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国家自然科学基金(30872993): 作品数：15 被引量：33H指数：3; 相关作者：夏海滨赵俊丽王东阳冯飞雪刘世海更多>>; 相关机构：陕西师范大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

人白介素24单克隆抗体的制备与鉴定: 2011年; 目的:制备抗白细胞介素24(Interleukin 24,IL-24)的单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法:应用分子生物学技术,构建含人IL-24编码序列的原核表达载体,表达并纯化了人IL-24融合蛋白。用纯化人IL-24融合蛋白免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,用间接ELISA方法筛选杂交瘤细胞,有限稀释法进行亚克隆,采用免疫印迹及免疫组化染色对抗体的特异性进行了鉴定。结果:获得3株能稳定分泌抗IL-24单抗的杂交瘤细胞,分别命名为1G2,3F4,4A6。通过免疫印迹及免疫组化染色检测显示,这3株单抗均能够与IL-24特异性结合。结论:成功制备抗IL-24单克隆抗体,为进一步探索IL-24在抗肿瘤中的作用机制奠定了基础。; 刘世海李荣华王东阳王丽娴夏海滨; 关键词：白细胞介素24 原核表达杂交瘤单克隆抗体

经嵌合纤维蛋白Ad5/35修饰的双表达hIL-12和hIFN-α2a新型腺病毒载体的构建及体外实验研究: 2013年; 目的:构建经嵌合纤维蛋白Ad5/35修饰的双表达hIL-12和hIFN-α2a的新型腺病毒载体并进行体外实验研究。方法:采用常规基因克隆和同源重组技术,构建在E3区携带hIL-12B(p40)和在纤维蛋白及E4区之间携带hIFN-α2a及eGFP表达框的经嵌合纤维蛋白Ad5/35修饰的嵌合型腺病毒骨架质粒载体pAd5/35-Backbone.E3-CMV-hIL-12B(p40)/E4-hIFN-α2a-eGFP。此外,采用分子克隆手段构建携带hIL-12A(p35)的腺病毒E1穿梭载体pAd5-E1-CMV-hIL-12A(p35)。PCR法鉴定腺病毒骨架载体及穿梭载体质粒。将上述所获得的两种质粒载体经过PacI线性化后共转染HEK293细胞包装新型病毒载体。将纯化的腺病毒感染人恶性胶质瘤细胞U87MG,48小时后,荧光显微镜下观察报告基因eGFP的表达,RT-PCR检测hIL-12及hIFN-α2a目的基因的表达。结果:PCR法检测到所构建的腺病毒骨架载体及穿梭载体质粒成功携带所需的目的基因。成功包装并纯化获得新型腺病毒载体pAd5/35.E1-CMV-hIL-12A(p35)/E3-CMV-hIL-12B(p40)/E4-hIFN-α2a-eGFP。体外感染U87MG细胞,48h后荧光显微镜下可以观察到报告基因eGFP的表达,RT-PCR可以检测到hIL-12及hIFN-α2a目的基因的表达。结论:体外实验结果表明,成功制备的经嵌合纤维蛋白Ad5/35修饰的双表达hIL-12和hIFN-α2a新型腺病毒载体,为进一步探讨其在恶性脑胶质瘤动物模型中的体内治疗研究奠定了基础。; 赵静李星王顺娟王菲王东阳夏海滨

新生血管靶向肽NGR与肿瘤靶向治疗被引量：3: 2011年; NGR(Asn-Gly-Arg)是通过噬菌体展示技术筛选出来的能够和肿瘤新生血管特异结合的三肽模体,可以通过内皮细胞上的氨肽酶N(aminopeptidase N,亦称CD13)与新生血管发生特异性的结合。NGR多肽可以将多种药物分子和病毒载体靶向运输到肿瘤或者进行血管再生的组织中。NGR模体上的天冬酰胺脱酰胺后生成异天冬氨酸-甘氨酸-精氨酸异构体(isoDGR)。isoDGR是整联蛋白αvβ3的配体,可以作为一种新的肿瘤新生血管靶向肽用于肿瘤靶向治疗的研究。本文主要对NGR模体的结构和功能以及其在肿瘤靶向治疗中的应用作一综述。; 冯飞雪夏海滨; 关键词：NGR 新生血管肿瘤靶向治疗

