重庆市教委科研基金(KJ090315)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- si-DNMT1对肝门部胆管癌细胞抑癌基因甲基化的作用
- 2011年
- 目的研究RNA干扰对肝门部胆管癌细胞株QBC939抑癌基因甲基化的影响,初步探讨其在胆管癌治疗中的价值。方法构建靶向hDNMT1的发夹式siRNA表达载体;运用脂质体介导法将其转染人胆管癌细胞QBC939;RT-PCR法检测不同时间点hD-NMT1、CDH1、p15的表达水平;MSP方法检测转染前后抑癌基因CDH1、p15的甲基化状态;MTT检测各组细胞的增殖能力。结果 1)hDNMT1的基因沉默恢复了抑癌基因CDH1、p15的表达水平;2)CDH1、p15的表达沉默是由启动子高甲基化导致的;3)转染靶向hDNMT1的发夹式siRNA表达载体能有效地抑制QBC939的增殖能力。结论靶向hDNMT1的发夹式siRNA表达载体能有效、持续、稳定发挥对hDNMT1的基因沉默作用,恢复抑癌基因CDH1、p15的表达水平,从而抑制QBC939肿瘤细胞增殖。
- 向吉锋罗放王济明李修红
- 关键词：肝门部胆管癌甲基化抑癌基因
- hDNMT1基因抑制对胆管癌细胞中p16和RASSF1A基因甲基化的影响
- 2012年
- 目的运用siRNA抑制肝门部胆管癌QBC939细胞系中人DNA甲基转移酶1(Human DNA methylation trans-ferase 1,hDNMT1)基因的表达,探讨hDNMT1基因沉默后对QBC939细胞抑癌基因p16和RASSF1A去甲基化的影响,初步阐明其机制。方法根据GenBank中登录的hDNMT1 mRNA的核苷酸序列设计并合成发夹式siRNA序列,并以此为模板构建siRNA质粒,经脂质体转染QBC939细胞,通过RT-PCR检测hDNMT1、p16、RASSF1A基因mRNA转录水平;甲基特异性PCR(MSP)检测p16、RASSF1A基因的甲基化情况;MTT法检测QBC939细胞增殖活力。结果 sihDNMT1可有效抑制QBC939细胞中hDNMT1基因mRNA转录水平,同时上调p16、RASSF1A抑癌基因mRNA转录水平;sihDNMT1可促进p16、RASSF1A抑癌基因的去甲基化,并抑制QBC939细胞增殖,增殖抑制率在转染后72 h达到峰值。结论 hDNMT基因引起的抑癌基因启动子区异常甲基化是促进肝门部胆管癌发生发展的一个重要因素,抑制hDNMT1基因的表达可促进抑癌基因的去甲基化,为肝门部胆管癌的基因治疗提供了新的思路。
- 李修红罗放向吉锋王济明
- 关键词：DNA甲基转移酶甲基化胆管癌
