浙江省自然科学基金(LR12H27001) 作品数:23 被引量:306 H指数:11 相关作者: 张宇燕 万海同 周惠芬 周鹏 何昱 更多>> 相关机构: 浙江中医药大学 山东步长制药有限公司 浙江省中医院 更多>> 发文基金: 浙江省自然科学基金 国家自然科学基金 国家教育部博士点基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 化学工程 更多>>
川芎、黄芪有效成分配伍对缺氧脑微血管内皮细胞的影响 被引量:40 2015年 目的观察黄芪、川芎中的有效成分黄芪甲苷、川芎嗪、阿魏酸、毛蕊异黄酮、藁本内酯的正交组合配伍对SD乳鼠脑微血管内皮细胞(rBMVECs)缺氧损伤的保护作用,并找出较优组合。方法 rBMVECs原代传代培养,并建立缺氧模型,4h后观察细胞形态,MTT法测定各成分的最大耐药质量浓度,以L_(18)(3~5)正交表设计安排成分配伍给药,采用黄嘌呤氧化酶显色法检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期,RT-PCR法测定caspase-3与caspase-8基因在细胞中的表达。采用极差分析法分析正交试验结果。结果药物正交配伍组合可显著改善缺氧rBMVECs的形态,有效增强SOD活性,有效抑制缺氧诱导的rBMVECs发生Gl/S期阻滞,明显减少了细胞的凋亡,减弱细胞中caspase-3和caspase-8基因表达。正交试验结果分析显示其较优组合为藁本内酯5μg/mL、川芎嗪10μg/mL、阿魏酸20μg/mL、毛蕊异黄酮10μg/mL、黄芪甲苷10μg/mL。结论黄芪、川芎有效成分组合配伍对内皮细胞缺氧损伤有明显的保护作用。 杨珍 周惠芬 周鹏 杨洁红 万海同 管敏国 张宇燕关键词:川芎 脑微血管内皮细胞 缺氧 超氧化物歧化酶 细胞凋亡 针刺对脑缺血大鼠血管生成和细胞外信号调节激酶1/2信号通路的影响 被引量:13 2017年 目的:观察针刺对脑缺血大鼠血管生成和细胞外信号调节激酶1/2信号通路的影响。方法:将30只健康SD大鼠分为正常对照组、模型对照组、针刺组各10只。模型对照组以及针刺组给予Bannister's颈动脉引流法以建立大鼠脑缺血的动物模型。针刺组造模7 d后,在大鼠保持清醒的状况下,固定于自制鼠架上,予以百会穴平刺2 mm,捻转1 min增强针感,留针20 min;水沟穴点刺1 mm,捻转1 min增强针感,不留针;每日1次,每周6次,2周为1个疗程,共治疗1个疗程。其余两组不予以任何干预措施,至实验结束。比较各组大鼠情况、神经功能缺损量表评分、海马脑细胞凋亡百分率、椎体细胞数、血管内生长因子表达水平、血管密度、磷酸化氨基末端蛋白激酶(p-Jun N-ternuial kinase,p-JNK)以及磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylated extacellular signal-regulated kinase,p-ERK1/2)蛋白表达比较。结果:治疗后,与模型对照组比较,针刺组治疗后7 d、治疗后14 d的神经功能缺损量表分数较低;与治疗后7 d比较,治疗后14 d针刺组神经功能缺损量表评分较低(P<0.05)。治疗后,与正常对照组比较,模型对照组和针刺组海马神经细胞凋亡率较高,锥体细胞存活数较低(P<0.05);与模型对照组比较,针刺组海马神经细胞凋亡率较低,锥体细胞存活数较高(P<0.05)。治疗后,与正常对照组比较,模型对照组以及针刺组血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白表达以及血管密度较低(P<0.05);与模型对照组比较,针刺组VEGF蛋白表达以及血管密度较高(P<0.05)。