国家自然科学基金(30600435)
- 作品数：9 被引量：55H指数：7
- 相关作者：马得莹韩宗玺刘胜旺廖文艳王瑞琴更多>>
- 相关机构：东北农业大学中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省博士后基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 鸭β-防御素2基因的克隆、表达和表达产物的生物学特性分析被引量：12
- 2009年
- 【目的】从鸭组织中克隆鸭β-防御素(AvBD)2基因,在大肠杆菌中高效表达,检测重组鸭AvBD2蛋白的生物学特性。【方法】应用RT-PCR技术从鸭胰腺组织中扩增鸭AvBD2基因,根据已发现的禽β-防御素和部分哺乳类动物β-防御素-2的氨基酸序列构建系统进化树,将该基因克隆到大肠杆菌原核表达载体pGEX-6p-1上进行原核表达,对该重组蛋白进行纯化,测定体外抗菌活性与理化特性。【结果】鸭胰腺组织中克隆出鸭AvBD2基因的cDNA大小为195bp,编码64个氨基酸。同源性分析表明,鸭AvBD2与其它物种AvBD2同源性较高。凝胶电泳结果显示重组鸭AvBD2蛋白在原核高效表达(分子量约为32kD),对多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌有较高抗菌活性,对大肠杆菌与猪霍乱沙门氏菌的抗菌活性较弱。重组鸭AvBD2蛋白对上述细菌的最小抑菌浓度为15.25～125μg·ml-1,对猪霍乱沙门氏菌最小抑菌浓度大于400μg·ml-1。重组鸭AvBD2蛋白在-20～100℃或pH3～12条件下处理30min后仍有抗金黄色葡萄球菌作用。【结论】克隆并表达了鸭AvBD2基因,表达产物具有抗菌活性,对温度和酸碱度有较高的稳定性。
- 王瑞琴廖文艳马得莹韩宗玺刘胜旺
- 关键词：遗传进化重组蛋白抗菌活性
- 鸭β-防御素9基因的克隆、组织分布及其原核表达被引量：13
- 2009年
- 【目的】从鸭组织中克隆鸭β-防御素9(AvBD9)基因,在原核表达重组鸭AvBD9蛋白;研究重组鸭AvBD9蛋白的体外抗菌活性与理化特性。【方法】采用RT-PCR法,从鸭肝脏组织中扩增鸭AvBD9基因,测定该基因在鸭各组织器官中的分布;将鸭AvBD9基因克隆到大肠杆菌原核表达载体pGEX-6p-1上,构建重组表达质粒pGEX-duckAvBD9,将重组质粒转化大肠杆菌BL21,用IPTG诱导表达;亲和层析纯化蛋白,利用薄层平皿琼脂糖孔穴扩散法测定重组鸭AvBD9蛋白的体外抗菌活性与理化特性。【结果】从鸭肝脏组织中克隆得到鸭AvBD9基因,序列分析表明该基因大小为204bp,前体肽包括67个氨基酸残基。AvBD9基因在鸭体内广泛分布。SDS-PAGE电泳表明鸭AvBD9基因在大肠杆菌中高效表达,表达的重组鸭AvBD9融合蛋白以包涵体的形式存在,分子量约31kD。重组鸭AvBD9蛋白对大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、嗜酸乳杆菌、枯草芽胞杆菌有抗菌活性,在-70～100℃或pH3～10处理30min后仍有抗多杀性巴氏杆菌作用。【结论】鸭AvBD9基因为204bp,编码67个氨基酸残基,在鸭组织中广泛分布。重组鸭AvBD9蛋白基因在大肠杆菌中高效表达,该重组蛋白具有广谱的抗菌活性,对温度和酸碱性有较高的稳定性。
- 廖文艳马得莹刘胜旺韩宗玺
- 关键词：重组蛋白抗菌活性
- 鸡β-防御素基因的克隆、序列分析及其在组织中的分布被引量：14
- 2008年
- 本研究采用RT-PCR法,分别从鸡肝脏和舌组织中扩增到鸡β-防御素(Gallinacin,Gal)Gal-6、Gal-8与Gal-9基因,经序列测定表明,Gal-6、Gal-8和Gal-9大小分别为201、204和201 bp,其成熟肽分别由67、68和67个氨基酸残基组成。组织表达分析表明,Gal-6基因在鸡体内各组织器官中广泛地表达,在鸡皮肤、舌、心脏、小肠、胸肌、肝脏、肾脏、法氏囊、脾脏和胰腺中表达量较高;在肺脏、睾丸和骨髓中也有一定量表达。相比之下,Gal-8在鸡体内的表达较为局限,Gal-8基因仅在舌、小肠、肺脏和肝脏中大量表达。Gal-9基因在鸡体内组织中分布也较广泛,在舌和小肠中大量表达,在气管、肺脏、肝脏、肾脏、骨髓和胸腺有少量表达。
- 马得莹刘胜旺李一经单安山
- 关键词：抗菌肽Β-防御素基因表达
- 重组鸡β-防御素10蛋白的原核表达及其理化特性的分析
- ＜正＞鸡抗菌肽属β-防御素类,分子中氨基酸残基数量为60～100个,为禽类先天性免疫的重要组成部分,在禽的防御系统中发挥重要作用。鸡β-防御素（Avian beta-defensin,AvBD）与其他来源的抗菌肽功能相似...
