国家自然科学基金(30271381)
- 作品数：12 被引量：117H指数：7
- 相关作者：田杰朱静江德勤陈沅吕铁伟更多>>
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- 急性心肌梗塞动物模型的建立被引量：16
- 2004年
- 目的 探索建立急性心肌梗塞动物模型的适宜方法及最佳时间。方法 以 38只Wistar大鼠为研究对象 ,在动物呼吸机的支持下 ,麻醉满意后打开胸腔 ,暴露心脏 ,结扎左冠脉前降支 ,应用心电图动态监测、病理组织切片来确定模型建立情况。结果 心电图动态监测显示ST段在冠脉结扎后呈持续性升高 ;4 0min后可见Q波 ,同时病理组织切片可见结扎区域心肌纤维排列紊乱 ,肌丝断裂溶解 ,细胞核固缩甚至碎裂 ,间质充血水肿 ,有炎性细胞浸润 ;超声检查显示结扎后动物射血分数较结扎前无明显下降 ,无显著统计学意义。结论 通过结扎左冠脉前降支的方法 ,在结扎后 4 0min ,能够建立稳定的心肌梗塞动物模型 。
- 吕铁伟田杰江德勤朱静
- 关键词：急性心肌梗塞动物模型心电图心肌纤维
- Titin基因在骨髓间充质干细胞体外分化为心肌细胞过程中的干预研究被引量：1
- 2007年
- 目的:探讨结构蛋白即肌联蛋白titin基因在骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)体外分化为心肌细胞过程中的作用及其对收缩蛋白基因β-肌球蛋白重链(β-myson heavy chain,β-MHC)和肌钙蛋白(ICardiac troponinI,cTnI)基因表达的影响。方法:无菌条件下冲洗Wistar大鼠双侧股骨和胫骨的骨髓腔获得细胞,并进行体外纯化、扩增,后加入5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-aza)进行诱导,分别在诱导后1天、4天、7天、14天在倒置显微镜下观察其形态变化,同时将携带有针对大鼠titinN2B区的siRNA重组质粒pSITITIN和针对人β-actin的siRNA重组质粒pSIACTIN转染入诱导后的MSCs,转染后24h,采用RT-PCR技术检测各时间点干扰前后结构蛋白titin基因和收缩蛋白β-MHC、cTnI基因在MSCs体外心肌细胞样分化过程中的动态表达。结果:1.诱导前titin、β-MHC、cTnI基因都有弱的表达,诱导后titin、β-MHC、cTnI基因的表达增强。2.重组质粒转染诱导后的MSCs,titin基因的表达减弱。3.titin基因的表达被干扰后,β-MHC基因的表达无明显变化,而cTnI基因的表达有减弱。结论:1.MSCs是一种具有心肌源性的种子细胞2.titin基因可能是MSCs向心肌细胞分化发育过程中有重要意义的基因,对cTnI基因的表达有调控作用。
- 王金菊田杰吕铁伟张小飞李扬朱静陈沅
- 关键词：骨髓间充质干细胞RNA干扰分化TITIN
- NKx2.5、GATA-4基因表达对骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞的影响被引量：11
- 2005年
- 观察NKx2.5、GATA-4基因在骨髓间充质干细胞 (mesenchymalstemcells,MSCs)分化为心肌细胞过程中表达时序性及表达强度的变化 ,初步阐明两基因对MSCs分化为心肌细胞的影响。以MSCs植入后的Wistar大鼠为研究对象 ,在移植后不同的时间点取心肌标本 ,采用逆转录聚合酶链反应技术 ,提取心肌组织的总RNA ,逆转录 ,加入特异性引物扩增目的基因 ,观察基因表达的时序性 ,并应用凝胶图像分析系统检测这两个基因表达强度的动态变化。显示在MSCs移植后 1d两个基因即出现弱的表达 ,1d～ 1周表达较低 ,2周～ 3周表达强度最高 ,达到高峰期 ,以后表达强度则逐渐降低。NKx2.5、GATA
- 吕铁伟田杰邓兵朱静陈沅
- 关键词：心肌细胞基因表达GATA-4骨髓间充质干细胞分化NK
- 骨髓间充质干细胞移植对心肌病大鼠心功能的影响被引量：3
- 2005年
- 江德勤田杰白永虹吕铁伟张文张蕾朱静陈沅钱永如
- 关键词：骨髓间充质干细胞移植心功能恢复心肌病变骨髓问充质干细胞MSCS
- 大鼠心肌病模型的建立及彩色超声心动图监测的研究被引量：2
- 2005年
- 目的探讨心肌病模型建立的方法及无创超声技术对其心功能的监测.方法阿霉素腹腔注射法建立心肌病动物模型,病理切片检查验证心肌病的建立情况:经胸超声技术检测大鼠左室容积、内径及室壁厚度了解其心功能指标左室射血分数(LVEF%)、左室缩短分数(LVFS%)变化.结果 (1)106只Wistar大鼠注射阿霉素8周后,成功建立了58只心肌病模型,成功率60%;(2)无创超声技术监测心肌病模型鼠LVEF、LVFS,较正常大鼠下降20%～30%,具有显著差异(P<0.05).结论阿霉素腹腔注射法操作简单,可建立可靠的心肌病动物模型;超声技术能准确、方便、无创地监测心功能变化.
