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通过载体表达siRNAs抑制禽流感病毒复制的研究被引量：10: 2006年; 禽流感病毒是养禽业危害最严重的病原微生物之一。为探讨小干涉RNA(siRNA)对A型禽流感病毒复制的干扰作用,以H5亚型AIV PB2基因为靶序列,设计合成了4对编码siRNAs的DNA序列,将其克隆到psiRNA-hH1neo载体中,构建siRNAs表达载体,鉴定正确后将重组质粒转染MDCK细胞,采用G418筛选建立抗性细胞系,用血凝(HA)试验和real time RT-PCR试验检测抑制效果, 在细胞水平筛选出具有高效抑制AIV复制的2个靶位点PB2-1154、PB2-342、为AIV的基因功能研究,抗病毒药物的开发和转基因动物的研究奠定了基础。; 操胜刘光亮孟庆文杨增岐亓文宝于康震吴东来; 关键词：禽流感病毒 RNA干扰

靶向PB2基因的特异性siRNA抑制禽流感病毒(AIV)复制被引量：3: 2008年; 根据siRNA设计原则,设计并合成5对靶向禽流感病毒(AIV)PB2基因的siRNA(PB2374,PB2665,PB2936,PB21031和PB21233),将其转染MDCK细胞,分别于转染前和转染后感染H5N1禽流感病毒A/Goose/Guang dong1/96株;在转染后24h、48h和72h分别收集上清液;通过血凝试验(HA)和Real-time PCR检测siRNA抑制AIV增殖的效果。血凝试验结果表明:所设计的5对siRNA中,PB2374抑制AIV增殖的效率为68%～71%,PB2963抑制AIV增殖效率为78%～81%;Real-time PCR检测到PB2374转染组PB2基因的转录水平与对照组比较降低3～3.3倍,PB2963转染组PB2基因的转录水平降低3.9～4.2倍。无论siRNA是先于还是迟于AIV感染,这两对siRNA都能明显地抑制AIV的增殖;本研究结果为开发抗AIV治疗制剂和动物机体抗AIV研究奠定了基础。; 刘丹亓文宝孟庆文秦红刚李文超司昌德刘家森曲连东; 关键词：AIM SIRNA

靶向新城疫病毒L基因(功能区)的siRNA抑制新城疫病毒的复制被引量：4: 2008年; 本研究以新城疫病毒(NDV)L蛋白的功能区(P1595、P2103和P3277酶活性中心结构区)序列为RNAi的靶位点,设计、构建了3个特异性的siRNA的真核表达质粒pSi-L6、pSi-L7和pSi-L9,转染到CEF细胞后接种NDV,间接免疫荧光实验结果显示:pSi-L6、pSi-L7和pSi-L9均能抑制NDV抗原蛋白的表达;Real-timePCR检测到转染pSi-L6、pSi-L7和pSi-L9的CEF细胞中L基因的转录水平分别降低79.1%、93.9%和91.3%,P基因的转录水平分别降低73%、86.3%和89.8%;病毒滴度测定表明转染pSi-L6、pSi-L7和pSi-L9质粒的细胞培养上清中病毒的滴度分别低2.19、3.16和5.24倍。本研究中3个特异性的siRNA均能抑制NDV的复制、增殖,表明P1595、P2103和P3277这3个区域对于L蛋白发挥RNA依赖的RNA聚合酶的功能具有重要作用。; 秦红刚孟庆文刘丹李文超韩凌霞姜骞刘家森曲连东; 关键词：NDV RNAI

miRNA表达载体的构建与抑制禽流感病毒(AIV)复制的研究: miRNA是一类内源性的长约21nt～25nt的短序列非编码单链RNA,可以通过部分互补或者完全互补结合到目的靶mRNA,以诱发蛋白质翻译抑制(翻译抑制子)或者介导目的mRNA的降解调节基因表达。根据这一特性,设计靶向禽...; 孟庆文刘丹秦红刚李文超曲连东; 关键词：MIRNA 病毒抑制; 文献传递

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国家自然科学基金(30300258)