琳玲王燕程水源
- 关键词：银杏
- 转录组测序在高等植物中的研究进展被引量：11
- 2014年
- 随着高通量测序技术的发展,在高等植物中应用转录组测序的研究越来越多。转录组测序针对物种转录本直接进行测序,能够有效的获得基因编码序列,主要研究物种在不同时期,不同环境条件,不同处理方式等各个不同条件下的基因表达差异及调控模式差异。本文主要介绍了转录组测序的测序平台,实验流程,生物信息分析内容以及目前在高等植物中的广泛应用,讨论了转录组测序在高等植物中研究的问题和新的研究内容。
- 黄小花许锋程华李琳玲程水源
- 关键词：高通量测序转录组UNIGENE遗传进化分析
- 植物苯丙氨酸代谢相关酶基因启动子研究进展被引量：14
- 2010年
- 苯丙氨酸代谢途径是植物重要的次生代谢途径,主要包括苯丙烷代谢途径和异黄酮合成代谢途径,其中每一步都由不同酶调控。启动子是基因的一个组成部分,控制基因表达(转录)的起始时间和表达程度。综述了苯丙氨酸代谢途径3种重要酶,即苯丙氨酸解氨酶、查尔酮合成酶和查尔酮异构酶基因启动子的研究进展。
- 唐寅张威威许锋程水源
- 关键词：启动子分子机理
