国家自然科学基金(30271358)
- 作品数：19 被引量：210H指数：8
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- 相关机构：华中科技大学上海市第一人民医院郑州大学第三附属医院更多>>
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- 短发夹状RNA干扰对子宫颈癌细胞中Pin1基因表达及细胞增殖和凋亡的影响被引量：14
- 2006年
- 目的研究短发夹状RNA(shRNA)干扰对宫颈癌细胞中Pin1基因表达及细胞增殖和凋亡的影响。方法构建靶向Pin1基因的shRNA真核表达质粒pSIREN-Pin1,在脂质体介导下转染人宫颈癌细胞系HeLa细胞(HeLa/p-shRNA组),同时以对照质粒pSIREN-Con(HeLa/p-Con组)和无血清培养基转染HeLa细胞(HeLa组)作为对照,分别应用RT-PCR技术及蛋白印迹法检测Pin1mRNA及蛋白表达水平,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和软琼脂细胞克隆实验检测细胞增殖状况,流式细胞仪分析细胞凋亡情况。结果转染后48h,HeLa/p-shRNA组Pin1mRNA及蛋白表达水平分别为0·19±0·05和0·33±0·14,HeLa/p-Con组分别为0·84±0·16和0·79±0·17,HeLa组分别为0·89±0·11和0·81±0·15,前组Pin1mRNA及蛋白表达水平分别与后两组比较,差异均有统计学意义(P<0·05);转染pSIREN-Pin1质粒后HeLa细胞中Pin1mRNA及蛋白表达抑制率分别为77%和58%。MTT比色法检测显示,HeLa/p-shRNA组细胞增殖率明显下降(P<0·05)。软琼脂克隆实验显示,HeLa/p-shRNA组细胞克隆小而稀疏,细胞克隆形成率为(12±3)%,明显低于HeLa/p-Con组的(20±5)%和HeLa组的(24±4)%(P<0·05)。流式细胞仪分析显示,HeLa/p-shRNA组细胞凋亡率为(24·3±5·7)%,明显高于HeLa/p-Con组的(5·0±1·4)%和HeLa组的(1·8±0·4)%(P<0·05)。结论shRNA干扰技术能有效抑制靶基因Pin1的表达,进而可抑制宫颈癌细胞增殖并诱导细胞凋亡增加,为宫颈癌的基因研究及治疗提供新思路。
- 李红雨朱涛周金华徐茜王世宣白向阳卢运萍马丁
- 关键词：基因表达RNA干扰宫颈肿瘤
- Pin1基因真核表达载体的构建及在宫颈癌HeLa细胞中的表达
- 2007年
- 目的构建一种含人肽基脯氨酰顺反异构酶Pin1的质粒,以绿色荧光蛋白作为报告基因,观察其在宫颈癌HeLa细胞中的表达。方法从人宫颈癌HeLa细胞中,以RT-PCR方法扩增出人Pin1基因全长cDNA序列(CDS),插入增强绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-C1,脂质体法转染HeLa细胞,荧光显微镜下观测绿色荧光蛋白的表达,免疫印迹法检测GFP-Pin1蛋白的表达。结果RT-PCR扩增出人Pin1基因;构建pEGFP-C1-Pin1重组质粒,体外成功转染入宫颈癌HeLa细胞,在荧光显微镜下可见强绿色荧光蛋白的表达,免疫印迹法证实存在GFP-Pin1蛋白高表达;经G418筛选获得单细胞克隆。结论重组质粒pEGFP-Pin1体外转染HeLa细胞后,目的基因能够在细胞内有效表达,检测方法简便可靠,为利用转染该目的基因的细胞进行下一步研究提供了实验基础。
- 李红雨朱涛周金华徐茜胡春霞邓东锐王世宣卢运萍马丁
- 关键词：质粒构建基因转染
- 氟尿嘧啶用于人乳头状瘤病毒高危型感染早期干预治疗被引量：1
- 2006年
- 目的探讨应用氟尿嘧啶(5-FU)进行宫颈乳头状瘤病毒(HPV)高危型感染早期干预治疗的疗效。方法采用液基薄层细胞学检测(TCT)和HPV DNA分型检测进行宫颈HPV高危型感染的筛查,选取细胞学异常和HPV高危型阳性6个月未自然转阴的宫颈上皮内瘤变(C IN)Ⅰ级患者50例,随机分为治疗组和对照组各25例。治疗组给予氟尿嘧啶可吸收缓释药膜的局部干预治疗。对照组未进行任何干预治疗。治疗过程中定期复查TCT及HPV DNA水平。结果治疗组HPV病毒负荷量呈明显的下降趋势,并于治疗第3个月时病毒转阴5例(20.0%),第6个月时C INⅠ级患者出现病理逆转13例(52.0%),对照组仅出现逆转2例(8.0%),两组缓解率比较差异有显著性(P<0.05)。结论对于C INⅠ级的HPV高危型感染患者,采用氟尿嘧啶可吸收缓释药膜治疗,可促使HPV病毒负荷量的降低,甚至清除。
