国家自然科学基金(30271388)
- 作品数：7 被引量：17H指数：3
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- 表皮干细胞基质膜用于结膜重建的实验研究
- 2013年
- 目的利用表皮干细胞与结膜去细胞基质膜体外构建复合基质膜组织,移植于实验动物眼表,评价其在结膜重建应用的可行性及价值。方法新西兰白兔20只,随机分为4组,完全剪除右眼球结膜,并在上方巩膜处植入体外构建的表皮干细胞复合基质膜组织,分别于1、2、3、4周后取移植的复合基质膜组织行冰冻切片,标本分别行PAS染色、人结膜上皮细胞特异性标记蛋白K13抗体、MUC5A/C抗体免疫组化鉴定。结果体外移植后的复合基质膜组织在移植后2、3、4周K13抗体、MUC5A/C抗体表达阳性,并在3、4周呈杯细胞PAS染色阳性。结论利用表皮干细胞与结膜去细胞基质膜共建的复合基质膜组织,在临床结膜重建治疗中可作为一种新型的替代移植物。
- 孟繁剑陈家祺
- 关键词：表皮干细胞结膜重建
- 阳离子聚合体介导下角膜基质注射GFP基因及其表达被引量：7
- 2005年
- 目的研究角膜层间注射阳离子聚合体/质粒复合物转染角膜组织的有效性和安全性。方法用微量进样器将表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组质粒PEGFPC2和阳离子聚合体的混合溶液16μL注射于Wistar大鼠角膜基质,对照组注射等量NS。注射后不同时间点(1、3、14、21d)收集角膜行HE染色、透射电镜和荧光显微镜检查结果电镜证实角膜细胞内可见PEI/DNA颗粒。HE染色未见炎症细胞浸润。实验组角膜1d后GFP开始表达,3d时达到高峰,全角膜均表达阳性,21d时仍有微弱表达。对照组角膜未见荧光表达。结论角膜基质注射阳离子复合体包装的质粒可将外源性基因安全地、相对高效地转入角膜组织。
- 袁进陈家祺周世有陈海
- 关键词：角膜基因转染绿色荧光蛋白
- 眼部脱细胞修复材料的制备与鉴定
- 2012年
- 目的:以不同方法制备脱细胞硬脑膜和巩膜,比较不同方法、浓度、作用时间对硬脑膜和巩膜脱细胞效果的差异,找到适合硬脑膜和巩膜的脱细胞方法。方法:将取自8只新西兰大白兔的硬脑膜和巩膜组织剪成小块,每种组织块均分为8组,每组含有硬脑膜和巩膜两种组织,4组用以5,10,20,50mL/L Triton X-100为主,辅以DNase、RNase的方法处理,另外4组用2.5g/L胰蛋白酶和1g/L SDS分别处理12h+12h,12h+24h,24h+12h,24h+24h。完成后分别从大体观察8组的外观,HE染色比较脱细胞后的细胞残留数,透射电镜观察胶原纤维的超微结构。结果:以Triton X-100处理后的组织外观与处理前相似,2.5g/L胰蛋白酶处理后的组织肿胀增厚。20,50mL/LTriton X-100两组和2.5g/L胰蛋白酶+1g/L SDS处理时间≥36h的三组组织内的细胞残留平均数都小于2个/高倍镜视野。电镜结果证实,硬脑膜和巩膜经过脱细胞处理后,胶原纤维结构同处理前相同,未受到破坏。结论:以Triton X-100处理的硬脑膜和巩膜结构紧凑,胶原纤维保存完好,其中20mL/L Triton X-100浓度处理过的组织残留细胞少,处理前后外观改变少,是适合硬脑膜和巩膜进行脱细胞处理的方法。
- 聂丹瑶陈家祺
- 关键词：脱细胞组织基质
- 阳离子聚合物介导下白细胞介素1受体拮抗剂基因兔角膜原位转染及其表达被引量：3
- 2006年
