河南省科技攻关计划(122102110109)
- 作品数：5 被引量：10H指数：3
- 相关作者：张春杰程相朝何雷廖成水陈松彪更多>>
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- 不同首免日龄猪群免疫PRRS弱毒苗效果比较研究被引量：1
- 2014年
- 为比较不同首免日龄猪群免疫PRRS弱毒苗的效果,以及制订合理的免疫程序,试验选取同一免疫程序母猪群所产仔猪,将其分为4组,每组15头,分别在不同日龄用正常剂量PRRS弱毒苗进行免疫接种,免疫后每组随机抽样8头进行PRRS抗体检测分析,以确定最佳首免日龄。在此基础上,另选一猪群,分为2组,每组10头,进行加强免疫,于不同时间段随机抽样检测PRRS抗体水平。结果表明:仔猪免疫PRRS弱毒苗后,首免日龄为35日龄时抗体水平最好;二次免疫后,抗体水平都有上升,且可以长时间保持在较高水平。
- 布玮玮王小三何雷宋宏晓师丽刚赵星灿张春杰
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征首免日龄二次免疫抗体免疫效果
- 表达PRRSV GP5蛋白重组减毒猪霍乱沙门菌C78-1构建及生物学特性
- 为了构建表达猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒PRRSVGP5蛋白口服重组减毒猪霍乱沙门氏菌活载体疫苗株,通过PCR克隆去除信号肽序列的PRRSVORF5基因,将其插入到表达载体pYA3493中,构建了重组质粒pYA3493-d...
- 张淼丹张明亮张春杰张俊峰贾艳艳何雷程相朝
- 关键词：减毒猪霍乱沙门菌生物学特性
- 鼠伤寒沙门菌crp基因缺失株SL1344Δcrp生物学特性的测定被引量：3
- 2015年
- 为研究crp基因缺失后引起的减毒机制,本试验对鼠伤寒沙门菌crp基因缺失株SL1344Δcrp的有关生物学特性进行了测定。结果显示,与亲本菌株相比,缺失株失去了运动能力;SL1344Δcrp不表达纤维素和菌毛,不能形成生物被膜;SL1344Δcrp对细胞增殖和细胞毒性的影响均弱于亲本菌株;crp基因缺失后缺失株对上皮细胞的黏附和侵入能力与亲本菌株相比无明显差异。上述结果表明,crp基因不仅是重要的毒力基因,还是生物被膜形成的调控基因;这些结果为深入研制以鼠伤寒沙门菌为载体的口服多价疫苗奠定了基础。
- 陈松彪张春杰陈慧敏程相朝廖成水李静李静何雷张明亮郁川余祖华贾艳艳
- 关键词：鼠伤寒沙门菌运动性生物被膜
- 稳定表达PRRSV ORF5-ORF6融合基因重组减毒猪霍乱沙门菌的构建及其生物学特性被引量：1
- 2017年
- 为构建能稳定表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5-ORF6融合基因的重组减毒猪霍乱沙门菌,以p MD19-T-ORF5-7为模板,PCR分别扩增出ORF5和ORF6,将2个基因先后插入表达载体PYA3493,构建了重组质粒PYA3493-ORF5-ORF6。PCR、双酶切及测序结果表明,成功构建了重组质粒p YA3493-ORF5-ORF6。将该重组质粒电转至减毒猪霍乱沙门菌ΔcrpΔcyaΔasd C78-1基因缺失株,获得PRRSVORF5-ORF6融合基因重组减毒猪霍乱沙门菌ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493-ORF5-ORF6),并对该重组减毒猪霍乱沙门菌的生长特性、遗传稳定性和表达特性进行了测定。进一步对重组减毒猪霍乱沙门菌ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493-ORF5-ORF6)研究发现,其生长速度比强毒株C78-1明显减慢,与ΔcrpΔcyaΔasd C78-1缺失株及ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493)互补菌株基本一致。在体外连续传代能够稳定遗传ORF5-ORF6融合基因。重组菌培养上清经SDS-PAGE能检测到ORF5-ORF6蛋白条带,且经Western-blot分析证实,重组菌共表达的GP5和M蛋白能与PRRSV阳性血清特异性结合。以上结果表明,能稳定携带ORF5-ORF6融合基因的重组减毒猪霍乱沙门菌ΔcrpΔcyaΔasd C78-1(p YA3493-ORF5-ORF6)构建成功,为开发猪繁殖与呼吸综合征和仔猪副伤寒基因工程二联疫苗奠定了良好基础。
- 杨亚东张俊峰张春杰陈松彪程相朝廖成水刘莎莎王二鑫张晓洁尚珂汪洋
- 关键词：PRRSV生物学特性
- 表达PRRSV GP5蛋白重组减毒猪霍乱沙门菌C78-1构建及生物学特性
- 为了构建表达猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒PRRSVGP5蛋白口服重组减毒猪霍乱沙门氏菌活载体疫苗株,通过PCR克隆去除信号肽序列的PRRSVORF5基因,将其插入到表达载体pYA3493中,构建了重组质粒pYA3493-d...
