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国家自然科学基金(30571639)

作品数：9 被引量：69H指数：4
相关作者：郭定宗魏来张耀杨世锦祝海宝更多>>
相关机构：华中农业大学北京大学徐州医学院附属医院更多>>
发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家科技支撑计划更多>>
相关领域：农业科学医药卫生生物学化学工程更多>>

文献类型

  • 9篇中文期刊文章

领域

  • 4篇农业科学
  • 3篇医药卫生
  • 2篇生物学
  • 1篇化学工程

主题

  • 2篇乙型
  • 2篇细胞
  • 2篇奶牛
  • 2篇基因
  • 2篇肝炎
  • 2篇肝炎病毒
  • 2篇病毒
  • 1篇代谢
  • 1篇代谢性
  • 1篇代谢性疾病
  • 1篇蛋白
  • 1篇性疾病
  • 1篇血清
  • 1篇氧化氮
  • 1篇氧自由基
  • 1篇一氧化氮
  • 1篇胰岛
  • 1篇胰岛素
  • 1篇胰岛素样
  • 1篇胰岛素样生长...

机构

  • 5篇华中农业大学
  • 3篇北京大学
  • 1篇西南林学院
  • 1篇徐州医学院附...
  • 1篇深圳出入境检...

作者

  • 5篇郭定宗
  • 3篇魏来
  • 2篇祝海宝
  • 2篇杨世锦
  • 2篇张耀
  • 1篇丛旭
  • 1篇王红
  • 1篇蒋栋
  • 1篇张艳红
  • 1篇韩方正
  • 1篇吴庆儒
  • 1篇杜绍财
  • 1篇杨雪
  • 1篇潘孝本
  • 1篇韩进超
  • 1篇汪莉萍
  • 1篇李家奎
  • 1篇李素华
  • 1篇张桂荣
  • 1篇黎兵

传媒

  • 2篇中国兽医学报
  • 2篇动物医学进展
  • 1篇中华检验医学...
  • 1篇中国奶牛
  • 1篇中华肝脏病杂...
  • 1篇Chines...
  • 1篇中国医药生物...