白介素24的抗肿瘤机理被引量：2: 2011年; 白介素24(interleukin 24,IL-24)是利用消减杂交技术,从重组的纤维母细胞干扰素和密执毒素共同作用的黑色素瘤细胞株中筛选得到的一种高表达基因。由于IL-24能选择性地诱导肿瘤细胞凋亡,而对正常细胞没有细胞毒作用,因此在肿瘤治疗研究中受到人们广泛的重视。IL-24诱导肿瘤细胞凋亡的机理涉及多种信号途径,有些信号途径目前还不十分清楚。本文就IL-24通过启动不同的信号途径,诱导广泛的肿瘤细胞凋亡的机理作一综述,从而为IL-24抗肿瘤机理研究提供一些有用的信息。; 刘世海夏海滨; 关键词：白介素24 肿瘤细胞凋亡

腺病毒的标记方法: 2010年; 腺病毒载体具有滴度高、容量大及可以同时感染分裂与未分裂细胞等一系列优点,因此在基因治疗领域得到广泛应用。腺病毒颗粒的标记对于腺病毒生物学功能的基础研究及评估腺病毒载体的基因治疗效果具有重要意义。本文通过综述腺病毒标记的方法,回顾腺病毒标记技术的发展过程,同时期望为找到更好的标记腺病毒的方法以及其在基因治疗研究领域的进一步应用提供一些思路。; 赵俊丽夏海滨; 关键词：腺病毒病毒载体基因治疗

携带eGFP及人endostatin-K5的嵌合腺病毒载体Ad5/11的构建及其体外实验研究被引量：2: 2011年; 目的:构建携带报告基因eGFP及人内皮他丁en-dostatin-K5的嵌合型腺病毒载体Ad5/11。方法:采用重叠PCR及在细菌E.coli.BJ5183中同源重组的方法,获得表达eGFP报告基因的嵌合腺病毒骨架载体,然后以经PacI线性化的嵌合腺病毒载体骨架与PacI线性化的表达endostatin-K5的腺病毒E1穿梭载体共转染真核细胞HEK293细胞中获得携带报告基因eGFP及人endostatin-K5的嵌合型腺病毒载体Ad5/11-E1-CMV-endo-K5/E3-CMV-eGFP。以获得的嵌合型腺病毒载体感染U87MG细胞,在荧光显微镜观察eGFP的表达,采用RT-PCR检测endostatin-K5的表达;将所构建的嵌合病毒载体Ad5/11-E1-CMV-endo-K5/E3-CMV-eGFP与未经修饰的腺病毒载体Ad5-E1-CMV-eGFP在体外感染人胶质瘤细胞系A172及乳腺癌细胞系MDA-MB-231;通过荧光蛋白eG-FP的表达,比较它们对以上肿瘤细胞的感染效率。结果:嵌合病毒载体Ad5/11-E1-CMV-endo-K5/E3-CMV-eGFP可成功地表达eGFP及endostatin-K5。以经过修饰的嵌合型腺病毒载体Ad5/11-E1-CMV-endo-K5/E3-CMV-eGFP感染人脑胶质瘤细胞系A172及人乳腺癌细胞MDA-MB-231的感染效率,明显高于对照未经修饰的腺病毒载体Ad5-E1-CMV-eGFP。结论:携带eGFP及人endostatin-K5的嵌合型腺病毒载体Ad5/11,可明显提高对人脑胶质瘤细胞系A172及人乳腺癌细胞系MDA-MB-231的感染效率。; 王东阳刘世海李星赵俊丽陈皓冯飞雪王丽娴夏海滨; 关键词：腺病毒载体

四环素诱导调控表达系统的研究与应用被引量：7: 2011年; 四环素(Tet)诱导调控表达系统是在大肠杆菌Tn10转座子中特异的Tet抗性操纵子基础上建立起来的一种用于诱导基因表达的调控系统。经过近几年来的发展,衍生出了Tet-on、Tet-off两套调控系统;随着对Tet诱导调控表达系统的改进,其对基因表达调控的严谨性、诱导效率及安全性等方面逐步得到改善,并被广泛应用于基础研究及体内外的实验治疗研究。此外Tet诱导调控系统与其他诱导调控体系及新兴技术的联合应用,为疾病的基因治疗研究提供有力的手段。; 陈皓夏海滨; 关键词：四环素基因治疗

