国家自然科学基金(81173096)
- 作品数：7 被引量：14H指数：3
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- 瓦他拉尼对乳腺癌耐药蛋白介导的肿瘤多药耐药的逆转研究被引量：6
- 2014年
- 目的观察新型激酶抑制剂类抗癌药瓦他拉尼(vatalanib)逆转肿瘤细胞多药耐药(MDR)的效果,研究其对乳腺癌耐药蛋白(BCRP)、P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)的作用,探讨其作用机制。方法应用MTS法或SRB法检测瓦他拉尼对耐药细胞与敏感细胞的细胞毒性和逆转MDR的效果;分别以罗丹明(Rh-123)、米托蒽醌(MX)、阿霉素(ADR)为P-gp、BCRP、MRP1的荧光底物,应用流式细胞术检测该药对P-gp、BCRP、MRP1外排功能的影响;应用Western blot检测该药对耐药细胞中BCRP蛋白表达水平的影响,并研究其对细胞增殖相关信号分子的影响;应用qRT-PCR检测其对耐药细胞中BCRP基因表达水平的影响;通过超速离心法制备BCRP转运蛋白的粗膜,检测瓦他拉尼对BCRP的ATPase活性的影响。结果无毒剂量的瓦他拉尼(5μmol·L-1)可有效逆转BCRP高表达的肿瘤细胞株HEK293/ABCG2对MX、ADR和托泊替康(TOPT)的耐药,而对P-gp高表达的肿瘤细胞株K562/A02和MRP1高表达的肿瘤细胞株HEK293/ABCC1的耐药无逆转作用。该药能够下调耐药肿瘤细胞的BCRP基因和蛋白的表达水平,并具有时间和剂量依赖效应,但对BCRP外排MX的功能无明显抑制作用。该药可以激活BCRP的ATPase活性,但并不改变BCRP的构象,对耐药和敏感细胞中AKT和ERK的表达及其磷酸化水平也均无明显影响。结论瓦他拉尼可有效、特异地逆转BCRP介导的肿瘤MDR,其机制可能是通过下调耐药肿瘤细胞中BCRP基因和蛋白的表达来达到逆转MDR的效果。
- 张志强魏寅祥赵青任志广彭晖李鹏夏笠许建华
- 关键词：ABC转运蛋白乳腺癌耐药蛋白逆转剂
- 以Hsp90为靶点的4-(4-羟基-3-甲氧基苯亚甲基)姜黄素抗肿瘤活性研究被引量：1
- 2014年
- 合成4-(4-羟基-3-甲氧基苯亚甲基)姜黄素(C085),研究其体外抗肿瘤活性和抑制Hsp90作用。以香草醛和姜黄素为原料,微波条件下Knovenagel缩合反应合成了4-(4-羟基-3-甲氧基苯亚甲基)姜黄素(C085)。以姜黄素为对照,MTT法考察目标化合物对人乳腺癌细胞SKBr3、人慢性粒细胞白血病急变细胞株K562、人急性髓系白血病细胞株HL-60、人肝肿瘤细胞株Hep G2、小鼠黑色素瘤细胞株B-16、人结肠癌细胞株SW480、人胰腺癌细胞株Bxpc-3、人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y、人胃癌细胞株MGC80-3的抑制活性。对上述细胞株的IC50值依次为0.51、1.26、2.90、0.81、1.77、1.31、8.22、1.93、7.41μmol/L,对多种肿瘤细胞抑制活性明显强于Cur。Western Blot结果表明C085明显下调Hsp90的客户蛋白Her2和AKT的表达水平。分子对接分析也支持C085是Hsp90抑制剂。
- 刘洋李娜吴丽贤许建华
- 关键词：热休克蛋白90姜黄素分子对接
- 双(3-吗啉丙氧基)姜黄素抗肿瘤活性研究
- 2015年
- 合成双(3-吗啉丙氧基)姜黄素(PR1),研究PR1体内外抗肿瘤活性。姜黄素与N-(3-氯丙基)吗啉反应制备PR1,MTT法评价PR1体外对人肾癌细胞OS-RC-2、786-O和人慢性粒细胞白血病耐药细胞KA的抑制增殖活性,考察PR1体内抑制人结肠癌HT29裸鼠移植性肿瘤活性。PR1体外对肾癌细胞OS-RC-2和786-O抑制活性比姜黄素强,而对白血病耐药细胞KA抑制活性比姜黄素差。PR1体内对BALB/C-nu小鼠HT29皮下移植瘤的抑制作用明显,100 mg/kg·d灌胃的抑制率为55.7%,差别具有显著性(P<0.01),对裸鼠的体重无明显影响。PR1在体内外均有较强抗肿瘤活性。
