重庆市自然科学基金(cstc2011jjA10004)
- 作品数：6 被引量：20H指数：2
- 相关作者：周宏灏温纯洁吴兰香张涛李絮更多>>
- 相关机构：重庆医科大学中南大学皖南医学院弋矶山医院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- CYP2C19基因多态性真核表达载体的构建及稳定转染细胞系的建立
- 2012年
- 目的:构建细胞色素P450CYP2C19*1、*2、*3真核表达载体,并分别转染人肝癌细胞(HepG2),建立高表达目的基因的稳定转染细胞系。方法:应用化学合成法合成CYP2C19*1(野生型)序列,再以此为模板,体外定点突变PCR法构建*2、*3(突变型)。DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pcDNA3.l(-),经菌落PCR、酶切以及测序鉴定后,脂质体转染法转染HepG2细胞,通过G418选择培养,建立稳定转染细胞系,RT-PCR、Western Blot分别检测CYP2C19*1、*2、*3 mRNA以及蛋白的表达。结果:成功构建了pcDNA3.1(-)-CYP2C19*1、*2、*3表达质粒,并建立了相应稳定转染细胞系。进一步的RT-PCR和Western Blot检测结果表明,目的基因均得到了稳定的表达。结论:人CYP2C19*1、*2、*3稳定表达细胞系为研究创新药物或新药先导化合物临床前代谢性质的筛选和预测以及为临床潜在药物相互作用提供了有效实验平台。
- 陈旺俞竟屈强张伟李智吴兰香温纯洁周宏灏
- 关键词：CYP2C19基因多态性真核表达转染
- 姜黄素对乳腺癌MCF-7与MCF-7/DOX细胞中P-糖蛋白表达的影响及其机制研究被引量：7
- 2015年
- 目的:研究姜黄素对人乳腺癌MCF-7与MCF-7/DOX细胞中P-糖蛋白表达的影响及其作用机制。方法:MTS比色法检测姜黄素对MCF-7与MCF-7/DOX细胞多柔比星敏感性的影响;实时定量PCR与Western Blot方法检测姜黄素处理后,MCF-7与MCF-7/DOX细胞中P-糖蛋白在mRNA与蛋白质水平的表达变化;流式荧光法检测姜黄素对MCF-7与MCF-7/DOX细胞中多柔比星药物浓度的影响;亚硫酸氢盐处理后测序(bisulfite sequencing PCR,BSP)法检测姜黄素处理前后MCF-7与MCF-7/DOX细胞中P-糖蛋白编码基因多药耐药基因1(multidrug resistance protein1,MDR1)启动子区甲基化状态的改变。结果:与对照组相比,姜黄素处理后,MCF-7和MCF-7/DOX细胞多柔比星IC50值显著下降(P<0.05);姜黄素处理后,MCF-7和MCF-7/DOX细胞中的P-糖蛋白在mRNA及蛋白质水平的表达均有显著上调(P<0.05),而细胞内多柔比星的药物浓度下降;MCF-7和MCF-7/DOX细胞中MDR1基因启动子区域的甲基化程度在姜黄素处理后明显降低(P<0.05)。结论:姜黄素可增强乳腺癌MCF-7与MCF-7/DOX细胞多柔比星敏感性,但同时可显著诱导P-糖蛋白表达水平增高,从而降低细胞内多柔比星药物浓度,此作用与其对MDR1基因去甲基化功能密切相关。
- 王寅声李晓智沈杰李絮温纯洁吴兰香周宏灏
- 关键词：姜黄素MCF-7细胞P-糖蛋白DNA甲基化
- 大蒜素对肝脏药物转运体OATP1B1转运功能的影响被引量：1
- 2013年
- 目的:观察大蒜素对肝脏药物转运体-有机阴离子转运多肽1B1(Organic anion transportingpolypeptide 1B1,OATP1B1)转运功能的影响。方法:利用稳定表达人OATP1B1的人胚胎肾293(Human embryonic kidney 293,HEK293)细胞株,以[3 H]硫酸雌酮和普伐他汀为底物进行OATP1B1摄取反应,观察大蒜素对OATP1B1摄取功能的影响。结果:大蒜素对OATP1B1摄取[3 H]硫酸雌酮和普伐他汀的功能有竞争性抑制作用,抑制常数Ki值分别为(18.3±5.2)μmol/L和(15.4±6.8)μmol/L。结论:大蒜素对肝脏药物转运体OATP1B1转运功能的抑制作用可诱导中药-西药相互作用。
