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红花cDNA-AFLP反应体系的优化研究被引量：6: 2008年; 目的为构建红花的遗传连锁图谱和功能基因的研究,探讨影响红花cDNA扩增片段长度多态性(cDNA amplified fragment length polymorphism,cDNA-AFLP)的各种因素,建立并优化红花cDNA-AFLP反应体系。方法以红花新鲜花瓣为材料,针对其内含物特殊性对Trizol法加以改进提取RNA,采用无RNase H活性的鼠源反转录酶(M-MLV RTase)结合置换合成法反转录双链cDNA;两步法酶切与连接,优化酶切时间;连接产物和预扩产物分别设置不同稀释倍数扩增并对选扩反应体系略微调整后,用6%的聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳分离,银染检测。结果改进Trizol法得到的红花总RNA样品较为完整,纯度较高,可直接用于双链的合成;经无RNase H活性反转录酶结合置换合成法得到高质量的cDNA模板。建立优化后的红花cDNA-AFLP体系为:250ng cDNA 37℃6 h经限制性内切酶MseI和EcoRI完全酶切,16℃连接12 h;连接产物最佳稀释倍数为10倍;预扩产物稀释为150倍;PAGE电泳得到清晰、稳定、分辨率较高的多态性条带。结论本研究建立的反应体系适用于红花功能基因的cDNA-AFLP研究。; 冯娜郭美丽张汉明; 关键词：红花 CDNA-AFLP

红花cDNA-AFLP限制性内切酶的选择及银染体系的建立被引量：2: 2009年; 目的:建立适于红花cDNA-AFLP分析酶切组合及银染技术体系,为进一步进行红花重要性状相关基因研究奠定基础。方法:对PstI/MseI和MseI/EcoRI两种限制性内切酶组合酶切效率进行比较,并探讨测序板处理中亲和硅烷和剥离硅烷的用量、测序胶中TEMED的用量、预电泳、温度因素、显色液的配置等银染过程中较关键的几个因素。结果:选用PstI/MseI限制性内切酶组合酶切效率较高,测序板应彻底清洁,TEMED量应适中,应进行30 min预电泳,整个铺板电泳过程保持温度恒定,选用4℃冷藏的碳酸钠做显色液效果好,综合以上几方面能显著提高胶图的质量。结论:本研究建立了适于红花的cDNA-AFLP银染体系,PstI/MseI较MseI/EcoRI酶切组合具有更高的多态性率,能更全面地揭示红花研究材料间更为丰富的遗传变异性;银染过程中成功克服了以往试验中常见的撕胶、背景太深、条纹不清晰等问题。; 杨娟郭美丽; 关键词：红花限制性内切酶

红花组织培养的研究进展被引量：5: 2012年; 红花是重要的药油兼用作物,通过基因工程手段提高红花的产量与质量具有重要意义。红花的组织培养为其基因改造提供了平台,是实现活性化合物工业化生物合成的关键步骤。本文对近年来国内外红花组织培养的研究进展进行了综述,包括植物激素、温度、湿度、光照、酸碱度等因素对红花组织培养的影响,并对该领域的发展前景进行了展望。; 杨捷威吴婷婷郭美丽; 关键词：红花植物激素

红花cDNA相关序列扩增多态性的扩增体系优化被引量：1: 2009年; 目的:建立一种适合以红花cDNA为模板进行相关序列扩增多态性(SRAP)扩增的体系,筛选最佳的SRAP-PCR反应条件。方法:提取红花RNA并反转录成cDNA,以此为模板,使用正交设计表设计PCR反应中的3个重要因素Taq酶、三磷酸脱氧核苷(dNTPs)、引物的反应浓度。随后设计Mg2+的反应浓度以及模板含量,分别进行单因素试验。结果:本研究建立的红花cDNA-SRAP扩增条件为:25μL反应体系中含模板cDNA 20 ng,1×PCR缓冲液2.5 mmol/L,Mg2+2.0 mmol/L,Taq DNA聚合酶0.04 U/μL,dNTPs 0.2 mmol/L,引物0.2μmol/L。优化后扩增结果稳定性好,条带清晰,多态性好。结论:该体系为红花功能基因的研究奠定了基础。; 唐洁李亚葵王章建郭美丽; 关键词：红花 CDNA 相关序列扩增多态性分子标记逆转录聚合酶链反应

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国家自然科学基金(30772734)