国家教育部博士点基金(2004558068)
- 作品数：5 被引量：22H指数：3
- 相关作者：曾园山王俊梅陈穗君闫清黄文林更多>>
- 相关机构：中山大学昆明医学院南方医科大学更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金广东省社会发展攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人神经营养素-3受体TrkC基因重组腺病毒载体的表达和生物学活性检测
- 2006年
- 目的探讨人神经营养素-3受体TrkC基因重组腺病毒载体(Adeno-TrkC)在神经干细胞内的表达及其对神经干细胞的生物活性作用。方法用RT-PCR检测Adeno_TrkC感染的293细胞的TrkCmRNA含量。用免疫细胞化学和Westernblotting检测Adeno-TrkC感染的神经干细胞表达TrkC受体蛋白。在体外培养条件下,观察人神经营养素-3(NT-3)对感染了Adeno-TrkC的神经干细胞分化为神经元样细胞和星形胶质样细胞的影响。结果在Adeno-TrkC感染的293细胞和神经干细胞中检测到TrkCmRNA和TrkC受体蛋白,且表达产物和其配体NT-3结合后能使体外培养的神经干细胞更多地分化为神经元样细胞,分化率达到55.2%,均高于其他对照组。结论Adeno_TrkC能在神经干细胞内表达TrkC受体蛋白,这种TrkC受体蛋白具有促进神经干细胞分化为神经元样细胞活性的作用,这为进一步应用NT-3和TrkC联合进行基因治疗中枢神经损伤研究奠定了基础。
- 王俊梅曾园山黄文林熊轶王延华
- 关键词：TRKC重组腺病毒WESTERNBLOTTING
- 体外培养的嗅鞘细胞能够促进骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞被引量：7
- 2007年
- 目的探讨体外培养的嗅鞘细胞(OECs)对骨髓间充质干细胞(MSCs)分化的影响。方法实验分为OECs+MSCs共培养组和MSCs单独培养组,在7d和14d两时间点观察MSCs的分化情况。用p75抗体免疫细胞化学染色鉴定OECs细胞的纯度;用巢蛋白(nestin)、神经丝蛋白(NF)、微管相关蛋白2(MAP2)、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)、突触后膜致密区蛋白(PSD)等抗体免疫细胞化学染色鉴定已分化的细胞表型。结果体外培养的MSCs经OECs诱导后分化为神经元样细胞,这些细胞能够表达NF、MAP2和PSD等神经元标记物,而不表达星形胶质细胞标记物GFAP。在培养7d,MSCs+OECs7d组的MSCs分化为神经元样细胞的百分率与MSCs7d组比较有明显增高。在培养14d,MSCs+OECs14d组的MSCs分化为神经元样细胞的百分率与MSCs14d组比较,也有明显增高。结论体外培养的嗅鞘细胞能够促进骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞。
- 张燕青曾园山张静丁英闫清陈穗君
- 关键词：骨髓间充质干细胞嗅鞘细胞细胞共培养细胞分化神经元样细胞
- NT-3基因修饰许旺细胞与神经干细胞联合移植促进大鼠全横断脊髓受损伤神经元的存活及其轴突再生被引量：9
- 2005年
- 目的探讨神经营养素-3基因修饰许旺细胞(NT-3-SCs)与神经干细胞(NSCs)联合移植对大鼠因脊髓全横断而受损伤的神经元存活及其轴突再生的作用。方法将NT-3-SCs及LacZ报告基因修饰SCs(LacZ-SCs)与NSCs联合移植到全横断性脊髓损伤处,60 d后在脊髓横断处尾侧注射荧光金(FG)进行逆行标记。第67天,取材进行组织学检测大脑皮质体感区、红核及脊髓横断处头侧FG标记神经元;大脑皮质体感区、红核和脊髓背核内存活的神经元以及脊髓损伤处再生的轴突。结果大脑皮质体感区、红核及脊髓L1背核内存活的神经元由多到少依次为NT-3-SCs与NSCs联合组、LacZ-SCs与NSCs联合组和实验对照组。NT-3-SCs与NSCs联合组和LacZ-SCs与NSCs联合组的大脑皮质体感区、红核和脊髓横断处头侧有FG标记神经元;脊髓横断处及其附近组织有5-HT、CGRP和SP阳性神经纤维。结论NT-3-SCs与NSCs联合移植能够促进脊髓全横断损伤后神经元的存活以及轴突再生。
- 郭家松曾园山李海标黄文林陈穗君
- 关键词：神经营养素-3许旺细胞神经干细胞神经元存活
- NT-3基因修饰及维甲酸预诱导的骨髓间充质干细胞在脊髓损伤处分化为神经元样细胞的研究被引量：3
- 2008年
- 目的探讨移植在脊髓损伤处的神经营养素-3(NT-3)基因修饰及维甲酸(RA)预诱导的骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为神经元样细胞的潜能。方法将MSCs、RA诱导的MSCs、LacZ基因修饰的MSCs、NT-3基因修饰的MSCs和NT-3基因修饰及RA预诱导的MSCs分别立即移植到脊髓全横断处(T10脊髓),术后67d取材和冷冻切片,用免疫荧光组织化学染色方法检测MSCs的分化潜能,计算各细胞移植组脊髓损伤处的MSCs分化为神经元样细胞的百分率。结果移植的MSCs在受损伤的脊髓内可分化为神经干细胞(nestin阳性)、神经胶质样细胞(GFAP阳性)和神经元样细胞(NF和MAP2阳性),有些还可以向含有某种神经递质和有形成突触潜能的神经元样细胞分化(ChAT、5-HT和PSD95阳性)。联合应用NT-3基因修饰和RA预诱导的MSCs能在受损伤的脊髓内更有效地提高MSCs向神经元样细胞分化的百分率。结论NT-3基因修饰和RA预诱导的MSCs能在脊髓损伤处更好地分化为神经元样细胞。
- 张巍曾园山张雪宝王俊梅闫清唐久余陈穗君
- 关键词：骨髓间充质干细胞神经营养素-3维甲酸脊髓损伤重组腺病毒载体神经元样细胞
- 人神经营养素-3基因重组腺病毒载体的构建、表达和生物活性检测被引量：5
- 2005年
- 目的构建具有生物活性的人神经营养素_3(NT_3)基因重组腺病毒表达载体。方法从人脑组织mRNA中扩增NT_3基因全长cDNA,定向克隆于穿梭质粒pShuttle中,获得一个带有CMV启动子的质粒。再与腺病毒骨架DNA(Adeno-X viral DNA)体外连接,形成重组腺病毒质粒(pAd_NT_3)。用pAd_NT_3转染人胚肾293细胞后包装成有感染能力的重组腺病毒颗粒(Adeno_NT_3)。结果NT_3基因RT-PCR扩增产物约801 bp。Adeno_NT_3 PCR鉴定为正确重组子。RT_PCR、免疫细胞化学、ELISA及Western blot检测显示,Adeno_NT_3能在其转染的293细胞表达和分泌NT_3。这种NT_3能使体外培养的神经干细胞更多地分化为神经元样细胞。结论应用体外连接法成功构建了人NT_3基因重组腺病毒表达载体,其表达产物具有促进神经干细胞分化为神经元样细胞的活性作用。
- 王俊梅曾园山刘然义吴立志薛刚黄文林熊轶王延华
- 关键词：神经营养素-3重组腺病毒神经干细胞免疫细胞化学
