国家自然科学基金(30571563)
- 作品数：14 被引量：84H指数：6
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- 相关机构：天津医科大学天津市神经病学研究所天津市环湖医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 叶酸对胎鼠神经干细胞体外增殖的影响被引量：6
- 2008年
- 目的探讨叶酸对体外培养的胚胎大鼠神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖的影响。方法本研究采用显微解剖、机械吹打、无血清悬浮培养方法分离培养鼠胚大脑NSCs,用巢蛋白(nestin)免疫荧光染色对其进行鉴定,5'-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)掺入法检测细胞增殖状态;设立正常对照组,叶酸低、高剂量(培养液中添加叶酸4.0 40 mg/L)和叶酸缺乏组(培养液中添加叶酸拮抗剂甲氨蝶呤0.4mg/L);通过nestin+BrdU免疫荧光双标记和绘制细胞生长曲线(MTT法)检测叶酸对细胞增殖状态的影响。结果无血清培养液中可形成大量呈nestin抗原阳性细胞组成的神经球,BrdU免疫标记证实培养的NSCs具有增殖能力。免疫荧光双标记和MTT结果显示,两个叶酸干预组NSCs增殖能力较对照组显著增强。结论体外培养的胚胎大鼠NSCs具有增殖和自我更新的能力;叶酸可以在一定程度上增强NSCs的增殖能力,促进神经干细胞的生长。
- 张绪梅黄国伟姬长珍张文治苏心
- 关键词：叶酸神经干细胞NESTINBRDU免疫荧光双标记
- 叶酸对脑梗死大鼠星形胶质细胞GFAP表达的影响被引量：5
- 2008年
- 目的:探讨叶酸对脑梗死大鼠星形胶质细胞纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。方法:将SD大鼠随机分为假手术(SO)组、缺血(IM)组、缺血+低剂量叶酸(IM+LFA)组和缺血+高剂量叶酸(IM+HFA)组。通过叶酸灌胃给药28d后制备大脑中动脉栓塞模型,采用免疫荧光双标记的方法检测各组大鼠脑缺血后脑组织GFAP的荧光强度及BrdU+GFAP双标阳性细胞密度。结果:在7d及14d4组均可见BrdU+GFAP双标阳性星形胶质细胞,缺血+叶酸组GFAP荧光强度及BrdU+GFAP双标阳性细胞密度均高于IM组及SO组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:补充叶酸可以使星形胶质细胞GFAP表达增强,并促进神经干细胞的分化,从而对脑梗死大鼠具有保护作用。
- 赵莹黄国伟常红张绪梅
- 关键词：叶酸脑梗死星形细胞神经胶质原纤维酸性蛋白质溴脱氧尿苷
- 甲氨蝶呤对体外培养神经干细胞的毒性作用被引量：1
- 2009年
- 目的:观察甲氨蝶呤(MTX)对体外培养的神经干细胞(NSC)毒性作用的特点,并初步探讨其毒性机制。方法:体外培养胎鼠大脑皮质NSCs,采用Nestin免疫荧光法进行鉴定;光镜下观察MTX干预后NSC形态变化;采用5-溴脱氧尿苷(BrdU)掺入法和Nestin/BrdU免疫组化双标记检测MTX对NSCs增殖的影响;流式细胞术分析细胞周期变化;高压液相法检测细胞内同型半胱氨酸(Hcy)的浓度。结果:400μg/LMTX可引起明显的细胞形态改变;免疫荧光双标记结果显示,与对照组相比,MTX干预组可明显抑制NSCs增殖(P<0.05);MTX干预48h后,细胞停留在G1期的比例比空白对照组明显增加;MTX还可引起细胞内Hcy浓度升高。结论:MTX可能通过改变细胞周期和升高细胞内Hcy浓度而对体外培养NSCs产生明显的毒性损伤作用。
- 张绪梅黄国伟田志红任大林
- 关键词：甲氨蝶呤干细胞神经系统半胱氨酸
- 叶酸对胎鼠大脑神经干细胞增殖蛋白表达影响被引量：10
- 2008年
