国家科技重大专项(2012ZX10001007-009-003)
- 作品数：7 被引量：29H指数：3
- 相关作者：李卫华王玉柱黄超丁训城夏敏杰更多>>
- 相关机构：上海市计划生育科学研究所复旦大学复旦大学上海医学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 尼非韦罗阴道温敏原位凝胶的流变学研究被引量：21
- 2013年
- 目的:应用动态流变实验测定温度敏感型原位凝胶的流变性质,以预测其在体胶凝(相变)行为。方法:通过处方筛选,确定以泊洛沙姆407和188作为基质,制备尼非韦罗阴道温敏原位凝胶(NFVR-TISG)。通过差示扫描热量法(DSC)测定NFVR-TISG胶凝温度。采用动态流变学实验测定NFVR-TISG在不同温度下相变过程中的流变参数,及NFVR-TISG经模拟阴道夜稀释(5∶1)后的流变参数。结果:NFVR-TISG在室温条件下为黏弹性较低的牛顿流体,温度升至29℃时形成凝胶状态;相变行为表现为黏弹性呈指数增长,相角降低;流变学结果显示的胶凝温度与DSC结果(30.4℃)基本一致;模拟阴道液稀释后NFVR-TISG约在35℃发生相转变。结论:体外流变学特点显示NFVR-TISG符合临床阴道局部用药物要求。用于体外评价的动态流变学实验可反映温敏凝胶的黏弹性流体力学特点。
- 田芳王玉柱杨凯温成丽成倩倩李卫华丁训诚
- 关键词：流变学相转变
- 去氧胆酰酪氨酸对人类精子质膜完整性和细胞凋亡的影响
- 2014年
- 目的探讨去氧胆酰酪氨酸(DCT)对人类精子活力、质膜完整性以及凋亡的影响。方法上游高活力人类精子分别与DCT 0.25,0.5和1.0 g·L-1作用20 min,取精子悬液分析精子活率(SM)和活力(SV);SYBR-14/PI双染后经过荧光显微镜和流式细胞仪观察质膜完整性,AnnexinⅤ/PI双染流式细胞仪分析细胞凋亡。结果 DCT对SM和SV均有显著的抑制作用,且存在量-效关系(rSV=0.91,rSM=0.88,P<0.05)。质膜完整性结果显示,质膜破损精子在DCT 0.25,0.5和1.0 g·L-1时质膜破损精子百分率分别为(54.3±9.8)%,(73.8±3.5)%和(80.6±8.3)%,与空白对照组具有明显差别(P<0.05),且具有明显的量效关系(r=0.91,P<0.05)。凋亡实验结果显示,晚期凋亡精子百分率在0.25,0.5和1.0 g·L-1时,分别是(11.9±1.2)%,(30.1±6.3)%和(75.6±6.3)%,具有明显的浓度依赖性(r=0.98,P<0.05)。DCT≤0.5 g·L-1引起精子早期凋亡率升高,但是高浓度时却出现降低趋势。结论 DCT不仅破坏精子质膜完整性,同时诱发精子凋亡,导致受精能力降低或消失。
- 温成丽职瑞娜王玉柱黄超李卫华丁训城
- 关键词：精子获能细胞凋亡
- 链状酰胺类化合物B07的体外杀精效果及其对精子质膜的影响被引量：2
- 2014年