治疗后,与正常对照组比较,模型对照组以及针刺组p-JNK、p-ERK1/2蛋白表达较高(P<0.05);与模型对照组比较,针刺组p-JNK蛋白表达较低,p-ERK1/2蛋白表达较高(P<0.05)。结论:针刺能够上调脑缺血大鼠VEGF表达水平,下调海马神经细胞凋亡率,提高促进组织脑血管形成,调节p-JNK以及p-ERK1/2表达水平,� 姜杨阳 穆晓红关键词:针刺 脑缺血 血管生成 羟基红花黄色素A在Caco-2细胞单层模型的转运研究 被引量:7 2014年 目的研究丹红注射液中主要成分羟基红花黄色素A(HSYA)在Caco-2细胞单层模型的转运特征。方法MTT法确定HSYA对Caco-2细胞单层模型作用的安全浓度范围;采用Caco-2细胞单层模型考察转运时间、药物质量浓度、温度、pH值以及P-糖蛋白(P-gP)抑制剂维拉帕米和能量代谢抑制剂叠氮化钠对HSYA转运的影响;RT-PCR法检测HSYA及维拉帕米对多药耐药基因(MDR1)表达的影响。结果从顶侧(AP)到底侧(BL)(AP→BL),HSYA的表观渗透系数(Papp)在2×10-6-5×10-6cm/s,表明其吸收性中等;HSYA的转运与其质量浓度和时间呈正相关,37℃下HSYA的Papp与4、25℃下的Papp有显著差异(P〈0.01),pH值为9.0时的Papp与pH值为5.0、7.4时的Papp值也有明显差异(P〈0.01)。维拉帕米能明显下调MDR1基因的表达,但HSYA的转运不受维拉帕米的影响;叠氮化钠影响细胞能量代谢,但HSYA的转运不受能量代谢异常的影响,且Papp(BL→AP)/app(AP→BL)在1-1.5,HSYA的吸收过程基本符合被动扩散。结论HSYA在Caco-2细胞模型的转运方式为被动扩散,且不受P-gP和能量代谢的影响,低温和碱性环境下不利于HSYA的吸收。 周鹏 周惠芬 何昱 张宇燕 杨洁红 戴柳玲 汪兴宇 王泽锋 万海同关键词:丹红注射液 羟基红花黄色素A CACO-2细胞单层模型 大孔树脂吸附法优化分离纯化黄芪总皂苷的实验研究 被引量:8 2014年 目的:优化采用大孔树脂分离纯化黄芪中总皂苷工艺的实验研究。方法:以黄芪甲苷为对照品,采用紫外-可见分光光度法建立黄芪甲苷含量测定方法;采用单因素分析法,通过树脂型号、吸附时间、最佳pH、上样流速、洗脱体积等条件考察,优化黄芪皂苷的纯化工艺。结果:大孔树脂吸附法分离纯化黄芪总皂苷的较佳工艺是,DA-201型树脂,静态吸附8 h,上样样品pH5,上样流速0.5 mL/min,洗脱溶剂4BV的50%乙醇。结论:优化的黄芪总皂苷分离纯化工艺相对稳定,成本较低,可适用于工业化生产,为含有黄芪的相关制剂工艺研究提供参考。 金乾兴 李艳芳 杨洁红 张宇燕 周惠芬关键词:皂苷 大孔吸附树脂 分离纯化 参芎注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用 被引量:16 2014年 目的:研究参芎注射液对老龄大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法:108只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫通组、参芎注射液高、中、低剂量组(36.4,18.2,9.1 mL·kg-1·d-1)。采用线栓法建立大鼠脑缺血再灌注模型,观察参芎注射液对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能评分、脑梗死体积的影响,检测脑组织中一氧化氮合酶(NOS)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)的含量,ELISA法检测对脑组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平的影响。