年份

  • 1篇2013
  • 1篇2010
  • 1篇2009
  • 5篇2007
  • 1篇2006
共 9 条 记 录，以下是 1-9
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排序方式：
乙型肝炎病毒rtA181V/T和rtN236T变异阿德福韦耐药株表达质粒的构建及其病毒学特征被引量：2
2007年
目的构建乙型肝炎病毒阿德福韦耐药变异株(rtA181T/V 和 rtN236T)表达载体并对其体外复制能力和耐药性等病毒学特征进行体外研究。方法以含1.2倍拷贝 HBV DNA 全基因的质粒 PUC-HBV1.2WT为模板,PCR 定点诱变技术构建含阿德福韦耐药株(rtA181V/T和 rtN236T)的目的质粒,测序验证并利用变异株特异检测引物进行 PCR 检测;转染人肝癌细胞系 HepG2,ELISA 检测上清中分泌的 HBsAg 和 HBeAg 水平,荧光定量 PCR 检测上清中病毒 DNA 水平,Southern blotting 检测胞浆 HBV 复制中间体水平,比较野生株和变异株体外复制能力和对阿德福韦敏感性的差异。结果构建的 rtA181T、rtA181V 和 rtN236T 表达质粒可用于变异株特异检测引物检测相应变异的阳性对照品;转染 HepG2细胞后均可获得高水平的病毒抗原表达,胞浆和细胞培养上清中可以检测到 HBV 复制中间体和病毒颗粒的存在;三种变异均可单独导致对阿德福韦耐药,IC_(50)为野生株的2.8至4.7倍;体外复制能力较野生株降低,分别为野生株的94.2%、89.0%和77.7%。结论成功构建乙型肝炎病毒阿德福韦变异株表达质粒并应用于变异株特异引物扩增检测技术,体外实验证实 rtA181V/T 和rtN236T 单独变异均可导致 HBV 对阿德福韦耐药,且变异株的病毒复制能力较野生株有所下降。
王江华李俊强蒋栋费然丛旭杜绍财魏来
关键词：肝炎病毒乙型阿德福韦
胰岛素样生长因子-1对奶牛成骨细胞增殖及分化的影响被引量：1
2010年
研究了外源性胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对体外培养的奶牛成骨细胞增殖、分化及矿化的影响。应用组织块移行法分离奶牛成骨细胞,姬姆萨染色及碱性磷酸酶(ALP)染色进行鉴定。MTT法检测不同质量浓度IGF-1对成骨细胞增殖的影响,比色法检测及放射免疫法(RIA)分别测定细胞基质ALP活性及骨钙素(OC)水平,评价细胞分化功能。结果显示,1～200μg/LIGF-1均能促进奶牛成骨细胞增殖,100μg/L组具有最大刺激效应,且IGF-1干预组细胞光密度值(D值)从第1天到第5天逐渐增加,第7天降低。与对照组相比,10μg/L与100μg/LIGF-1均可显著增强ALP活性及OC水平,增幅达20%～180%(P<0.05或者P<0.01)。结果表明,IGF-1是奶牛成骨细胞增殖和分化代谢促进剂,因此推测IGF-1可以成为动物骨代谢性疾病潜在治疗手段。
李素华尹红斌郭定宗周文君黎兵
关键词：胰岛素样生长因子-1骨代谢性疾病成骨细胞奶牛
Frequency ofT-cell FoxP3＋ Treg and CD4＋/CD8＋ PD-1 expression is related to HBeAg seroconversion in hepatitis B patients on pegylated interferon被引量：15
2013年
MA HuiZHANG Heng-huiWEI Lai
关键词：HBEAG聚乙二醇化
奶牛骨钙素基因的克隆与原核表达被引量：6
2007年
以奶牛骨组织提取的RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增出奶牛骨钙素全长cDNA,然后将扩增产物重组到PMD-18T载体中,测定了全基因的核苷酸序列。序列分析表明,奶牛骨钙素全长cDNA为303bp,编码100个氨基酸,与GenBank中的X53699的序列完全相同。通过加端PCR技术连接单链DNA片段人工定点同义突变,将奶牛骨钙素成熟蛋白基因中的大肠杆菌稀有密码子同义突变为大肠杆菌常用密码子并亚克隆至PET-32a表达载体,转化到宿主菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导后,成功表达出奶牛骨钙素融合蛋白。
祝海宝郭定宗李家奎杨世锦周东海杨雪
关键词：奶牛骨钙素克隆突变
催乳素结构与功能研究进展被引量：33
2007年
催乳素是由脑垂体前叶分泌的一种多肽激素。哺乳动物的催乳素都是单链多肽,由199个氨基酸组成,相对分子质量约23 ku,分子内含3个二硫键,多数催乳素分子以单体形式存在于循环系统中。同时,血液中还存在以数个催乳素聚合而成的大分子和较小分子形式的催乳素。在不同种属中,催乳素的原始序列具有一定差异,异种的哺乳动物间催乳素的同源性在60%以上。催乳素的分泌受下丘脑催乳素释放抑制因子和催乳素释放因子的双重调节。催乳素有300多种不同的生物功能,在哺乳动物体内,催乳素对乳腺发育与泌乳、性腺发育、机体免疫功能、机体应激反应、体细胞的分裂与增值等相关功能有一定的调节作用。