- 白永虹田杰江德勤张文张蕾
- 关键词：心肌病
- 大鼠MSCs诱导分化为心肌样细胞时离子通道基因的表达被引量：2
- 2007年
- 目的研究大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外向心肌样细胞分化过程中L-型钙通道(α1C)和瞬间外向钾通道(kv4.3)基因的表达。方法无菌条件下冲洗Wistar大鼠双侧股骨和胫骨的骨髓腔获得MSCs,体外培养传代纯化,5-氮杂胞苷(5-aza)诱导24 h,显微镜下观察诱导前后形态变化,RT-PCR鉴定α1C和kv4.3基因的表达。结果kv4.3基因诱导前有弱的表达,诱导后1、4、7和14 d表达明显逐渐增强(P<0.05);α1C基因诱导前有较强的表达,诱导后1、4、7和14 d表达却明显逐渐减弱(P<0.05)。结论α1C和kv4.3基因在维持MSCs的诱导分化过程中发挥重要作用。
- 王金菊田杰吕铁伟张小飞朱静李扬陈沅
- 关键词：骨髓间充质干细胞5-氮杂胞苷离子通道
- 大鼠骨髓间充质干细胞适宜分离和培养条件的研究被引量：15
- 2004年
- 目的 :寻求适宜有效的大鼠骨髓间充质干细胞 (mensechymalstemcell,MSCs)体外分离、纯化和培养的条件 ,为MSCs进一步的实验研究打下基础。方法 :分别用贴壁筛选法和密度梯度离心法来分离和纯化MSCs ,并用不同的接种密度、不同的血清浓度和不同的培养基检测细胞的生长情况 ,绘制出细胞的生长曲线 ;流式细胞仪检测MSCs生长周期。结果 :细胞贴壁呈纤维状生长 ,以 2× 10 9的浓度接种 ,在含 10 %胎牛血清的DMEM /F12培养基中 ,37℃、5 %CO2 细胞培养箱中 ,细胞生长状况良好 ;细胞在培养的最初几天处于生长的潜伏期 ,而后呈指数级生长 ,随着时间的延伸 ,细胞的生长速度减慢 ;而流式细胞仪检测示细胞大多处于G0 G1期。结论 :在适宜的培养条件下 ,MSCs在体外培养的过程中生长状态良好 ,增殖速度快 ,为进一步的研究打下了基础。
- 吕铁伟田杰朱静刘官信
- 关键词：骨髓间充质干细胞细胞培养
- 骨髓间充质干细胞体内诱导分化为心肌细胞被引量：20
- 2004年
- 观察骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)植入体内后,在心肌微环境诱导下分化为心肌细胞的能力。无菌条件下取出大鼠双侧股骨及胫骨,冲洗骨髓腔获得细胞,贴壁筛选法纯化MSCs,体外培养、扩增,4,6-二咪基-4-联苯基吲哚(4,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)标记细胞,注入结扎冠脉左前降支所致心肌梗塞模型鼠的心肌组织。在不同时间点处死大鼠,获取心肌组织,采用HE染色和电镜技术对植入MSCs进行形态学观察和超微结构检测,荧光免疫组化检测植入MSCs肌球蛋白重链(MHC)和心肌特异性抗原Cx43的表达,同时应用RT-PCR技术检测心脏早期发育基因NKx2.5、GATA-4的表达。结果发现细胞标记效率为100％,通过连续检测MSCs植入后细胞形态从无规则状态、幼稚细胞表型逐渐向成熟心肌细胞方向转化,植入细胞排列同正常肌纤维方向平行,且植入四周后电镜检测到闰盘的存在;两周出现MHC的表达,后随时间延长表达逐渐增强。四周出现Cx43的表达,以后表达稳定,RT-PCR检测NKx2.5、GATA-4在一天即出现弱表达,两周-三周时表达最强,以后强度逐渐减弱。结果表明MSCs在体内微环境条件下能够转化为心肌细胞。