- 目的：研究一种链状酰胺类化合物（B07）的体外杀精作用及其对精子质膜的影响。方法：上游收集高活力人类精子分别与0μg／ml（对照组），5-640μg／mlB07作用30min，随后用计算机辅助精液分析仪分析记录精子的活率及运动参数；用160μg／mlB07与精子作用，记录5min、30min、60min和120min时精子活动率：处理后的精子一部分经SYBR-14／PI双染后用荧光显微镜观察，另一部分通过电子显微镜来观察质膜的变化情况；并以壬苯醇醚科9）作为阳性对照。结果：随着B07浓度的升高，精子活率和活力呈下降趋势，最低有效浓度（MEC）为640gg／ml；荧光显微镜下经B07处理的精子呈橙色，而N9处理的精子呈红色；电子显微镜显示B07组精子头部肿胀起泡，尾部针孔样损伤，N9组精子呈溶解性改变。结论：B07具有体外杀精作用，且该作用有时间和浓度依赖性。且其对精子质膜的影响小于N9。
- 职瑞娜陆路戴秋云王玉柱黄超夏敏杰丁训城李卫华姜世勃
- 关键词：人类精子杀精质膜
- dl-扁桃酸对人精子与阴道黏膜上皮VK2/E6E7细胞的毒性研究被引量：4
- 2015年
- 目的探讨dl-扁桃酸对人阴道黏膜上皮细胞(VK2/E6E7)与精子的细胞毒性损伤。方法不同浓度的dl-扁桃酸处理高活力精子20 s,计算机辅助精子分析仪测定精子活率,扫描电子显微镜检测精子受损情况。1.25,2.5 g·L?1 dl-扁桃酸和4.0 g·L?1壬苯醇醚(nonoxynol-9,N-9)处理VK2/E6E7细胞,MTT法检测细胞活性,ELISA试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率,并用流式细胞法检测细胞凋亡率。结果 dl-扁桃酸抑制精子活率的半数有效浓度约为1.25 g·L?1,最低有效浓度约为2.5 g·L?1。扫描电镜结果显示,dl-扁桃酸处理组精子表面结构与对照组形态相似,无明显受损特征,N-9组精子严重受损。MTT实验结果表明,1.25 g·L?1 dl-扁桃酸组细胞存活率>95%,2.5 g·L?1 dl-扁桃酸组细胞存活率约为50%。1.25,2.5 g·L?1 dl-扁桃酸处理组LDH释放量只有微量检出,远低于N-9组。流式细胞检测表明,1.25,2.5 g·L?1 dl-扁桃酸处理组中活细胞和晚期凋亡比例与对照组相近,早期凋亡细胞略少于对照组,死亡细胞稍多于对照组,N-9组大量细胞死亡。结论 dl-扁桃酸对VK2/E6E7细胞毒性远低于N-9,其对精子的抑制作用不是通过破坏精子质膜与鞭毛来实现。
- 夏敏杰王玉柱黄超丁训城李卫华芦洁
- 关键词：壬苯醇醚细胞毒性
- dl-扁桃酸阴道热敏凝胶剂对小型猪阴道黏膜刺激性的研究
- 2015年
- 目的研究dl-扁桃酸阴道热敏凝胶剂对小型猪阴道黏膜的刺激性。方法将9只雌性小型猪按体质量随机分为空白胶组、讲．扁桃酸阴道热敏凝胶剂组和市售壬苯醇醚凝胶（N-9凝胶）组，肌肉注射苯甲酸雌二醇400μg／kg（促发情），12d后建立小型猪阴道刺激性试验模型，阴道给予5mL凝胶，每日一次，连续给药7d，在给药前和末次给药后的24h与72h，收集阴道灌流（CVL）液，流式细胞仪计数炎性细胞和中性粒细胞数目；末次给药72h后处死小型猪，取阴道组织，观察阴道黏膜组织病理学改变。结果dl-扁桃酸阴道热敏凝胶剂组CVL液中炎性细胞、中性粒细胞数目明显低于N-9凝胶组（P〈0．05）。小型猪阴道黏膜组织HE染色显示，dl-扁桃酸阴道热敏凝胶剂处理组阴道黏膜无明显上皮破损、血管充血以及炎症细胞浸润，其刺激性评分（5．10±0．47），与空白胶组（3．30±1．60）比较无显著性差异（P〉0．05），明显低于N-9凝胶组（20．50±3．50）（P〈0．05）。结论dl-扁桃酸阴道热敏凝胶剂对小型猪阴道黏膜刺激性较小。