- 刘洋陈纯张志强许建华
- 关键词：姜黄素姜黄素衍生物抗肿瘤活性
- 热休克蛋白90抑制剂FW-04—806对Bcr／Abl阳性白血病细胞的体外抗肿瘤作用及其机制
- 2015年
- 目的研究HSP90抑制剂FW-04—806对Bcr／Abl阳性白血病细胞（K562和HL60／Bcr—Abl）的体外抗肿瘤活性及其机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测FW-04—806对HL60、K562和HL60／Bcr—Abl细胞的增殖抑制作用，碘化丙啶（PI）染色法检测FW-04—806对K562细胞细胞周期的影响，annexin V—FITC／PI双染法检测FW-04—806对K562和HL60／Bcr—Abl细胞凋亡的影响，Western blot法检测FW-04-806对K562和HL60／Bcr-Abl细胞增殖和凋亡通路相关蛋白表达的影响，线粒体膜电位法检测FW-04—806对K562和HL60／Bcr—Abl细胞线粒体膜电位的影响，免疫共沉淀法检测FW-04-806对K562和HK60／Bcr—Abl细胞中HSP90／CDC37／Bcr—Abl复合物形成的影响，实时定量PCR法检测FW-04—806对K562和HL60／Bcr—Abl细胞中Bcr／AblmRNA表达水平的影响。结果FW-04—806对HL60、K562和HL60／Bcr—Abl细胞的增殖均有明显的抑制作用，其IC50分别为（30．89±0．12）μmol／L、（9．76±0．19）μmol／L和（8．03±0．26）μmol／L，差异有统计学意义（P〈0．001）。20和40μmol／LFW-04．806作用于K562细胞24h后，K562细胞的凋亡率分别为（17．40±0．34）％和（34．33±5．00）％，与对照组[（8．30±0．53）％]比较，差异有统计学意义（P=0．003）；20和40μmol／LFW-04—806作用于HL60／Bcr—Abl细胞24h后，HL60／Bcr—Abl细胞的凋亡率分别为（18．90±1．45）％和（35．60±3．55）％，与对照组[（8．11±2．62）％]比较，差异有统计学意义（P=0．001）。不同浓度FW-04—806处理K562和HL60／Bcr—Abl细胞24h后，K562和HL60／Bcr—Abl细胞中p-Bcr—Abl及下游p-Stat和p-Crkl呈浓度依赖性降低，AKT、ERK、C—Raf蛋白及其磷酸化水平亦呈浓度依赖性降低。FW-04—806可使K562和HL60／Bcr—Abl细胞的膜电位水平呈浓度依赖性下降，并可干扰K562和HL60／Bcr—Abl细胞中CDC37与HSP90的结合，抑制HSP90／CDC37／Bcr—Abl复合�
- 孔应利黄维曹品容陈丽红罗燕梅佘冰英许建华叶敏
- 关键词：白血病热休克蛋白90BCR/ABL
- 姜黄素衍生物C1209抑制慢性粒细胞白血病细胞增殖与阻断Hsp90伴侣功能的关系被引量：4
- 2018年
- 目的研究姜黄素衍生物C1209抑制慢性粒细胞白血病细胞增殖与阻断Hsp90伴侣功能的关系。方法采用荧光光谱法,研究不同浓度C1209与Hsp90、其N端片段(NHsp90)、M端片段(MHsp90)、C端片段(CHsp90)的相互作用,以及不同温度(293 K、303 K、310 K)下,C1209与Hsp90的相互作用;实验选取280 nm为激发波长,290~510 nm的波长范围内进行荧光光谱扫描。采用孔雀绿磷钼酸铵-无机磷检测法,研究C1209对Hsp90-ATPase活性的抑制。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)染色法体外检测C1209对白血病细胞K562及耐伊马替尼(IM)的白血病细胞K562/G01细胞的增殖抑制作用;应用蛋白免疫印迹法检测Hsp90客户蛋白及其下游蛋白、Hsp90分子伴侣的表达。