腺病毒载体衣壳蛋白质的遗传修饰被引量：1: 2010年; 腺病毒载体是最早用于基因治疗研究的病毒载体之一,也是目前肿瘤基因治疗中最为常见的病毒载体之一,其主要通过靶细胞表面的天然柯萨奇腺病毒受体(coxsackie and adenovirus receptor,CAR)感染宿主细胞。由于大多数肿瘤细胞表面该受体表达水平较低,降低了腺病毒载体对靶细胞的感染效率,从而制约了腺病毒载体在肿瘤基因治疗中的应用。因此,如何提高腺病毒载体对靶细胞的感染效率是腺病毒载体应用于肿瘤基因治疗的关键。目前对腺病毒载体衣壳蛋白质(capsid protein)的遗传修饰是提高其对宿主细胞感染效率的主要途径。本文将对这一领域的主要研究进展作一综述,为该方面的研究提供有用的信息。; 边晔冯飞雪夏海滨; 关键词：腺病毒载体遗传修饰肿瘤基因治疗

RNA干扰与肿瘤基因治疗被引量：1: 2009年; RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种由外源性或内源性双链RNA分子阻断或者降低同源基因表达的现象。由于RNAi对靶基因的沉默作用具有高效性、特异性等特点,近年来已广泛应用于基因治疗。肿瘤除早期进行手术及化疗等传统治疗手段外,目前尚无有效的治疗对策。采用RNAi技术的基因治疗手段为肿瘤的有效治疗带来了新的希望。本文将对RNAi干扰机制、RNAi在肿瘤基因治疗中的研究进展及其在应用过程中所面临的挑战作一综述。; 孙晓聪夏海滨; 关键词：小干扰RNA RNA干扰肿瘤基因治疗

RGD修饰携带tumstatin及eGFP新型腺病毒载体的构建及其表达研究: 2010年; 目的构建RGD修饰表达绿色荧光蛋白（eGFP）和肿瘤抑素（tumstatin）的新型腺病毒载体。方法PCR扩增tttrnstatin基因，经克隆后构建pAd5CMV／tumstatin穿梭载体。重叠PCR方法将RGD序列插入到Ad5纤维蛋白的HI环中，获得pMfiber-RGD穿梭载体。穿梭载体与腺病毒骨架载体线性化后共转化EcoliBJ5183，构建pAd-RGD-eGFP骨架载体。最后，使用磷酸钙法将pAd5-CMV／tumstatin穿梭载体和pAd-RGD-eGFP骨架载体共转化HEK293细胞。7-10d后收集细胞裂解物得到Ad—RGD-tumstatin／eGFP病毒。将经过修饰的Ad-RGD-tumstatin／eGFP和未修饰的Ad—WT-tumstatin／eGFP病毒分别感染脑胶质瘤U87MG细胞（病毒剂量分别为1、10、100Vp／细胞），通过观察其荧光强度评估其感染效率。以上两种病毒分别感染HeLa细胞，并分别采用RT-PCR及Western blotting检测tumstatin细胞mRNA及培养上清中蛋白的表达水平。结果病毒感染48h后，可观察到修饰后的腺病毒Ad-RGD-tumstatin／eGFP对U87MG细胞的感染效率明显高于未修饰的腺病毒斛WT-tumstatin／eOFP。RT-PCR及Western blotting可检测到感染Ad-RGD-tumstatin／eGFP后的HeLa细胞中tumstatin的转录和表达。结论成功构建经RGD修饰并表达tumstatin和eGFP基因的新型腺病毒载体，为进一步研究turnstatin在低表达柯萨奇一腺病毒受体的肿瘤中的作用奠定了良好基础。; 齐宗利王东阳边晔赵俊丽孙晓聪夏海滨; 关键词：RGD 腺病毒科肿瘤抑素

国家自然科学基金(30872993)

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