结果:参芎注射液可显著降低脑缺血再灌注大鼠的神经功能评分,减轻脑组织损伤程度,减少脑梗死范围,提高SOD活力,降低MDA,NO,NOS,LDH水平,抑制IL-1β和TNF-α的表达。结论:参芎注射液对大鼠缺血再灌注损伤具有明显的保护作用,其机制可能与改善神经功能、减少自由基损伤和抑制炎症因子表达有关。 汪兴宇 张宇燕 万海同 赵涛 付巍 周惠芬 周鹏 王泽锋 杨洁红关键词:参芎注射液 脑缺血再灌注损伤 自由基 炎症因子 神经功能 微波辅助提取黄芪多糖的提取工艺优化研究 被引量:6 2013年 目的探讨优化黄芪多糖的微波辅助提取工艺。方法以黄芪多糖的得率为考察指标,以水为提取剂,采用正交设计实验的方法,研究了黄芪多糖的微波提取工艺。结果得到标准曲线方程y=0.1091x+0.294(r^2=0.9995),在0.953—5.967mg/mL范围内线性关系良好。确定黄芪多糖的提取优化条件为:加30倍的水微波10min提取3次。结论经直观分析和方差分析确定黄芪多糖较佳提取工艺,并经验证试验,表明此工艺稳定、合理、可行,对其制剂及其实验研究的进一步开展提供了一定的实验依据。 杨惠鑫 李敏杨 杨洁红 张宇燕关键词:黄芪多糖 微波提取 正交试验 丹红有效成分配伍对缺氧损伤脑微血管内皮细胞的保护作用 被引量:5 2014年 为研究丹红有效成分配伍对缺氧致原代培养的乳鼠脑微血管内皮细胞(r BMECs)损伤的保护作用。原代培养乳鼠脑微血管内皮细胞并对细胞进行缺氧4 h损伤模型的同时,丹红有效成分(原儿茶醛、丹酚酸B、羟基红花黄色素A、丹参素)配伍作用于r BMECs,MTT确定细胞非毒性剂量,采用比色法测定LDH,SOD活性和MDA水平,RT-PCR法检测ICAM-1,MMP-9,P53 mRNA表达,流式细胞术检测r BMECs细胞周期及早期凋亡的变化。丹红有效成分配伍1,2,3,7,8,9组方显著抑制缺氧细胞上清液中LDH的增加;1,2,4,6,7组方显著增强缺氧细胞内SOD活性;1,2,3,8,9组方显著降低MDA水平;1,2,6,7,9组方显著抑制缺氧诱导的r BMECs早期凋亡,缺氧后细胞P53 mRNA表达明显上调的后果是能引起G1期阻滞和促进细胞凋亡,证实P53基因的调节功能体现在G1期校正点的监测;1,2,5,6,7,8,9组方显著下调P53 mRNA表达;1,4,7,8,9组方显著下调ICAM-1 mRNA表达;1,3,6,9组方显著下调MMP-9 mRNA表达。丹红有效成分配伍对缺氧所致原代培养的r BMECs损伤具有明显的保护作用,其机制与增强细胞抗氧化能力,抑制炎症反应和细胞凋亡有关。为研究方剂配伍规律提供思路,指导临床用药。 周惠芬 何昱 张宇燕 杨洁红 赵涛 付巍 周鹏 万海同关键词:抗炎症 丹红注射液对缺氧损伤脑微血管内皮细胞的保护机制 被引量:20 2014年 为研究丹红注射液对缺氧损伤脑微血管内皮细胞(r BMECs)的保护机制。该实验采用原代培养乳鼠脑微血管内皮细胞并进行Ⅷ因子鉴定,建立缺氧4 h损伤模型的同时,丹红注射液(25,50,100 m L·L-1)作用于r BMECs,生化法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平,RT-PCR法检测细胞MMP-9,ICAM-1,P53 mRNA表达水平,透射电镜观察细胞超显微结构变化。