海南省自然科学基金(80570)
- 作品数：5 被引量：13H指数：3
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- 重阳木花粉相关变应原profilin基因的克隆、表达及免疫学鉴定被引量：2
- 2008年
- 克隆、表达和纯化重阳木花粉相关变应原profilin基因,并对其免疫学活性进行鉴定。采用RT-PCR和3-’RACE技术获得整个profilin基因的开放阅读框,将其与PET28a载体连接并转化大肠杆菌E.cdiBL21(DE3)进行诱导表达,通过Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,采用Western blot检测其IgE结合活性。克隆获得了profilin的全长基因,开放阅读框为396个碱基(包括终止密码子),编码131个氨基酸。成功地构建了原核表达载体,并在大肠杆菌中大量地表达了profi-lin,纯化后的重组蛋白进行免疫印迹,结果显示重阳木花粉过敏患者血清对重组profilin反应呈阳性。
- 姚敏刘志刚邬玉兰孟光李春林
- 关键词：重阳木
- 重阳木花粉过敏原的分离、纯化和鉴定被引量：4
- 2011年
- 目的对重阳木花粉变应原蛋白进行分离、纯化和鉴定。方法采用Coca s液提取重阳木花粉的粗提液,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离粗提液蛋白质组分,并测定其分子质量;收集过敏患者血清,用Western blot法鉴定其变应原成分;通过离子交换层析对重阳木花粉变应原进行初步纯化和免疫印迹鉴定。结果分离得到重阳木花粉18条蛋白带,其中分子质量为12和14 ku的是重阳木花粉的特异性变应原,通过离子交换柱层析方法纯化得到其相应的纯化蛋白。结论对重阳木花粉变应原进行了初步的分离、纯化和鉴定,为临床重阳木花粉过敏疾病的诊断和治疗奠定了基础。
- 姚敏刘志刚孟光孔小丽
- 关键词：变应原
- 热带植物花粉过敏原的研究进展被引量：3
- 2009年
- 变态反应性疾病是临床上的常见病、多发病，在引起变态反应性疾病的众多变应原中，吸入性致敏花粉是导致呼吸道变态反应疾病的最重要因烈。在发达国家，有15～30％的人对花粉过敏，在我国，对花粉过敏的病人全国至少有500～1000万，且近年来花粉过敏患者的发病率有持续上升的趋势。变态反应的发生与发展，既决定于病人的体质，亦决定于病人所生存的环境。因此植物花粉过敏原的分子生物学研究是世界变态反应学界研究的热点之一。
- 姚敏
- 关键词：变态反应性疾病花粉
- 王棕花粉过敏原基因的克隆表达、纯化及免疫学鉴定被引量：4
- 2007年
- 目的克隆并表达王棕花粉中泛变应原肌动蛋白抑制蛋白（profilin）。方法利用RT-PCR结合RACE技术克隆王棕花粉中泛变应原profilin的全长基因，并进行序列分析。然后设计带有酶切位点的特异性引物，采用RT-PCR获得整个王棕花粉profilin的开放阅读框，将其与pET28a载体连接并转化大肠杆菌BL21（DE3）进行诱导表达，通过Ni2^＋亲和层析柱对重组蛋白进行纯化，采用Western blot检测其IgE结合活性。结果克隆获得了王棕花粉profilin的全长基因，由675个碱基组成，开放阅读框为396个碱基（包括终止密码子），编码131个氨基酸。经分析，这个序列编码的蛋白为小分子质量酸性蛋白，等电点为4．86，相对分子质量（Mr）约为14．2×10^3。此序列已被GenBank收录，登录号为EF173599。重组王棕花粉profilin在大肠杆菌中高效表达，进一步经Ni^2＋亲和层析柱纯化后经Western blot检测具有良好的免疫学活性。结论成功克隆和表达了王棕花粉profilin，为王棕过敏的诊断和免疫治疗奠定了基础。
- 姚敏孟光刘志刚邬玉兰张红云
- 关键词：基因表达纯化
- BSA-ELISA初步检测短穗鱼尾葵花粉特异性IgE被引量：1
- 2009年
- 目的对短穗鱼尾葵花粉粗浸液的主要变应原进行分析、鉴定。方法通过SDS-PAGE分析短穗鱼尾葵花粉蛋白质组份,采用Western blotting鉴定主要变应原,以短穗鱼尾葵花粉粗浸液包板,摸索出其包被浓度、血清稀释度和酶结合物浓度,采用BSA-ELISA法对短穗鱼尾葵花粉过敏患者血清进行初步检测,并与皮肤挑刺试验比较。结果短穗鱼尾葵花粉粗浸液SDS-PAGE显示有30余条蛋白条带,其中主要蛋白条带有10条,Western blotting显示5例短穗鱼尾葵花粉过敏患者的混合血清能与其中3条蛋白条带起反应,分子量分别是26000、14000和12000Mr。BSA-ELISA检测短穗鱼尾葵花粉特异性IgE,最适粗浸液稀释度为1:100,血清稀释倍数为1:5,生物素化抗体为1:1000,辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(strepavidin-HRP)为1:1000。在此条件下BSA-ELISA与浸液皮试比较,检出结果与皮试阳性患者血清符合率为90%,与皮试阴性患者符合率为80%,与健康人对照检测符合率为100%。结论本实验对短穗鱼尾葵花粉主要变应原进行了分离和鉴定,BSA-ELISA法测定结果与皮肤挑刺试验初步比较符合率较好。
- 姚敏孟光刘志刚孔小丽
- 关键词：SDS-PAGEWESTERNBLOTTINGELISA