- 杨国营马凯吴兰香张伟周宏灏
- 关键词：大蒜素OATP1B1
- 姜黄素通过调控组蛋白乙酰化修饰上调乳腺癌MCF-7和MCF-7/DOX细胞中MDR1表达被引量：2
- 2017年
- 目的:从组蛋白乙酰化修饰角度探讨姜黄素上调乳腺癌MCF-7和MCF-7/DOX细胞中多药耐药基因1(multidrug resistance protein 1,MDR1)表达水平的作用机制。方法:CCK-8(Cell Counting Kit-8)法观察姜黄素对MCF-7和MCF-7/DOX细胞生长增殖以及多柔比星敏感性的影响;Realtime PCR和Western blot方法检测姜黄素处理前后两种细胞中MDR1 mRNA和蛋白质表达水平的变化;染色质免疫共沉淀技术(chromatin immunoprecipitation assay,CHIP)检测姜黄素对两种细胞中MDR1启动子区相关组蛋白H3、H4乙酰化水平的影响。结果:不同浓度姜黄素处理72 h对MCF-7和MCF-7/DOX细胞的生长增殖有显著抑制作用,其IC50值分别为22.03μmol/L和27.46μmol/L;10μmol/L姜黄素处理72 h可显著提高两种细胞多柔比星敏感性,多柔比星IC50值分别下降了57.14%和54.52%(P<0.05);姜黄素处理MCF-7和MCF-7/DOX细胞后,MDR1在mRNA水平分别上调(32.90±0.96)和(5.70±0.55)倍(P<0.05),在蛋白质水平分别上调(2.26±0.18)与(2.90±0.21)倍(P<0.05);CHIP结果显示姜黄素对两种细胞中MDR1启动子区相关组蛋白H3、H4的乙酰化水平均有显著上调作用。结论:姜黄素在增强MCF-7和MCF-7/DOX细胞多柔比星敏感性的同时,可通过调控MDR1启动子区相关组蛋白H3、H4的乙酰化水平而上调MDR1的表达。
- 李絮代谊黄家凤温纯洁邹镇吴兰香王果周宏灏
- 关键词：姜黄素MCF-7多药耐药基因1
- 风湿性心脏病易感基因多态性研究进展被引量：10
- 2013年
- 风湿性心脏病(Rheumatic heart disease,RHD)是一种A组溶血性链球菌感染引起的风湿热的后遗症,属于自身免疫性疾病,主要表现为瓣膜口狭窄或关闭不全。大约30%～45%的风湿热(Rheumatic fever,RF)患者会发展为风湿性心脏病,这就提示风湿性心脏病可能存在着个体易感性的差异。对RHD易感性的研究,有助于进一步探讨其发病的分子机制,为RHD的防治提供新的思路。随着人类基因组计划的迅速发展及新的分析技术问世,RHD遗传易感性研究有了很大的发展。目前已知多种遗传基因与人类RHD易感性有关联,例如白细胞抗原(HLA)、肿瘤坏死因子(TNF)等,某些易感基因与炎症反应及免疫系统相关,本文主要就近年来RHD遗传易感性的研究进展作一综述。
- 张涛温纯洁沈冬亚周宏灏
- 关键词：风湿性心脏病遗传易感性基因多态性
- ficolins基因多态性与临床疾病易感性的研究进展
- 2013年
- ficolins是天然免疫中的一种模式识别分子,最早被作为转化生长因子β1结合蛋白从猪子宫内膜中分离而来。ficolins与甘露聚糖结合植物凝集素功能相似,能结合病原微生物的糖类配基,通过补体途径和调理吞噬作用消灭病原体,在天然免疫中发挥重要作用。迄今为止,已发现M-ficolin,L-ficolin和H-ficolin 3种人类ficolin蛋白,分别由FCN1,FCN 2和FCN 3基因编码。随着研究的深入,越来越多的学者开始关注FCN基因多态性与疾病易感性之间的关系。大量研究发现,FCN基因多态性与疾病的易感性、严重性及疾病的发生发展密切相关。本文就FCN基因多态性与相关疾病易感性间的关系进行简述。
- 张涛周宏灏
- 关键词：FICOLINS基因多态性疾病易感性
