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微滴培养技术的新应用被引量：3: 2011年; 微滴培养技术在卵母细胞培养和胚胎早期发育研究中有广泛的应用。近期研究发现这项技术又有新的应用范围。有科学家发现将该技术应用于胚胎干细胞可以实现高效传代,在精原干细胞培养和精子发生相关过程的研究方面也可取得很好效果,同时,对早期人类胚胎干细胞的分离过程的监控和对精原干细胞生长过程的观察也相对容易。这些研究结果显示,微滴培养技术在这些新领域的研究与常规培养方法相比具有独特的优势。回顾微滴培养技术的主要发展过程,重点探讨微滴培养技术的最新应用及其优点。; 霍龙张岩吴应积; 关键词：体外培养胚胎干细胞精原干细胞

大鼠精原干细胞的微滴培养法被引量：2: 2014年; 精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)作为成体干细胞的一类,既具有自我更新和分化的潜能,又可向子代传递遗传信息。阐明其增殖过程及分化特性对SSCs的进一步应用具有重要意义。小鼠SSCs的微滴培养研究显示,微滴培养技术与常规培养方法相比具有独特的优势。然而其他物种的SSCs能否实现微滴培养尚有待证实。该研究旨在利用微滴培养法建立大鼠SSCs体外培养技术。5、8、10、20、40个大鼠SSCs分别置于20μL微滴中培养,用丝裂霉素处理的STO细胞作为滋养层。倒置显微镜观察记录大鼠SSCs的增殖状态。一个月后,对微滴培养的SSCs进行免疫荧光双标记染色鉴定。结果显示,一个微滴内接种5个SSCs就能实现扩增培养;培养一个月后,SSC仍然表达其特异的标记基因分子如CDH1、OCT4、PLZF、Thy1和Gfra1。体外诱导分析显示,微滴培养的大鼠SSCs具有分化为精母细胞的能力。大鼠SSCs微滴培养法的建立,为其他物种SSCs的培养提供了借鉴,也为再生医学和生命科学相关领域的研究提供了技术平台。; 霍龙罗奋华张岩全祺玮吴应积; 关键词：精原干细胞免疫荧光染色体外分化

制备精原干细胞滋养层细胞条件的优化被引量：5: 2012年; 目的:优化精原干细胞培养滋养层细胞的制备条件。方法:首先根据文献资料报道和实践经验确定丝裂霉素C作用STO细胞的浓度范围和时间范围,利用双因素优选法缩短丝裂霉素C处理STO细胞的试验范围。然后采用MTT检测法确定丝裂霉素C处理STO细胞的最佳浓度和时间。结果:滋养层细胞处理后不经过冷冻保存的情况下,17.64μg/ml 2 h处理条件的STO细胞在培养14天内细胞数量基本保持稳定,其它处理条件的细胞数量均有所增加;经冷冻保存的情况下,14.72μg/ml 2 h处理条件的STO细胞在培养14天内细胞数量基本保持稳定,其它处理条件的细胞数目均有所降低。结论:滋养层细胞处理后不经过冷冻保存的情况下,17.64μg/ml 2 h的处理条件是丝裂霉素C处理STO细胞的最佳条件;经冷冻保存的情况下,14.72μg/ml 2 h的处理条件是丝裂霉素C处理STO细胞的最佳条件。; 刘海超张岩于泊洋吴应积; 关键词：精原干细胞滋养层丝裂霉素C MTT法

视黄酸在精子发生过程中引发减数分裂的信号通路被引量：5: 2013年; 视黄酸(RA)是维生素A即视黄醇(ROH)的一类氧化代谢产物,在哺乳动物精子发生过程(如引发减数分裂)中起着重要作用。在哺乳动物睾丸内,RA结合视黄酸受体(RAR),在不同时期、不同类型细胞中调控相应靶基因的转录表达。在特定的时期,通过上调促进减数分裂的基因表达并下调抑制减数分裂的基因表达,最终引发精子发生过程中的减数分裂。而哺乳动物精子发生的研究对生殖生物学、发育生物学、生殖工程等方面都具有广阔的应用前景,所以研究RA在哺乳动物精子发生过程中引发减数分裂的信号通路十分有意义。本文介绍了RA信号传递系统及其作用机制,并对RA在精子发生过程中引发减数分裂的信号通路进行了综述。; 王珂吴应积; 关键词：视黄酸精子发生减数分裂信号通路

胶质细胞源性神经营养因子引发精原干细胞自我更新的信号通路被引量：1: 2012年; 胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)是TGF-β超家族的一个相关成员。哺乳动物睾丸曲细精管内支持细胞分泌的GDNF,能促进精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)的自我更新与增殖。SSCs去分化诱导产生的多能干细胞已被广泛应用于再生医学领域,且SSCs在制作转基因动物、男性不育治疗和体外实施精子发生过程等方面,具有极大的应用价值。所以,GDNF引发SSCs自我更新的作用机理非常值得探索。通过对GDNF引发SSCs自我更新的信号通路进行系统梳理,我们发现了如下的作用过程:GDNF与GFR-α1特异性结合,活化Ret蛋白酪氨酸激酶,随后激活Ras/ERK1/2、PI3K-Akt和SFK信号通路,促进SSCs的自我更新;同时,在该过程中还存在信号通路间的交联对话现象。; 刘海超任俊明吴应积; 关键词：胶质细胞源性神经营养因子精原干细胞信号通路自我更新

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国家教育部博士点基金(20101501110001)