结果C1209解离常数为(14.733±0.713)μmol·L^(-1);C1209与Hsp90之间的主要作用力为静电作用力;C1209与Hsp90的C端片段结合能力最强。当ATP为1 mmol·L^(-1)时,C1209作用于Hsp90的IC50值为11.4μmol·L^(-1)。C1209呈剂量依赖性地抑制K562和K562/G01细胞的增殖,作用24 h的IC50为1.14μmol·L^(-1)和0.56μmol·L^(-1);C1209影响Hsp90的分子伴侣功能,且下调K562和K562/G01细胞中Bcr-Abl、Akt、MEK、ERK、c-Raf及其相应磷酸化蛋白p-Akt、p-MEK、p-ERK等Hsp90客户蛋白及其下游蛋白的表达。结论姜黄素衍生物C1209是Hsp90抑制剂,对K562和耐IM的白血病细胞K562/G01具有明显的增殖抑制作用,可能与其抑制Hsp90的分子伴侣功能、下调Hsp90客户蛋白有关。
- 范莹娟周义湘张连茹张连茹
- 关键词：HSP90ATPASE活性荧光光谱法
- 荧光光谱法研究姜黄素衍生物C0817与Hsp90的相互作用被引量：1
- 2014年
- 目的研究姜黄素衍生物C0817与Hsp90的结合作用,及其对Hsp90-ATPase活性抑制作用。方法采用荧光光谱法,研究不同浓度C0817与Hsp90的相互作用;实验选取280 nm为激发波长,290～510 nm内进行荧光光谱扫描。采用孔雀绿磷钼酸铵-无机磷检测法,研究C0817对Hsp90-ATPase活性的抑制。结果 C0817解离常数为（24.740±1.752）μmol·L^-1 ;C0817与Hsp90之间的主要作用力为静电作用力;C0817的存在使得Hsp90构象改变;当ATP为1 mmol·L^-1 时,C0817对Hsp90-ATPase活性无抑制作用。结论经过荧光光谱分析,可以确定C0817与Hsp90的结合机制。
- 范莹娟张连茹刘洋许建华
- 关键词：HSP90ATPASE活性荧光光谱法相互作用姜黄素
- 姜黄素衍生物C085与Hsp90及其不同片段相互作用以及对Hsp90 ATPase活性的影响被引量：3
- 2014年
- 目的：研究姜黄素衍生物C085与Hsp90的结合作用,及其对Hsp90-ATPase 活性抑制作用。方法采用荧光光谱法,研究不同浓度C085与Hsp90、NHsp90、MHsp90、CHsp90的相互作用以及293K、303K和310K下,C085与Hsp90的相互作用；实验选取280nm为激发波长,290-510 nm的波长范围内进行荧光光谱扫描。采用孔雀绿磷钼酸铵-无机磷检测法,研究 C085对 Hsp90-ATPase 活性的抑制。结果C085解离常数为（11．163±0．316）μmol · L-1；C085与Hsp90之间的主要作用力为静电作用力；C085与Hsp90的C端片段结合能力最强。当ATP为1 mmol · L-1时, C085作用于Hsp90的IC50值为6．04μmol · L-1。结论经过荧光光谱分析,可以确定C085与Hsp90的结合机制,且C085能抑制Hsp90-ATPase活性。
- 范莹娟张连茹刘洋许建华
- 关键词：HSP90ATPASE活性荧光光谱法相互作用
- C086 inhibits proliferation of imatinib-resistant CML cells that express wild-type or mutant Bcr-Abl
- Imatinib mesylate is a successful treatment for chronic myeloid leukaemia(CML),but resistance to this drug has...
- Ruijia ChenLixian WuYang LiuLiguang LouYing WuLisen HuangMeijuan HuangYong WuYuanzhong ChenJianhua Xu
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