- 李伟黄晓园庄亮王薇朱涛李箫马丁
- 关键词：氟尿嘧啶缓释药膜宫颈癌人乳头状瘤病毒
- TCT联合HC-Ⅱ HPV筛查宫颈病变及药物干预的方法被引量：2
- 2007年
- 目的探讨应用液基薄层宫颈刷片细胞学检测（Thinprep cytologicaltest，TCT）及杂交捕获二代（Hybridcapture Ⅱ，HC-Ⅱ）人乳头瘤病毒（Humanpapilloma virus，HPV）分型检测筛查宫颈病变的意义和对高危病例进行药物干预的方法。方法2004年4月～2005年8月，采用TCT和HPVDNA分型检测对17320例患者进行宫颈病变的筛查，并以病理组织学活捡为标准来验证筛查结果，同时应用氟尿嘧啶（5-Fu）可吸收缓释药膜对适宜病例进行局部干预治疗。结果TCT结果异常者1754例，其中高危型HPV-DNA阳性450例；431例TCT提示无HPV感染病例中有172例高危型HPV-DNA阳性；TCT或TCT联合HC-ⅡHPV筛查宫颈上皮内瘤样病变（Cervical intraepithelial neoplasia，CIN）Ⅱ级及以上病变的敏感性和特异性分别为81．12％、89、65％和72．08％、97．99％；采用5Fu可吸收缓释药膜治疗25例CINI级HPV高危型感染患者后，其病毒负荷量下降幅度、转阴率和病理逆转率均明显高于对照组，差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论TCT和HPV分型检测联合应用于宫颈病变筛查可提高CINⅡ级及以上病变的特异性检出；5-Fu可吸收缓释药膜治疗CINI级HPV高危型感染患者可降低其病毒负荷量，甚至清除。
- 李科珍李伟庄亮曹阳王薇马全富卢运萍马丁
- 关键词：人乳头状瘤病毒氟尿嘧啶缓释药膜
- 人端粒酶逆转录酶在子宫颈癌组织中的表达变化及其意义被引量：26
- 2005年
- 目的研究端粒酶在宫颈癌及其癌前病变组织中的表达,探讨人端粒酶逆转录酶(hTERT)作为宫颈癌早期诊断标志物的可能性。方法采用RTPCR方法测定端粒酶mRNA在3株宫颈癌细胞、2株正常的人二倍体细胞、38例宫颈癌、16例宫颈上皮内瘤变(CIN)和20例正常宫颈组织中的表达水平;端粒重复序列扩增酶联免疫吸附法测定端粒酶活性;免疫组化链酶菌抗生物素蛋白过氧化物酶(SP)连接法检测3株宫颈癌细胞、2株正常的人二倍体细胞、21例正常宫颈组织、2例CIN和55例宫颈癌切片中hTERT蛋白的表达水平。结果hTERTmRNA在3株宫颈癌细胞中均表达,而在2株正常的人二倍体细胞中无表达,宫颈癌组织中的阳性表达率为81.6%,高于CIN的37.5%和正常宫颈组织的5.0%,差异有统计学意义(P<0.05);hTERTmRNA的阳性表达率与端粒酶活性有相关性(P<0.01);hTERT蛋白在3株宫颈癌细胞中有表达,2株正常的人二倍体细胞中无表达,正常宫颈组织中阳性表达率为4.8%、CIN为28.0%,均低于宫颈癌组织的65.5%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论宫颈癌组织和细胞中hTERTmRNA和蛋白阳性表达率均高于正常宫颈组织,其有可能作为宫颈癌早期诊断的标志物。
- 奚玲朱涛吴鹏徐茜黄磊李科珍卢运萍马丁
- 关键词：人端粒酶逆转录酶人二倍体细胞端粒重复序列扩增HTERT蛋白癌前病变组织抗生物素蛋白
- hTERT对HeLa细胞放疗后细胞周期的影响被引量：4
- 2006年
- 目的:研究端粒酶逆转录酶(hTERT)对HeLa细胞放疗后细胞周期的影响。方法:将野生型端粒酶逆转录酶(WT-hTERT)、端粒酶逆转录酶显性负突变体(DN-hTERT)和对照质粒(pBABE)电转染于HeLa细胞中,RT-PCR法检测hTERT表达,TRAP-ELISA检测HeLa细胞端粒酶活性改变,Southern-B lot检测端粒长度改变,各转染组细胞分别经5Gy和10Gy60Co照射,流式细胞仪检测其在照射后0、24、48和72h细胞周期分布和凋亡的情况。结果:转染DN-hTERT后,HeLa细胞端粒酶活性下降,端粒长度显著缩短,而转染WT-hTERT后,HeLa细胞端粒酶活性增强,端粒长度较对照组长;各转染组细胞周期分布相似,经60Co照射24h后,各组细胞G2M峰均升高,并随照射剂量增加得更明显,其中WT-hTERT组G2M峰最高,而DN-hTERT组G2M峰最低,60Co照射48h后各组细胞亚G1峰均升高,其中WT-hTERT组最低,而DN-hTERT组最高,对照组和DN-hTERT组G2M阻滞进一步增加,G1峰下降,而WT-hTERT组G2M下降,G1峰升高。结论:DN-hTERT能抑制HeLa细胞端粒酶活性,进而缩短其端粒长度,增强其对放射线的敏感性,而WT-hTERT通过增强G2M阻滞率促进损伤细胞修复。