- 廖文艳马得莹
- 关键词：融合蛋白抗菌活性
- 文献传递
- 重组鸡抗菌肽Gallinacin-9的原核表达及其抗菌活性的鉴定被引量：17
- 2008年
- 采用RT-PCR方法,从鸡舌组织中扩增到Gallinacin-9(Gal-9)基因,测序表明Gal-9为201 bp,其成熟肽由67个氨基酸残基组成。进一步将克隆的Gal-9基因亚克隆到大肠杆菌原核表达载体pGEX-6p-1的EcoRⅠ和SalⅠ双酶切位点上,构建重组表达质粒pGEX-Gal-9,经序列分析鉴定确证目的基因克隆入载体的预期位点。将重组质粒转化大肠杆菌BL21,于37℃诱导培养不同时间,SDS-PAGE电泳表明该基因在大肠杆菌中高水平表达,表达的重组鸡Gal-9融合蛋白相对分子质量约为32 ku。重组蛋白占菌体总蛋白的40%。表达的重组鸡Gal-9融合蛋白以包涵体的形式存在。重组蛋白经纯化后,分别以对数生长中期的大肠杆菌BL21(DE3-)株与致病性链球菌CAB株为检测菌,利用薄层平皿琼脂糖孔穴扩散法测定了重组Gal-9蛋白的抗菌活性,结果表明,重组Gal-9对这2种细菌都具有抗菌活性。
- 韩宗玺马得莹刘胜旺李一经
- 关键词：融合蛋白抗菌活性
- 鸡β-防御素基因的克隆、序列分析及其在组织中的分布
- ＜正＞本研究设计三对引物:AvBD9:5’-ATGAGAATCCTTTTCTTCCTTGTTGC-3’（上游）,5’-TTAG- GAGCTAGGTGCCCATTTGCAGC-3’（下游）;AvBD10:5’-ATGAA...
- 马得莹单安山
- 关键词：抗菌肽Β-防御素
- 文献传递
- 重组鸡β-防御素6基因的表达和生物学特性的研究被引量：15
- 2009年
- 从鸡骨髓细胞中分离提取总RNA,经过RT-PCR扩增出鸡β-防御素-6(AvBD6)基因。经克隆测序表明扩增出的cDNA碱基数为204bp,编码68个氨基酸残基。根据已发现的禽β-防御素和鼠β-防御素-6的氨基酸序列构建系统进化树。发现鸡AvBD6氨基酸序列与鸡AvBD7氨基酸序列同源性最高,为62.7%。将该基因克隆到大肠杆菌原核表达载体pGEX-6p-1上,进行原核表达。SDS-PAGE电泳表明,表达的重组鸡AvBD6融合蛋白分子量约为32ku。对该重组蛋白进行纯化与体外抗菌活性的测定。结果表明,重组鸡AvBD6融合蛋白对多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌有较高抗菌活性,对大肠杆菌的抗菌活性较弱,对猪霍乱沙门氏菌无抗菌活性。重组鸡AvBD6蛋白对上述细菌的最小抑菌浓度范围为31.25μg/mL～250μg/mL。此外,重组鸡AvBD6蛋白对温度和酸碱度有较高的稳定性。
- 韩宗玺廖文艳王瑞琴邵昱昊马得莹
- 关键词：遗传进化抗菌活性
- 重组鸡β-防御素5-β-防御素10双分子蛋白的构建及其理化特性的初步分析
- ＜正＞本研究在前期研究的基础上,设计一对表达用引物,上游引物:5’-gtcgaccaatgaagatcctctgcc-3’,下游引物:5’-gcggccgctactgcgccggaatcttggc-3’。以重组 pMD1...
- 马得莹
- 关键词：抗菌活性
- 文献传递
- 重组鸡β-防御素10蛋白的原核表达及其抗菌活性的测定被引量：17
- 2008年
- 鸡抗菌肽属β-防御素类,在鸡的先天性免疫中发挥重要作用。本研究将克隆得到的鸡β-防御素-10基因(AvBD10)亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中构建了重组表达质粒pGEX-AvBD10。将重组质粒转化至BL21,于37℃用IPTG诱导培养不同时间,SDS-PAGE电泳与灰度扫描显示该重组蛋白表达量占菌体总蛋白的34.3%。表达的AvBD10融合蛋白以包涵体的形式存在,分子量约为31ku。重组蛋白经纯化后,以对数生长中期的大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、嗜酸乳杆菌、枯草芽胞杆菌和猪霍乱沙门氏菌为检测菌,利用薄层平皿琼脂糖孔穴扩散法测定了重组鸡AvBD10蛋白的抗菌活性。结果显示,重组鸡AvBD10蛋白对大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、嗜酸乳杆菌、枯草芽胞杆菌有抗菌活性。此外,重组鸡AvBD10蛋白在-70℃～100℃及在pH4～pH10条件下仍具有抗菌活性。
- 廖文艳马得莹韩宗玺刘胜旺
- 关键词：融合蛋白抗菌活性
- 重组鸡β防御素5的原核表达及其抗菌活性的鉴定
- ＜正＞多年来,饲用抗生素被广泛地用于降低畜禽类发病率和维持健康。然而,长期使用抗生素,尤其是人类常用抗生素会导致抗生素在畜产品中残留及细菌耐药性的产生,尔后通过食物链威胁人类健康。因此,生产者们迫切需要一种既有效又有利于...
- 马得莹单安山
- 关键词：抗菌肽融合蛋白抗菌活性
- 文献传递