- 目的探讨阳离子聚合物即线性聚乙烯亚胺(PEI)介导下兔角膜基质注射PEGFP-IL- 1ra质粒进行基因角膜原位转染的有效性和安全性。方法以人cDNA文库为模板进行聚合酶链反应(PCR),获得人IL-1ra cDNA片段,构建重组质粒PEGFP-hIL-1ra。以阳离子聚合物为介导转染角膜内皮细胞,通过绿色荧光蛋白(GFP)示踪、蛋白免疫印迹技术检测转染后IL-1ra基因和蛋白的表达。实验组30只Wistar大鼠角膜基质注射PEGFP-hIL-1ra质粒和PEI-in-vivo的混合溶液20μl(含10μg质粒),对照组15只Wistar大鼠角膜基质注射PEI-in-vivo溶液20μl。注射后1、3、6、14、21 d,收集角膜通过HE染色、透射电镜、锥虫蓝-茜素红染色、免疫组织化学观察1L-1ra基因角膜原位转染后的细胞结构和功能的变化。荧光显微镜下追踪IL-1ra-GFP融合蛋白在角膜的表达部位和表达强度。结果以cDNA文库为模板扩增出hIL-1ra cDNA片段,构建重组质粒PEGFP-hIL-1ra。经PstI和BamHI酶切及DNA测序证实了插入片段方向和大小正确。PEI-in-vitro介导下PEGFP-hIL-1ra转染角膜内皮细胞12 h后,可见10％-15％细胞中有GFP荧光表达。Western-blotting检测可见相对分子质量为44 000的hIL-1ra-GFP蛋白表达。PEGFP-hIL-1ra质粒和PEI-in-vivo角膜基质注射后1 d,角膜上皮基底细胞可见荧光条带,6 d时全角膜荧光强度达到高峰,14 d开始减弱,21d角膜上皮层尚存微弱荧光。对照组观察期内始终未见绿色荧光。实验组角膜HE染色未见病理性改变,角膜上皮基底细胞层p63抗体阳性;锥虫蓝-茜素红联合染色未见角膜内皮细胞损伤;透射电镜显示角膜各层细胞的细胞质内可见IL-1ra-GFP颗粒,未见细胞器的损害。结论阳离子聚合物介导下角膜基质注射PEGFP-hIL-1ra质粒可快速、有效地将IL-1ra基因转入角膜并表达,为临床上使用抗炎细胞因子IL-1ra对角膜免疫炎性反应相关疾病进行基因治疗提供了新的技术平台。
- 袁进陈家祺周世有刘祖国王智崇顾建军
- 关键词：聚乙烯亚胺角膜转染
- 交联型异体脱细胞硬脑膜行眼部修复的形态学及抗原性研究被引量：1
- 2006年
- 目的将交联型异体脱细胞硬脑膜植入眼部,研究其组织相容性及抗原性变化。方法将20只新西兰大白兔随机平均分为两组,去除睑板后,分别植入兔交联型脱细胞硬脑膜和异体硬脑膜,于植入后1、4、8周观察全身免疫学指标的变化;并行光镜和免疫组织化学检查。结果脱细胞硬脑膜植入眼部后炎症反应轻,外周血IgA、IgM、C3和CD4+T细胞、CD8+T细胞的改变无明显差异,脱细胞组外周血IgG(术后1周)和植入局部的CD4+T细胞、CD8+T细胞浸润明显少于异体硬脑膜组。结论脱细胞硬脑膜植入眼睑后引起的免疫反应较异体硬脑膜小。
- 聂丹瑶陈家祺顾建军
- 关键词：脱细胞基质硬脑膜
- 人皮肤干细胞体外诱导分化构建人工结膜的实验被引量：6
- 2006年
- 目的观察皮肤干细胞在结膜去细胞基质上的生长和分化情况,探讨利用皮肤干细胞及结膜去细胞基质构建人工结膜的可能性。方法将体外分离培养的1～2代人皮肤干细胞接种于人结膜去细胞基质上,在体外观察细胞的分化情况。标本分别行HE染色、人上皮细胞角蛋白CK19单克隆抗体、结膜上皮细胞特异性标记蛋白CK8抗体、CK13抗体、MUC5A/C抗体免疫组化鉴定。结果皮肤干细胞在结膜去细胞基质等模拟的体外微环境下可形成类似结膜上皮细胞的复层增生,并有类结膜上皮细胞特异性标记蛋白表达,呈CK8抗体、CK13抗体、MUC5A/C抗体表达阳性。结论利用皮肤干细胞可在体外模拟的微环境下分化构建人工结膜,用于结膜移植眼表重建。
- 孟繁剑陈家祺
- 关键词：皮肤干细胞
- 表皮干细胞分化结膜上皮细胞基因检测的实验研究被引量：2
- 2011年
- 目的通过实时RT-PCR方法检测经定向诱导分化的表皮干细胞分子生物学特性,探讨干细胞疗法用于眼表重建的可行性。方法实验组细胞以结膜上皮细胞为饲养细胞进行共培养,并设立空白对照组细胞培养相同时间,分别于第1、3、5、7天取各组细胞提取RNA进行实时RT-PCR定量检测β2-微球蛋白、角蛋白K13基因的表达水平。结果实验组细胞共同培养3d后出现β2-微球蛋白、角蛋白K13基因的表达,第5、7天的表达量显著提高(P<0.01)。结论经本实验方法定向诱导分化后表皮干细胞可表达与正常结膜上皮细胞相类似的分子生物学特征。
- 孟繁剑陈家祺
- 关键词：皮肤干细胞结膜上皮细胞
