国家自然科学基金(30571663)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
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- 载体法筛选人巨细胞病毒截短UL54基因小干扰RNA靶位体系的建立
- 2008年
- 目的建立载体法筛选人巨细胞病毒（HCMV）截短UL54基因（UL54S）小干扰RNA（siRNA）靶位的体系。方法利用质粒pAVU6±27设计并构建2个小发夹RNA（shRNA）表达载体（psiUL54-1和psiUL54-2），与融合蛋白表达载体pUL54S-绿色荧光蛋白（EGFP）共转染AD293细胞，荧光显微镜观察融合蛋白荧光表达，RT-PCR法分析UL54SmRNA水平变化，流式细胞仪评价siRNA对融合蛋白的抑制作用，采用方差分析对流式细胞检测结果进行统计分析，筛选出有效的siRNA作用靶位。结果shRNA表达载体psiUL54—2与融合蛋白表达载体pUL54S-EGFP共转染AD293细胞48h后，pUL54S-EGFP、psiUL54-2共转染组EGFP表达量较pUL54S-EGFP、pAVU6±27共转染组下降；凝胶分析显示，psiUL54—2与pUL54S-EGFP共转染48h后，UL54S mRNA相对表达量为19．6，明显低于pUL54S-EGFP、psiUL54—1共转染组的96．6与对照组的100．0；psiUL54—1、pUL54S—EGFP共转染48h后对融合蛋白UL54S-EGFP表达无影响（P〉0．05），但psiUL54—2、pUL54S-EGFP共转染抑制融合蛋白UL54S—EGFP的表达（19．43×10^4±2．29×10^4比27．89×10^4±5．50×10^4，P＜O．01）。结论成功建立载体法筛选HCMV截短UL54S siRNA靶位体系，UL54S序列中1532～1550位点是有效的siRNA靶位点。
- 胡妙凤段群军陶然尚世强
- 关键词：巨细胞病毒病毒RNA干扰小分子干扰
- 融合蛋白表达质粒pUL54S-EGFP的构建及在AD293细胞中的表达
- 2008年
- 目的探讨构建人巨细胞病毒(HCMV)截短UL54(UL54S)基因融合增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达质粒pUL54S-EGFP转染人胚肾293细胞,瞬时表达UL54S和EGFP的可行性。方法采用PCR法扩增UL54s基因并将其克隆入真核表达载体pEGFP-N1中,采用脂质体法转染AD293细胞后通过荧光显微镜和流式细胞仪分析EGFP的表达情况。结果重组质粒pUL54S-EGFP转染AD293细胞12h后即可见到荧光蛋白的表达,至48h表达达高峰;转染48hpUL54S-EGFP组平均转染率为47%,平均荧光强度为547。结论重组质粒pUL54S-EGFP可在人胚肾293细胞内瞬时表达UL54S和EGFP融合蛋白,EGFP的表达可报告UL54基因的表达,质粒pUL54S-EGFP构建成功。
- 胡妙凤段群军陶然尚世强
- 关键词：人巨细胞病毒增强型绿色荧光蛋白
- RNA干扰对疱疹病毒的抑制作用被引量：1
- 2006年
- 疱疹病毒是儿童感染性疾病的常见病原体,可表现为潜伏感染和持续感染,甚至引起肿瘤的发生,严重威胁儿童健康。抗病毒药物作为目前疱疹病毒感染性疾病首选的治疗方法,其应用越来越受到药物毒副作用以及耐药问题的限制。RNA干扰(RNAi)作为一种新型的基因阻断技术与传统的基因敲除技术及反义技术相比,具有效能高、特异强、毒性低、作用迅速、操作简便等优点,因此它作为一种新型的抗病毒疗法被寄予厚望。此文就RNAi对疱疹病毒抑制作用的研究进展作了综述。
- 胡妙凤尚世强
- 关键词：单纯疱疹病毒RNA干扰
- Efficient inhibition of human cytomegalovirus DNA polymerase expression by small hairpin RNA in vitro
- INTRODUCTION Human cytomegalovirus(HCMV) is a main pathogen responsible for a variety of congenital defects an...
- Tao Ran,Hu Miao-feng,Duan Qun-jun,Shang Shi-qiang~* Lab Center,Children’s Hospital,Zhejiang University School of Medicine,Hangzhou 310003
- 文献传递
