国家自然科学基金(30571647)
- 作品数：7 被引量：52H指数：4
- 相关作者：李洪涛宋建新覃慧敏王丽丽叶露更多>>
- 相关机构：华中科技大学温州市中医院三峡大学第一临床医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省卫生厅科研基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 穿心莲内酯抑制铜绿假单胞菌外排泵MexAB-OprM的作用被引量：16
- 2010年
- 目的:研究穿心莲内酯对铜绿假单胞菌外排泵MexAB-OprM的作用及其机制。方法:采用实时荧光定量PCR分别检测PAO1和MexAB-OprM过度表达株Mex1、Mex2、Mex3培养3h及加入穿心莲内酯0,100,200mg·L-1再培养6h的MexB基因表达量。采用Mueller-Hinton倍比稀释法,检测头孢他啶、头孢匹罗、氯霉素、左氧氟沙星、卡那霉素、依米配能、美罗培南对上述菌株的最小抑菌浓度(MIC)。结果:培养9h与3h相比,PAO1、Mex1、Mex2、Mex3的MexB表达量显著升高,P值分别为0.031,0.027,0.030,0.012。穿心莲内酯100,200mg·L-1组与对照组相比,头孢他啶、头孢匹罗、左氧氟沙星、美罗培南对PAO1、Mex1、Mex2、Mex3株菌的MIC分别降低50%,75%,75%和50%～75%,而对PAO1株QS信号分子C4-HSL的分泌差异无显著性。结论:外排泵MexAB-OprM主要在稳定生长期表达,穿心莲内酯对铜绿假单胞菌外排泵MexAB-OprM转录表达的抑制作用使其可恢复部分抗菌药物的敏感性,而这种作用并非通过抑制C4-HSL的分泌而实现。
- 郭威周莹叶露王丽丽吴春明覃慧敏李洪涛宋建新
- 关键词：穿心莲内酯铜绿假单胞菌外排泵密度感应
- 铜绿假单胞菌密度感应系统自体诱导因子3OC12-HSL对人肠道上皮细胞Caco-2凋亡的影响及其机制
- 2010年
- 目的 探讨铜绿假单胞菌密度感应系统自体诱导因子3OC12-HSL对肠道上皮细胞Caco-2凋亡的影响及其深入机制.方法 3OC12-HSL干扰Caco-2细胞4 h后,采用MTT法检测Caco-2细胞干扰前后细胞活性变化;Annexin V-FTTC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡率的变化;Western blot检测Caco-2细胞中凋亡相关蛋白p-p38/MAPK及NF-κB表达变化.结果 MTT结果 显示,3OC12-HSL可以抑制Caco-2细胞活性,并呈剂量依赖性（P〈0.05）.流式细胞术结果 表明,Caco2细胞凋亡率随3OC12-HSI干扰浓度增加而增加（P〈0.05）.Western blot结果 显示,3OC12-HSL处理后,细胞p-p38/MAPK及NF-κB蛋白表达水平增加.结论 3OC12-HSL可以抑制肠道上皮细胞Caco-2活性,诱导细胞发生凋亡,这种作用可能和p38/MAPK通路激活以及NF-κB的激活有关.
- 叶露李洪涛王丽丽邢铭友宋建新
- 关键词：密度感应系统CACO-2细胞
- 穿心莲内酯对铜绿假单胞菌QS毒力因子的影响被引量：24
- 2006年
- 目的:观察穿心莲对铜绿假单胞菌QS系统调控的毒力因子的影响。方法:分别测定12.5 mg.mL-1穿心莲内酯对铜绿假单胞菌生长曲线、绿脓菌素、胞外蛋白水解酶和弹性蛋白酶活性的影响,同时检测穿心莲内酯对QS系统双突变株PAO-JP2株绿脓菌素、蛋白水解酶和弹性蛋白酶活性的作用。结果:穿心莲内酯对铜绿假单胞菌生长无明显影响。穿心莲内酯能明显抑制绿脓菌素的分泌、胞外蛋白水解酶和弹性蛋白酶活性。穿心莲内酯对PAO-JP2绿脓菌素、胞外蛋白水解酶和弹性蛋白酶活性无明显影响。结论:穿心莲内酯可能通过抑制铜绿假单胞菌毒力因子产生而实现抗感染作用。
- 李洪涛覃慧敏王卫华李国军吴春明宋建新
- 关键词：穿心莲内酯铜绿假单胞菌毒力因子
- 穿心莲内酯对铜绿假单胞菌PAO1株MexAB-OprM外排泵mRNA表达的影响被引量：12
- 2007年