结果表明缺氧使原代培养的r BMECs受到明显损伤,与模型组比较,丹红注射液(50,100 m L·L-1)可显著对抗缺氧造成的损伤,增强SOD活性,降低MDA水平,明显下调MMP-9,ICAM-1,P53 mRNA的表达,丹红注射液100 m L·L-1能够保护细胞正常的形态、显微结构、维持细胞间紧密连接,抑制缺氧诱导的细胞凋亡。从结果中可以得出丹红注射液对缺氧损伤r BMECs具有明显的保护作用,其机制与增强细胞抗氧化能力,抑制炎症反应及细胞凋亡有关。 周鹏 何昱 杨洁红 张宇燕 周惠芬 赵涛 付巍 万海同关键词:丹红注射液 缺氧 炎症 丹参素在局灶性脑缺血大鼠体内药动学-药效学相关性研究 被引量:12 2014年 为探讨丹参素在脑缺血损伤模型大鼠体内的药动学过程及其与抗脑缺血作用的相关性,该文建立了局灶性脑缺血再灌注(MCAO)模型,静脉注射丹参素(40 mg·kg-1)后,采用HPLC-DAD测定不同时间丹参素血药浓度,绘制药-时曲线;同时测定各时间点血浆中超氧化物歧化酶(SOD),乳酸脱氢酶(LDH)活性,绘制时-效曲线;用DAS 3.2.6软件处理数据,并进行相关性分析,比较相同剂量的丹参素给药后在模型及正常大鼠体内的药动学差异以及模型大鼠给药后的药效学指标变化,评价丹参素在治疗脑缺血疾病中的作用。结果,脑缺血再灌注及正常大鼠体内丹参素药动学过程均符合二室模型,主要药动学参数t1/2α分别为(0.267±0.026),(0.148±0.020)h,t1/2β分别为(1.226±0.032),(1.182±0.082)h,AUC0-∞分别为(42.168±4.007),(26.881±1.625)mg·L-1·h,缺血再灌注后大鼠血浆中SOD活性降低,LDH活性升高,丹参素在一定时间内能抑制SOD活性下降,LDH活性上升。表明丹参素在脑缺血再灌注大鼠在体内较正常大鼠体内滞留时间更长,消除减慢,反映了丹参素临床治疗脑缺血疾病的合理性;丹参素抗脑缺血损伤作用可能与其在体内水平有关,其血药浓度与血浆中SOD活性呈正相关,LDH活性呈负相关。 艾进超 周惠芬 舒明春 戴柳玲 郑璐 张宇燕 杨洁红 伍宪彬 万海同关键词:丹参素 药动学 药效学 抗脑缺血损伤 养阴益气活血方治疗气阴两虚证、瘀血阻络证缺血性中风疗效观察 被引量:50 2015年 目的研究养阴益气活血方(养阴通脑颗粒基本方)治疗缺血性中风气阴两虚证、瘀血阻络证临床疗效。方法将312例患者采用分层随机分配法分为对照组和治疗组,其中养阴益气活血方随证加减治疗组(治疗组)226例,血栓心脉宁对照组(对照组)86例。疗程均为4周。观察两组气阴两虚证、瘀血阻络证及其兼证急性期、恢复期构成比;治疗前后临床疗效、临床症状积分、全血黏度比、血浆黏度比、红细胞压积、ESR、TC、TG、HDL-C、LDL-C变化。结果缺血性中风急性期、恢复期的气阴两虚证、瘀血阻络证及其兼证构成比差异有统计学意义(P<0.01),气阴两虚证、瘀血阻络证是两组的基本证型。治疗组愈显率(71.24%,161/226)明显高于对照组(43.02%,37/86),治疗组总有效率(91.15%,206/226)高于对照组(76.74%,66/86),差异均有统计学意义(P<0.01)。治疗组症状积分、全血黏度比、血浆黏度比、红细胞压积、ESR、TC、TG、HDL-C和LDL-C较治疗前显著改善,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论养阴益气活血方随证加减可显著改善缺血性中风症状,并对全血黏度比、血浆黏度比、红细胞压积、ESR、血脂异常代谢等指标有显著改善作用。缺血性中风患者存在气阴两虚致血瘀的病理变化,气阴两虚证、瘀血阻络证是缺血性中风的基本证型。 万海同 别晓东 姚政 徐彬 刘华 杨洁红 张宇燕 何昱 周惠芬关键词:缺血性中风 气阴两虚证 瘀血阻络证 中医治则治法