国家高技术研究发展计划(2001AA2151611)
- 作品数：3 被引量：23H指数：2
- 相关作者：邹全明张卫军柏杨袁小澎任建敏更多>>
- 相关机构：第三军医大学北华大学南方医科大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 幽门螺杆菌尿素酶B亚单位功能片段的纯化及活性研究被引量：5
- 2007年
- 目的建立一种有效的尿素酶功能片段的纯化方法。方法应用已构建的尿素酶B功能片段表达载体,IPTG诱导表达,包涵体鉴定试验判断目的蛋白表达形式,AKTA100上分别采用亲和层析和离子层析等多级纯化方式优化纯化条件,HPLC检测纯化蛋白纯度,尿素酶活性阻断试验对纯化后功能片段进行活性鉴定。结果IPTG诱导后目的蛋白高表达,包涵体鉴定试验证实目的蛋白以可溶形式存在宿主细胞中,优化后方案得到目的蛋白纯度>90%且能被尿素酶B免疫的兔血清识别,纯化后蛋白免疫家兔后产生兔抗血清能够特异性中和Hp尿素酶活性。结论成功建立了尿素酶功能片段的纯化方法。
- 袁小澎邹全明柏杨杨珺郭鹰张卫军刘正祥
- 关键词：幽门螺杆菌蛋白纯化尿素酶B
- 幽门螺杆菌双亚单位基因疫苗的构建及免疫原性研究被引量：2
- 2007年
- 目的:构建幽门螺杆菌(Hp)两个保护性亚单位UreB、HspA融合基因疫苗并观察其免疫原性。方法:从Hp基因组分别扩增出UreB、HspA基因片段,采用重叠延伸PCR方法将两个基因片段构建融合基因,以BglⅡ和XhoⅠ酶切位点克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,经测序确认后转染COS-7细胞,Western blot检测目的蛋白表达,胫前肌注射免疫小鼠后收集血清检测特异性抗体效价。结果:经测序后证实成功将融合基因构建到真核表达载体中,免疫印记检测到目的蛋白表达,并具有良好的抗原性,免疫小鼠后能够产生特异性抗体。结论:成功构建Hp双价DNA疫苗,免疫小鼠后显示出良好的免疫原性,为Hp进一步基因疫苗的研究奠定了基础。
- 袁小澎邹全明洪愉柏杨吴超张卫军
- 关键词：幽门螺杆菌尿素酶热休克蛋白A
- 壳聚糖-海藻酸钠幽门螺杆菌全菌蛋白微球的制备及表征被引量：16
- 2005年
- 目的以壳聚糖、海藻酸钠为主要材料包裹幽门螺杆菌(HP)全菌超声蛋白抗原,制备新型HP疫苗制剂。方法将海藻酸钠、壳聚糖、大豆油以及HP超声全菌抗原制备成W/O/W型微球。通过扫描电镜、粒径分布仪等检测微球粒径大小;药物溶出度仪、BCA蛋白试剂盒检测微球的蛋白包封率及药物释放速率。结果所制备的微球形态规则,平均粒径3.33μm;蛋白包封率约为64.8%;微球呈显著缓释模式,缓释时间可达6d。结论壳聚糖-海藻酸钠微球包裹全菌蛋白可以作为HP疫苗的新型缓释制剂。
- 王毅超邹全明任建敏刘健王晓勤
- 关键词：微球幽门螺杆菌壳聚糖海藻酸钠