- 奚玲吴鹏朱涛王常玉王世宣马丁
- 关键词：端粒酶人端粒酶逆转录酶细胞周期放射增敏
- 基于WEB页面的生物信息学分析平台的构建及其应用被引量：2
- 2006年
- 目的在Linux系统下构建基于web页面的生物信息学分析平台。方法以BLAST、InterProScan、Jemboss3个功能模块,分别执行核酸、蛋白质数据库相似性检索、蛋白结构域和功能位点分析和预测、序列综合性的生物信息分析等功能。结果构建的平台具有成本低、使用简单、功能强大、保密性强、便于扩展等优点。能够满足大多数实验室的常规生物信息学分析的需要。
- 周金华朱涛李红雨徐钢王世宣周剑锋卢运萍马丁
- 关键词：生物信息学BLAST
- 杂交捕获二代法检测高危型人乳头瘤病毒DNA的意义被引量：15
- 2006年
- 目的 探索杂交捕获二代（HC-Ⅱ）法检测高危型人乳头瘤病毒（HPV）DNA的意义．方法2003年3—6月在武汉同济医院妇产科采用HC-Ⅱ法检测150例门诊忠者的高危型HPVDNA，以阴道镜辅助活检为金标准，比较该方法的特异性、敏感性、准确性、约登指数及Kappa值。结果高危型HPV阳性率为14．67％，HC—Ⅱ法检测高危型HPVDNA的敏感性、特异性、准确性、阳性预测值、阴性预测值、约登指数及Kappa值依次为：88．89％，91．78％，91．21％，72．73％，97．10％，0．8067，0．7444。假阳性率为6．59％，假阴性率为2．19％。结论HC-Ⅱ法检测高危型HPVDNA阴性预测值高，与金标准有较好的符合率，诊断价值高，为一种很好的早期筛查方法。
- 邬素芳易诚青徐茜王薇辜海念卢运萍马丁
- 关键词：宫颈肿瘤人乳头瘤病毒
- Pin1在宫颈癌中过表达及其与Ki67关系的研究被引量：12
- 2006年
- 目的:探讨宫颈癌中肽基脯氨酰顺反异构酶Pin1表达、与Ki67的相关性及其临床意义。方法:应用RT-PCR和免疫组化技术检测宫颈癌组织中Pin1mRNA和蛋白表达水平及其与Ki67蛋白表达的相关性。结果:1)宫颈癌组织中Pin1mRNA表达明显高于正常宫颈组织(P<0.05);2)从正常宫颈到CIN再到浸润癌Pin1蛋白表达逐渐增强(P<0.05);3)Pin1蛋白过表达与临床分期、病理分级、淋巴结转移无明显相关(P>0.05);但宫颈腺癌Pin1表达明显高于宫颈鳞癌(P<0.05);4)Pin1过表达与Ki67表达呈显著正相关(P<0.05)。结论:1)Pin1过表达与宫颈癌细胞增殖有关,参与宫颈癌发生发展;2)Pin1过表达可作为宫颈癌诊断的辅助指标。
- 李红雨石小燕徐茜邓东锐王世宣卢运萍马丁
- 关键词：子宫颈癌KI67
- 宫颈原位癌及镜下早期浸润癌的诊断准确性分析
- 2009年
- 目的了解宫颈原位癌及镜下早期浸润癌的各种筛查及诊断方法,总结不同的诊断方法对病理及临床分期的影响,探讨提高宫颈原位癌及镜下早期浸润癌术前诊断准确率的方法。方法回顾性分析2000年1月至2007年12月在同济医院行子宫全切手术治疗的168例宫颈原位癌及79例镜下早期浸润癌患者临床表现、诊断方法及术后病理诊断。所有患者均接受了子宫全切术或子宫颈癌根治术,其中201例术前接受了宫颈细胞学检查,223例术前接受了阴道镜下宫颈活检,16例术前接受了宫颈锥切手术。结果宫颈细胞学的临床分期准确率分别为:镜下早期浸润癌36.5%,宫颈原位癌81.1%;宫颈活检与宫颈锥切的病理类型准确率均为100%,0期临床分期准确率分别为92.6%与100%,Ⅰa期临床分期准确率分别为90.7%与100%。结论宫颈原位癌及镜下早期浸润癌的早期发现及确切分期与其诊断方法密切相关,宫颈细胞学检查联合宫颈活检可有效筛查宫颈癌早期病变,宫颈锥切术可有助于提高其诊断准确率。
- 李科珍黄小园陈刚马丁
- 关键词：宫颈原位癌阴道镜检查宫颈锥切术
