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副猪嗜血杆菌双向电泳方法的建立: 前言近年来,临床上从患病猪的病理脏器中分离出副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)的比例越来越高,给我国养猪业带来严重的危害.为建立副猪嗜血杆菌蛋白质组学双向电泳方法,本试验通过超声-裂解(7...; 王晨燕方勤美王隆柏车勇良刘玉涛周伦江

6株副猪嗜血杆菌的分离鉴定及16S rRNA序列分析被引量：2: 2014年; 对福建省一些猪场临诊疑似副猪嗜血杆菌感染的病例进行细菌分离鉴定,PCR扩增分离菌株的16S r RNA并进行测序分析,对分离菌进行细菌形态和PCR鉴定及序列分析。结果显示,获得6株副猪嗜血杆菌分离株,该6株分离株之间的同源性在99%以上,而与国内外参考菌株序列之间的同源性在84.5%-99.2%。发育进化树分析结果表明,分离菌株与血清4型和5型的关系较近,与其他血清型关系较远。研究建立了副猪嗜血杆菌的分离培养方法,并对分离株进行了PCR鉴定和16S r RAN序列分析,为副猪嗜血杆菌病的诊断与防治奠定基础。; 车勇良陈如敬江斌王隆柏魏宏吴学敏庄向生周伦江; 关键词：副猪嗜血杆菌 RRNA

副猪嗜血杆菌可视化LAMP检测方法的建立与应用被引量：11: 2013年; 【目的】建立一种可快速检测副猪嗜血杆菌的环介导等温扩增(LAMP)方法。【方法】根据GenBank中副猪嗜血杆菌肽聚糖相关脂蛋白(PalA)基因序列,在其保守区域设计外引物、内引物和环引物用于LAMP检测。优化副猪嗜血杆菌LAMP检测的反应体系,在反应产物中加入SYBR GreenⅠ,对检测结果进行肉眼判定,建立副猪嗜血杆菌可视化LAMP检测方法,评价该检测方法的特异性、敏感性。用建立的副猪嗜血杆菌可视化LAMP检测方法对临床分离的8株不同血清型副猪嗜血杆菌进行检测。从疑似患副猪嗜血杆菌病的猪体内采集10种体液,用所建立的可视化LAMP检测方法进行检测。【结果】建立了副猪嗜血杆菌可视化LAMP检测方法,该法在55℃水浴1h即可对副猪嗜血杆菌核酸进行高效扩增,反应结束后加入SYBR GreenⅠ即可通过肉眼观察对结果进行判断。该方法具有很强的特异性,其对DNA核酸的最低检测限为40fg,是常规PCR检测最低限的100倍,显示出较高的敏感性;用建立的LAMP方法对8株不同血清型副猪嗜血杆菌进行检测,结果均为阳性。用建立的LAMP方法对10种体液进行检测,结果鼻液、气管液、胸腔渗出物、心脏血、脑膜液、腹腔液和关节囊液呈阳性,唾液、心包液和尿液呈阴性。【结论】建立了一种可对副猪嗜血杆菌进行快速检测并可凭肉眼判定结果的可视化LAMP方法,该法操作简便、反应快速、敏感性强、特异性高,适合在兽医基层进行推广应用。; 车勇良陈如敬王隆柏江斌吴学敏刘玉涛严山庄向生周伦江; 关键词：副猪嗜血杆菌环介导等温扩增技术

副猪嗜血杆菌oppA基因的克隆、表达及间接ELISA检测方法的建立被引量：4: 2015年; 采用PCR方法扩增副猪嗜血杆菌(Hps)的寡肽结合蛋白(Opp A)基因,序列测定结果表明,扩增片段全长1654 bp.将扩增片段插入表达载体p GEX-6P-1中,转化BL21进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果表明,重组融合蛋白大小约为87 ku,以纯化的重组蛋白Opp A作为抗原,建立Hps抗体的间接ELISA检测方法.通过试验确定最佳的反应条件为:抗原包被浓度为1.0μg·孔-1,于37℃包被1 h,待检血清的稀释度为1∶50,阳性判断标准(D450 nm)大于0.643.特异性和重复性试验结果表明,建立的间接ELISA方法具有良好的特异性和稳定性,可用于Hps抗体的检测.; 车勇良陈如敬江斌王隆柏魏宏吴学敏庄向生周伦江; 关键词：副猪嗜血杆菌克隆间接ELISA

副猪嗜血杆菌双向电泳体系的建立: <正>近几年来,临床上从患病猪的病理脏器中分离出副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)的比1例越来越高,给我国养猪业带来严重的危害。为建立副猪嗜血杆菌蛋白质组学双向电泳方法,本试验通过超声-裂解...; 王晨燕周伦江王隆柏车勇良吴学敏陈如敬; 文献传递

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福建省农业科学院科技创新团队建设基金(CXTD-1-1306)

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