- 张淼丹张明亮张春杰张俊峰贾艳艳何雷程相朝
- 关键词：减毒猪霍乱沙门菌生物学特性
- 文献传递
- 表达PRRSV GP5蛋白重组减毒猪霍乱沙门菌C78-1的构建及生物学特性被引量：3
- 2013年
- 为了构建表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白口服重组减毒猪霍乱沙门菌活载体疫苗株,通过PCR克隆去除信号肽序列的PRRSV ORF5基因,将其插入表达载体pYA3493中,构建了重组质粒pYA3493-dORF5。将该重组质粒电转入猪霍乱沙门菌基因缺失株(缺失crp,asd基因),获得PRRSV ORF5基因减毒猪霍乱沙门菌ΔcrpΔasdC78-1(pYA-dORF5)重组菌。对重组菌表型性状、生长特性、稳定性及安全性进行测定,并对重组菌表达的GP5蛋白进行SDS-PAGE和Western-blot分析。结果显示,该菌株保留了在DAP阴性环境中生存的能力;不能利用麦芽糖、蔗糖及果糖等碳源,但保留了利用葡萄糖的能力,其生长速度低于强毒株C78-1,而与ΔcrpΔasdC78-1相比变化不明显;在体外连续传代能够稳定遗传dORF5目的基因片段。Western-blot分析证实重组菌表达的GP5蛋白能与PRRSV阳性血清特异性结合;通过口服途径测得亲本强毒株C78-1和猪霍乱沙门菌弱毒疫苗株C500的毒力分别是重组菌ΔcrpΔasdC78-1(pYA-dORF5)的492倍和1.31倍。表明,成功构建了能稳定表达PRRSV GP5蛋白的口服重组减毒猪霍乱沙门菌,为研究PRRSV口服基因工程疫苗奠定了良好的基础。
- 张淼丹张明亮张俊峰张春杰程相朝李银聚何雷
- 关键词：PRRSVORF5生物学特性
- 鼠伤寒沙门菌SL1344株△crp△sipB缺失株生物学特性的检测被引量：3
- 2015年
- 目的进一步深入研究△crp△sipB双基因缺失株的减毒机制。方法以鼠伤寒沙门菌亲本菌株SL1344和△crp△sipB双基因缺失株为研究对象，利用细菌在半固体培养基上形成的运动圈进行流动性的检测，通过比色法测定出乳酸、丙酮酸的含量以及上皮细胞增殖快慢。结果在半固体培养基上双缺失株形成的运动圈直径与亲本菌株相比发生了显著的降低，表明缺失株的运动能力弱于亲本株；对培养不同时间点的缺失株和亲本株菌体的丙酮酸、乳酸测定结果显示：缺失株菌体内的丙酮酸含量在培养后6、9和12h均高于亲本株组（P〈0．05），乳酸含量在9h以后也高于亲本株组（P〈0．05），结果表明缺失株的糖酵解能力高于亲本株组；对HeLa细胞的增殖和毒性试验结果表明，在感染细胞后各个时间点△crp△sipB基因缺失株组的A530值均高于亲本菌株组（P〈0．05），说明双基因缺失后对细胞增殖和细胞毒性的影响均弱于亲本菌株；△crp△sipB基因缺失后对上皮细胞的黏附和侵入能力与亲本菌株相比发生显著降低（P〈0．05）。结论上述结果为深入研究以鼠伤寒沙门菌为载体的口服多价疫苗奠定基础。
- 张春杰陈松彪程相朝李静廖成水何雷郁川余祖华
- 关键词：运动性细胞毒性糖酵解