张耀郭定宗
关键词：催乳素分子结构
细胞人基因组DNA对荧光实时定量PCR检测细胞培养液中HBV DNA的影响
2007年
目的 研究细胞人基因组DNA 对荧光实时定量PCR(FQ-PCR)检测细胞培养上清液中HBV DNA 含量的可能干扰影响,提高细胞培养上清液中HBV DNA 定量检测的准确性.方法 取HBV DNA 阳性血清,以DMEM 培养基分别配制出HBV DNA 拷贝数为5×107/ml(高拷贝组)、5×105/ml(中拷贝组)、5×103/ml(低拷贝组)的不同样本组;各组内再分5 个亚组,分别加入终浓度为0(对照组)、12.5、25、50、100 μg/ml 的细胞人基因组DNA(提取自人肝癌细胞系HepG2).以不含HBV DNA 阳性血清的DMEM 培养基加入上述浓度细胞人基因组DNA 为空白组.采用基于TaqMan 技术的FQ-PCR 检测各组样本的HBV DNA 拷贝数并绘制HBV DNA 定量曲线.每组均重复检测10 次.根据HBV DNA 定量检测结果确定受干扰样本和未受干扰样本,分别计算其定量曲线线性期斜率和平均扩增效率.结果 高拷贝组中加入不同浓度细胞人基因组DNA 的各个亚组与相应对照组比较,HBV DNA 拷贝数差异均无统计学意义.中拷贝组中加入细胞人基因组DNA 浓度为50和100 μg/ml 的2个亚组,其HBV DNA 拷贝数结果明显高于相应对照组,增高可达50～100倍,且重复性差.低拷贝组中只有加入细胞人基因组DNA 浓度为12.5μg/ml的亚组可通过提高基线值取得与相应对照组接近的定量检测结果,而其他亚组HBV DNA 定量曲线指数扩增期斜率明显异常,无法确定其定量检测结果.空白组各亚组均未观察到明显的HBV DNA 指数扩增期.受干扰样本线性期斜率(-1.01±0.06)和平均扩增效率(90.0%±2.1%)与对照组样本(分别为-1.52±0.06,97.0%±0.4%)比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 细胞人基因组DNA 对应用FQ-PCR 技术进行的HBV DNA 定量检测可产生非特异性干扰,尤其在HBVDNA 拷贝水平较低时.在细胞培养上清液作HBV DNA 定量检测时应尽量去除细胞人基因组DNA.
潘孝本韩进超朱凌高燕魏来
关键词：聚合酶链反应
拉米夫定治疗前后乙型肝炎病毒P区基因的动态变化被引量：5
2006年
目的研究拉米夫定治疗前后慢性乙型肝炎患者体内乙型肝炎病毒P基因区的变异情况。方法从5例慢性乙型肝炎患者拉米夫定治疗前和治疗12个月的血清标本中,扩增目的片段,阳性结果双酶切后克隆至JM105感受态细胞。每份标本随机挑取20个阳性克隆,以错配聚合酶链反应一限制性片段长度多态性分析法检测YMDD基因序列,出现变异者进行双向测序。结果 5例慢性乙型肝炎患者在拉米夫定治疗12个月后,其中2例HBV DNA为阴性;2例HBV DNA转阴后又转阳,测序结果提示出现M552I变异;1例HBV DNA始终阳性,和治疗前一样存在D553G的变异。结论 D553G变异可能是慢性乙型肝炎患者拉米夫定治疗无效的原因之一;拉米夫定治疗后出现的乙型肝炎病毒基因组P 区YMDD变异是抗病毒药物诱导的结果。
封波魏来陈明韩方正汪莉萍
关键词：肝炎病毒乙型基因
糖皮质激素对家兔血清氧自由基的影响被引量：3
2009年
氧自由基在很多的疾病发展过程中发挥重要的调节作用。本试验的目的是通过研究糖皮质激素诱导的骨质疏松模型血清抗氧化物酶活性、脂质过氧化和NO水平变化,从而明确氧自由基是否参与调节糖皮质激素诱导的骨质疏松症的发病过程。试验将24只新西兰大白兔,随机分为3组,并分别肌肉注射醋酸泼尼松龙(0.5 mg/kg)、维生素C(100 mg/kg)结合醋酸泼尼松龙(0.5 mg/kg)、生理盐水,历时9周。试验结果表明,醋酸泼尼松龙诱导家兔血清OH-、H2O2、NO水平以及碱性磷酸酶活性相对于生理盐水注射组显著升高,而SOD活性及骨密度明显降低,而维生素C干预组血清自由基水平在明显降低的同时,骨量的丢失也减慢。结果说明,氧自由基在糖皮质激素诱导的骨质疏松症发病过程中具有正向促进作用,并且这种作用可以被抗氧化剂所消弱。
祝海宝郭定宗杨世锦王红张耀郭慧田张艳红
关键词：糖皮质激素自由基一氧化氮维生素C
BSA对牛结核抗体ELISA检测的影响被引量：4
2007年
分别研究了封闭液、血清稀释液及酶标二抗稀释液中BSA成分对牛结核抗体ELISA检测的影响。结果显示,酶标二抗稀释液中BSA的存在使ELISA检测值普遍偏低,且BSA的含量越高,检测值越低;为了提高ELISA检测值,使其达到理想检测效果,必须提高酶标二抗的使用浓度。BSA中可能存在的牛血清抗体杂质对酶标二抗起到了“中和”作用,降低了酶标二抗与目标抗体结合的实际浓度,使检测结果普遍偏低。
吴庆儒郭定宗张桂荣李文波
关键词：牛血清白蛋白酶联免疫吸附试验
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