- 目的研究叶酸对胎鼠大噙神经干细胞（NSCs）增殖的影响及其作用机制。方法采用孕14～16dSD胎鼠，进行NSCs原代培养。将NSCs分为4组：对照组、叶酸缺乏组、叶酸低剂量组、叶酸高剂量组。收集培养6d的细胞，采用5-溴脱氧尿苷（BrdU）掺入法和免疫组化双标记检测NSCs的增殖情况，采用蛋白印迹法（Westernblot）检测胎鼠增殖期NSCs活化的细咆外信号调节激酶1／2（pERKl／2）的表达含量。结果叶酸低剂量组、高剂量组BrdU＋巢蛋白（Nestin）阳性细胞占总细胞（70．5±2．7），（78．8±6．9）％与对照组（64．2±8．9）％比较，差异均有统计学意义，且高剂量组明显高于低剂量组（P〈0．05）；叶酸低剂量组、高剂量组pERKl蛋白的表达（0．407±0．018），（0．443±0．019）与对照组（0．388±0．011）比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。叶酸低剂量组、高剂量组pERK2蛋白的表达（0．547±0．044），（0．563±0．041）与对照组（0．507±0．018）比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论叶酸能够促进胎鼠NSCs的增值。其作用机制可能是通过丝裂原活化蛋白激酶信号通路调节NsCs的增殖。
- 王广雷黄国伟张绪梅丛革新姬长珍田志红
- 关键词：叶酸神经干细胞增殖
- 叶酸对局灶性脑缺血大鼠血浆同型半胱氨酸的影响被引量：1
- 2009年
- 目的:探讨叶酸对局灶性脑缺血大鼠血浆同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)含量的影响,为研究维生素防治脑梗死提供理论依据。方法:SD雄性大鼠32只,随机分为4组,假手术(SO)组、缺血(IM)组、缺血+叶酸低剂量[IM+LFA,4mg/(kg·d)]组、缺血+叶酸高剂量[IM+HFA,12mg/(kg·d)]组。叶酸灌胃28d后制备大脑中动脉闭塞(MCAO)模型。分别于叶酸灌胃前后和缺血后用化学免疫发光法测定血清中叶酸含量,用高效液相色谱(HPLC)法测定大鼠血浆Hcy浓度。结果:叶酸灌胃前,各组大鼠各项指标的差异均无统计学意义(P>0.05);叶酸灌胃后及缺血后,IM+LFA组、IM+HFA组血清叶酸水平高于SO组和IM组(P<0.01);叶酸灌胃后,IM+LFA组、IM+HFA组血浆Hcy水平低于叶酸灌胃前和SO、IM组(P<0.01);造模后,IM+LFA组、IM+HFA组血浆Hcy水平低于灌胃前和SO组、IM组(P<0.01),IM+HFA组低于IM+LFA组(P<0.01)。结论:补充叶酸可以提高局灶性脑缺血大鼠体内血清叶酸含量,降低血浆同型半胱氨酸水平,从而起到保护作用。
- 卢瑾黄国伟常红张绪梅刘欢
- 关键词：叶酸半胱氨酸脑缺血色谱法高压液相
- 叶酸对体外胎鼠神经干细胞增殖分化的影响被引量：9
- 2007年
- 目的探讨叶酸对体外培养的胚胎大鼠神经干细胞(NSCs)增殖分化的影响。方法采用无血清悬浮培养方法分离培养NSCs,光镜下观察不同时间点各组NSCs形态变化,并采用MTT法、生长曲线法检测叶酸对细胞增殖和功能的影响。培养6天后用含5%胎牛血清的培养基进行分化培养,于分化第7天用免疫荧光技术做Nestin/BrdU双标染色,共聚焦显微镜下观察,每组随机选择8个非重叠视野,计数做统计处理。结果MTT结果显示,两叶酸干预组NSCs增殖较对照组快(P<0.05),分化后免疫荧光双标试验中,两叶酸干预组NSCs增殖率高于正常对照组,且差异有显著性(P<0.05)。结论叶酸可以在一定程度上增强NSCs的增殖能力,促进NSCs的生长与分化。
- 姬长珍黄国伟张文治苏心
- 关键词：叶酸神经干细胞体外NESTINBRDU
- 胚胎大鼠神经干细胞体外分化的激光共聚焦显微镜观察被引量：2
- 2008年