- 吕铁伟田杰朱静邓兵江德勤陈沅钱永如
- 关键词：骨髓间充质干细胞分化心肌细胞
- 大鼠骨髓间充质干细胞体内分化为心肌细胞的相关基因被引量：10
- 2006年
- 目的研究大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)在体内诱导分化为心肌细胞的过程中相关调控基因的时序表达,揭示MSCs体内分化为心肌细胞的分子调控机制。方法从大鼠骨髓中分离MSCs并传至第8代,用DAPI标记后注射到正常大鼠心肌组织内,分别于细胞移植后1 d、1、2、3、4、6和8周处死大鼠,在注射点获取心肌标本;采用HE染色观察MSCs植入后的形态变化,荧光免疫组化检测心肌特异性蛋白MHC和connexin43的表达;半定量RT-PCR检测TGF-β、Nkx-2.5、GATA-4、MEF-2C、TEF-1和RARα等相关调控基因的动态时序表达。结果MSCs注入正常心肌组织后可逐渐向心肌细胞转化,从小圆形未分化细胞逐渐转变为与周围宿主组织连接的心肌样细胞;移植1周后出现MHC的表达,移植4周后宿主心肌细胞与移植细胞间出现connexin43的表达,Nkx-2.5和GATA-4基因诱导后1 d表达开始增强,1周时达高峰,以后维持在高水平,TGF-β、MEF-2C、TEF-1和RARα基因mRNA在诱导前后无明显变化。结论Nkx-2.5和GATA-4基因在MSCs体内转化为心肌细胞的过程中可能发挥重要作用。
- 张文田杰吕铁伟张蕾江德勤邓兵朱静陈沅
- 关键词：骨髓间充质干细胞心肌细胞细胞分化
- 骨髓间充质干细胞体外分化为心肌样细胞相关调控基因的时序表达被引量：33
- 2004年
- 目的研究体外诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌样细胞分化过程中相关调控基因的时序表达,筛选MSCs定向分化为心肌细胞的重要调控基因。方法采用第8代的MSCs,以去甲基化药物5氮杂胞苷进行体外诱导,连续观察8周,相差显微镜下观察其形态变化,荧光免疫组化方法鉴定心肌特征性蛋白肌球蛋白重链(MHC)和连接蛋白Connexin43的表达,应用半定量RTPCR技术分析TGFβ、Nkx25、GATA4、MEF2C、TEF1和RARα等相关调控基因在分化过程中的动态时序表达。结果诱导前MSCs呈成纤维细胞样,诱导后细胞形态发生变化,1周呈棒状或球形,2周后细胞之间形成连接,排列方向渐趋一致,3周时开始出现肌管结构。MHC诱导前无表达,诱导后1周开始表达,2周起表达逐渐增强,8周时阳性细胞比例为30%;Connexin43在诱导前有弱表达,阳性率为5%,诱导后逐渐增强,8周时阳性细胞比例为40%。TGFβ、Nkx25、GATA4和MEF2C基因在诱导后1天表达开始增强,诱导后1周达高峰,以后维持在高水平;TEF1和RARα基因在诱导过程中表达无明显变化。结论TGFβ、Nkx25、GATA4和MEF2C可能是调控MSCs定向分化为心肌样细胞的重要调控基因。
- 张文田杰江德勤张蕾朱静陈沅
- 关键词：调控基因心肌样细胞骨髓间充质干细胞CONNEXIN43GATA-4体外分化