- 夏敏杰黄超田芳王玉柱职瑞娜丁训城严钱勤李卫华
- 关键词：小型猪炎性细胞中性粒细胞
- 壬苯醇醚-9诱导小型猪阴道黏膜免疫炎症反应模型的建立
- 2016年
- 目的探索建立广西巴马小型猪阴道黏膜免疫炎症反应模型的方法。方法将6只雌性小型猪随机分为基质对照组和壬苯醇醚-9（N-9）模型组（40mg／mL）（每组3只）。肌肉注射苯甲酸雌二醇12d后，各组阴道给药5mL／d，连续7d。造模后取阴道黏膜组织进行病理检查，并根据上皮溃疡、坏死、细胞浸润、出血、充血、水肿等指标进行病理评分；造模后24h与72h，采集阴道灌流液（CVL），采用流式细胞术对CVL沉淀细胞中的中性粒细胞比例和CD45＋细胞百分率进行分析；免疫组织化学法（IHC）检测阴道黏膜组织中CD45＋细胞的表达及分布。结果组织病理学观察显示，N-9模型组阴道黏膜上皮损伤明显，出现不同程度的溃疡、坏死、炎性浸润、出血、水肿等。病理评分结果显示，N-9模型组病理总分值（18．0±3．2）与基质对照组（3．3±0．2）相比明显升高（P〈0．01）。N-9模型组CVL的中性粒细胞比例为41．70％±1．63％（24h）和51．17％士3．81％（72h），CD45＋细胞比例为58．5％±4．73％（24h）和88．0％±3．57％（72h），与基质对照组相比均显著增高（P〈0．01）。N-9模型组阴道黏膜CD45＋细胞表达明显增多，累积光密度值为33．95±6．69，显著高于基质对照组（23．42±3．30）（p〈0．05）。结论阴道连续给予N-9凝胶7d可以诱发小型猪阴道黏膜明显的炎性反应，符合阴道黏膜免疫炎症反应模型的特征。
- 黄超弓艺涓田芳王玉柱孙冰夏敏杰职瑞娜丁训诚周新初李卫华
- 关键词：小型猪免疫炎症反应
- 尼非韦罗微乳热敏原位凝胶相变性和体外释药行为被引量：3
- 2014年
- 目的以尼非韦罗(nifeviroc,NFVR)为模型药物制备一种微乳-热敏原位凝胶(microemulsion thermosensitive in situ gel,ME-TISG),并对该凝胶的制剂学性质进行考察。方法用温控(75℃)相图方法制备尼非韦罗微乳(nifeviroc microemulsion,NFVR/ME),并将其载入泊洛沙姆407(Poloxamer 407,P407)形成的凝胶中,用动态激光散射粒度仪及透射电子显微镜测定其粒径、ζ电位及形态,利用高级旋转流变仪对凝胶流变学进行研究;采用无膜溶出模型研究在频率100 r·min-1下,NFVR/ME的释放与凝胶溶蚀之间的关系。结果不同浓度NFVR/ME的平均粒径为36.30~38.25 nm,且呈圆整均一球体,ζ电位-7.15^-7.22 mV,相转变温度为29.5℃,胶凝温度为34.5℃,NFVR/ME-TISG在低温(<25℃)时为牛顿流体,黏度很小;随着温度升高,黏弹性增大,在35~37℃表现出典型的假塑性流体特征,复数黏度随着剪切速率的升高而逐渐减小,呈现剪切变稀现象。ME中NFVR的释放率受控于凝胶的溶蚀速率,二者呈现良好的线性关系(R2=0.98),遵循零级动力学特征,这种由溶蚀控制药物释药的方式可以避免突释效应。结论热敏原位凝胶是一种具有应用前景的新型阴道释药系统。
- 王玉柱职瑞娜兰梦宁杨凯李卫华丁训诚
- 关键词：药剂学微乳体外释药