- 目的建立实时荧光定量PCR法检测铜绿假单胞菌MexAB-OprM mRNA水平的表达.探讨中草药穿心莲内酯对铜绿假单胞菌外排泵MexAB-OprM表达情况的影响。方法克隆铜绿假单胞菌mexAB-oprM操纵元中mexB基因和30S rRNA基因rpsL,分别构建相应质粒作为实时荧光定量PCR DNA标准品。以不同浓度穿心莲内酯作用铜绿假单胞菌PAO1株,采用实时荧光定量PCR法检测PAO1菌株中mexB和rpsL基因mRNA的表达水平。结果成功构建标准曲线质粒,50、100、150和200μg/mL穿心莲内酯作用后PAOI mexB基因mRNA表达量分别为0.04±0.03、0.06±0.07、0.09±0.03和0.04±0.03,对照组为0.24±0.04,差异有统计学意义(P<0.05),穿心莲内酯组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论穿心莲内酯可在mRNA水平抑制外排泵Mex- AB-OprM的表达,这可能是其抗感染机制之一。
- 李洪涛吴春民覃慧敏李国军宋建新
- 关键词：穿心莲内酯铜绿多药信使
- 铜绿假单胞菌密度感应信号分子OdDHL对小鼠肥大细胞作用观察
- 2009年
- 目的通过化学合成铜绿假单胞菌密度感应（quorum sensing，QS）信号分子OdDHL，并观察该分子对小鼠肥大细胞生物学作用。方法通过化学方法合成OdDHL分子，经质谱、磁共振和高效液相色谱确定其结构和纯度，并采用OdDHI．分子感应菌株检测其生物活性。以不同浓度OdDHL分子作用于小鼠肥大细胞系P815，观察不同时间点细胞活力改变、凋亡现象以及胞内钙离子变化。结果成功合成具有生物活性的OdDHL分子，该分子能以时间、剂量依赖方式抑制细胞活力，并能诱导细胞凋亡，同时可卜调胞内钙离子浓度。结论铜绿假单胞菌OdDHL分子可诱导P815细胞凋亡并上调胞内钙离子浓度。
- 李洪涛王丽丽叶露毛艳谢旭华宋建新
- 关键词：铜绿假单胞菌密度感应系统肥大细胞
- 建立SYBR Green实时RT-PCR定量方法检测铜绿假单胞菌MexAB-OprM mRNA水平被引量：6
- 2007年
- 目的建立检测铜绿假单胞菌MexAB-OprMmRNA含量的实时荧光定量逆转录（RT-）PCR方法，并用其测定铜绿假单胞菌PAE01株和MexAB-OprM过度表达株mexAB-oprM的基因表达水平。方法基于SYBRGreenI荧光探针技术，构建克隆载体pMDl8-T-mexB和pMDl8-T-rpsL作为标准品，建立实时荧光定量RT-PCR方法；在Rotor-gene3000型检测仪上测定了PAE01株和MexAB-OprM过度表达株的MexAB-OprMmRNA的表达量。结果所建立的实时RT-PCR方法的mexB、rpsL在（10^2～10^9）拷贝／ml、（10^4～10^9）拷贝／ml范围内，Ct值与起始模板浓度具有良好的线性关系，二者相关系数分别为0．99977和0．99999；MexAB-OprM过度表达株的mexB相对含量显著高于PAE01株（P〈0．01）。结论成功建立了检测铜绿假单胞菌mexAB-oprM基因表达含量的荧光定量方法，MexAB-OprM过度表达株的MexAB-OprMmRNA含量明显高于PAE01株。
- 吴春明李洪涛覃慧敏李国军宋建新
- 关键词：铜绿假单胞菌聚合酶链反应
- 铜绿假单胞菌pvdQ基因在肠道上皮细胞Caco-2中的表达及其功能研究被引量：1
- 2010年
- 目的探讨铜绿假单胞菌pvdQ基因阻止密度感应系统自体诱导因子3O-oxo-C12-HSL干扰肠道上皮细胞Caco-2的作用。方法构建带有FLAG标签的pvdQ基因真核表达质粒pIRES2-EGFP-pvdQ并鉴定,将带有pvdQ基因的质粒转染入Caco-2细胞,并用Western blot法检测pvdQ基因在Caco-2细胞中的表达。3O-oxo-C12-HSL干扰转染前后的Caco-2细胞,利用质谱分析仪检测Caco-2细胞上清中3O-oxo-C12-HSL浓度变化。结果经酶切鉴定pvdQ基因真核表达载体构建成功,Western blot检测结果显示pvdQ基因能在人肠道上皮细胞Caco-2中表达。质谱分析结果显示,转染pvdQ基因后,Caco-2细胞上清中3O-oxo-C12-HSL浓度明显减少(P<0.05)。结论 pvdQ基因成功在人肠道上皮细胞Caco-2中表达,并降解细胞周围3O-oxo-C12-HSL分子,为进一步研究pvdQ基因对Caco-2细胞的保护作用奠定基础。
- 叶露李洪涛王丽丽邢铭友宋建新
- 关键词：密度感应系统CACO-2细胞