- 目的:采用激光扫描共聚焦显微镜观察体外培养胎鼠大脑皮质神经干细胞(neural stem cells,NSCs)分化情况。方法:利用无血清培养方法,分离培养胚胎大鼠大脑NSCs,进行体外扩增培养、传代;采用溴脱氧尿嘧啶核苷(bromodeoxyuridine,BrdU)掺入、双重免疫荧光细胞化学标记方法和激光扫描共聚焦显微镜,用神经细胞的特异性抗体(神经元β-微管蛋白、胶质纤维酸性蛋白),鉴定NSCs向神经元与星形胶质细胞分化的情况。结果:从胎鼠大脑皮质及皮质下分离的组织,经原代和传代培养均可形成细胞克隆,并表达神经上皮干细胞蛋白(Nestin)抗原。在血清诱导下,分化后的细胞表达神经元、星形胶质细胞2种神经细胞的特异性抗原,NSCs分化为星形胶质细胞神经元的比例分别为(43.70±8.55)%和(23.00±3.69)%。结论:从胎鼠大脑皮质分离出的细胞可获得呈集落样生长的神经干细胞团,并能表达NSCs的特异性抗原;激光扫描共聚焦显微镜可清晰地观察到培养细胞具有分化为神经元和星形胶质细胞的潜能。
- 任大林黄国伟张绪梅刘欢
- 关键词：大脑皮质胚胎激光显微镜检查溴脱氧尿苷
- 胎鼠神经干细胞分离培养和鉴定被引量：5
- 2007年
- 目的:建立胎鼠神经干细胞体外培养方法,观察神经干细胞生长特点。方法:采用含碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和表皮生长因子(EGF)的无血清培养基对大鼠胚胎大脑组织细胞悬液进行培养,细胞免疫荧光方法对神经干细胞鉴定,MTT法测定不同细胞密度的OD值,绘制生长曲线。结果:从胎鼠脑组织分离培养的细胞巢蛋白阳性。MTT结果显示细胞接种密度以2(×104～105)/ml生长良好(r=0.95,P<0.05)。结论:无血清培养基分离培养的胎鼠脑组织神经干细胞具有自我更新和增殖能力,巢蛋白细胞免疫鉴定为神经干细胞。
- 田志红黄国伟姬长珍张绪梅王广雷张文治苏心
- 关键词：神经干细胞细胞培养免疫荧光胎鼠
- 高效液相色谱法测定血浆中同型半胱氨酸被引量：13
- 2006年
- 任大林黄国伟刘欢刘莉
- 关键词：HPLC同型半胱氨酸梯度洗脱
- 叶酸、维生素B_6、B_(12)对脑缺血大鼠学习记忆的影响被引量：2
- 2007年
- 目的研究叶酸、维生素B_6(VB_6)和 B_(12)(VB_(12))对局灶性脑缺血大鼠血浆同型半胱氨酸(homocysteine,Hey)水平和学习记忆能力的影响。方法 SD 大鼠按体重随机分为假手术组(ShamOP)、大脑中动脉闭塞模型组(MCAO)、大脑中动脉闭塞+叶酸组(MCAO+FA)和 MCAO+复合维生素(叶酸、VB_6和 VB_(12))组(MCAO+CV),补充前、后和缺血后分别检测大鼠血浆 Hcy 浓度,缺血后进行神经功能评分,测定学习记忆能力。结果大鼠脑缺血后血浆 Hcy 浓度 MCAO+FA 组(6.92±1.04) μmol/L 和 MCAO+CV 组(5.49±1.00)μmol/L 低于 Sham OP 组(9.33±1_11)μmol/L 和MCAO 组(10.90±2.03)μmol/L(P<0.05),且 MCAO+CV 组低于 MCAO+FA 组(P<0.05);神经功能缺失评分 MCAO+FA 组(1.75±0.46)和 MCAO+CV 组(1.38±0.52)以及 Y 型迷宫中受电击次数MCAO+FA 组(123.50±39.77)和 MCAO+CV 组(86.25±21.39)低于 MCAO 组神经功能缺失评分(2.62±0.52)和电击次数(173.25±46.32)(P<0.05),而记忆正确次数 MCAO+CV 组(3.75±0.42)高于 MCAO 组(2.12±0.45)(P<0.05)。结论叶酸能降低脑缺血大鼠血浆 Hcy 浓度,增强脑缺血大鼠学习记忆能力,改善神经功能,且联合补充 VB_6和 VB_(12)优于单独补充叶酸。
- 黄国伟刘欢王永明任大林
- 关键词：脑缺血高半胱氨酸叶酸维生素B12
