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HSPCO11基因在人毛乳头细胞表达的生物学功能被引量：1: 2007年; 目的探讨HSPC011基因在人毛乳头细胞表达的生物学功能。方法应用Nucleo-lector^TM基因转染技术，分别将质粒pCI-neo、绿色荧光蛋白质粒pEGFP-N1、真核表达重组质粒pCI-neo／HSPC011转染人毛乳头细胞和3T3细胞，了解HSPC011基因表达对这些细胞生长特性的影响。结果通过观察绿色荧光蛋白在人毛乳头细胞和3T3细胞的表达，发现Nucleofector^TM基因转染效率分别约为70％和30％。HSPC011基因在人毛乳头细胞表达后，细胞形态幼稚而类似于3T3细胞，但其凝集性生长特性保持不变；HSPC011基因表达对毛乳头细胞的增殖活性无明显影响。HSPC011基因转染3T3细胞后，对3T3细胞的生长特性无任何影响。结论初步体外实验表明，HSPC011基因在毛乳头细胞表达可能具有调节细胞分化的作用。; 杨卫兵郝飞杨希川宋志强杨斌王继文; 关键词：毛囊毛乳头细胞基因生物学功能

无血清培养基培养人毛乳头细胞的研究被引量：3: 2006年; 目的探讨无血清培养液培养人头皮毛乳头细胞(dermal papillae cells,DPC)的可行性,并研究其生长特性。方法预先应用纤维连接蛋白处理细胞培养瓶(板)；采用Williams E无血清培养液并补充ITS(牛胰岛素、转铁蛋白和亚硒酸盐)培养第2代DPC,倒置相差显微镜下观察细胞生长状态,采用MTT评价其增殖状态并绘制其生长曲线。结果在无血清培养条件下,DPC在2～4h内贴壁。2～3d后细胞可相互融合．未见细胞明显增殖；培养4d后细胞连接开始中断。形成孤立的细胞或细胞团,并可见细胞的脱落；培养1～2周后,细胞大多脱落。给予含4%小牛血清的DMEM培养10h后,在残余的细胞团周围长出放射状排列的细胞；生长曲线显示DPC的生长呈现停滞期和缓慢生长期,未见指数生长期。结论采用无血清培养基可以培养DPC,但其培养条件有待优化。; 夏汝山郝飞杨希川宋志强钟白玉尹锐; 关键词：毛乳头细胞培养

线粒体核糖体蛋白与线粒体疾病被引量：1: 2005年; 近年来蛋白质组学技术和生物信息学方法的结合应用使人线粒体核糖体全部78个组成蛋白编码基因的序列及染色体定位得以明确。本文在此基础上总结了人线粒体核糖体蛋白基因突变与多种线粒体疾病之间存在的分子遗传学联系,提示人线粒体核糖体蛋白异常可能是线粒体疾病新的病因。; 杨斌郝飞; 关键词：线粒体疾病分子遗传学

凝集性生长和非凝集性生长人毛乳头细胞线粒体的结构及膜电位比较被引量：1: 2006年; 目的比较凝集性生长和非凝集性生长人毛囊毛乳头细胞(DPC)的线粒体数量、分布、结构和功能特点。方法采用二步酶消化法分离人毛囊毛乳头后,体外培养DPC。利用还原型线粒体特异性荧光探针MitoTracker Red CM-H2Xros,结合激光扫描共聚焦显微镜和透射电镜观察两种不同生长状态DPC线粒体的分布、数量及结构特征；利用四氯四乙基苯并咪唑基羰花青碘化物(JC-1)检测线粒体膜电位。结果体外培养DPC生长良好；与非凝集性生长DPC相比,凝集性生长DPC线粒体数量较多,整个胞浆内可见,且集中分布在粗面内质网附近,线粒体外形较不规则,嵴较发达,线粒体膜电位明显较高。结论凝集性生长DPC和非凝集性生长DPC的线粒体数量、分布、结构和功能不同,说明两者在能量消耗、细胞代谢及蛋白质合成功能方面存在差异。; 杨斌郝飞杨希川杨卫兵钟白玉唐书谦; 关键词：毛囊线粒体膜电位凝集性生长

人线粒体核糖体蛋白S17 cDNA克隆及其在大肠杆菌中的表达和纯化: 2006年; 目的克隆人MRPS17cDNA,并在大肠杆菌中表达纯化。方法从人原代培养毛乳头细胞中分离总RNA,采用RTPCR及序列测定等方法获得人MRPS17cDNA,然后克隆至原核表达载体pET28a,转化至大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达;C末端融合了6×His纯化标签的表达产物行Western印迹法分析并用Ni2+NTA离子交换树脂进行纯化;纯化蛋白行SDSPAGE纯度分析。结果获得了人MRPS17cDNA,与GenBank报道的序列一致,并成功构建了高效原核表达质粒pET28aMRPS17;Western印迹结果表明,经IPTG诱导,在大肠杆菌中表达了分子量约13kD的目的蛋白;表达产物经Ni2+NTA离子交换树脂纯化,纯度>90%。结论克隆得到了人MRPS17cDNA,并在E.coli中成功表达和纯化了MRPS17蛋白,为后续研究奠定了基础。; 杨斌郝飞杨卫兵杨希川钟白玉; 关键词：DNA 基因表达

抗人线粒体核糖体小亚基蛋白17单克隆抗体的制备和鉴定: 2006年; 以纯化人线粒体核糖体小亚基蛋白17(MRPS17)免疫BALB/c小鼠,经细胞融合和ELISA法筛选成功获得1株抗MRPS17杂交瘤细胞。以所获特异性单抗作为一抗,使用Western印迹、免疫组化和免疫荧光等方法检测标本中MRPS17。结果显示:Western印迹检测人骨骼肌组织、黑素瘤组织和体外培养HeLa细胞提取蛋白质,在分子量约13kDa处有一特异性条带,与阳性对照纯化MRPS17相一致;免疫组化检测石蜡切片标本显示人骨骼肌细胞和恶性黑素瘤细胞胞浆中强阳性着色;细胞免疫荧光检测于培养的HeLa细胞,可见细胞核周围胞浆部位颗粒状绿色荧光,其分布与线粒体特异性荧光探针(MitoTrackerRedCM-H2XRos)的荧光分布一致。说明成功制备了具有高度特异性并可适用于多种检测方法的抗人MRPS17单抗,应用该单克隆抗体对人MRPS17进行了亚细胞水平定位,为线粒体生物学相关研究提供了新的研究工具。; 杨斌郝飞杨希川杨卫兵; 关键词：线粒体单克隆抗体

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