国家自然科学基金(30600509)
- 作品数：11 被引量：34H指数：4
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- 氟对小鼠成骨细胞增殖与分化及骨保护蛋白和核因子κβ受体活化因子配体mRNA表达的影响被引量：4
- 2011年
- 目的 观察氟对体外培养的小鼠成骨细胞增殖、分化、骨保护蛋白（OPG）mRNA及核因子κβ受体活化因子配体（RANKL）mRNA表达的影响.方法 取出生1～2 d昆明小鼠颅盖骨,分离成骨细胞后进行传代培养.按培养液中加入不同浓度氟化钠（NaF）将成骨细胞分为0（对照）、10-8、10-7、10-6、10-5、10-4、10-3 mol/L组,分别在培养72 h或120 h后检测氟对成骨细胞增殖、分化（碱性磷酸酶,ALP）的影响;提取成骨细胞总mRNA,采用RT-PCR方法分析成骨细胞OPG mRNA、RANKL mRNA表达,并进行半定量分析.组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验.结果 培养72 h后,成骨细胞增殖组间比较差异有统计学意义（F=13.806,P〈0.05）;与对照组（0.434±0.010）比较,10-7～10-4mol/L组成骨细胞增殖明显增加（0.448±0.010、0.453±0.013、0.454±0.016、0.449±0.018,P均〈0.05）,10-3 mol/L组成骨细胞增殖降低（0.401±0.009,P〈0.05）.成骨细胞ALP活性组问比较差异有统计学意义（F=9.021,P〈0.05）;其中10-7～10-5 mol/L组[（2.447±0.756）×106、（2.603±0.183）×106、（2.687±0.886）×106 U/L]ALP活性明显高于对照组[（1.677±0.682）×106U/L,P〈0.05或〈0.01];10-4mol/L组[（1.479±0.366）×106 U/L]ALP活性明显低于对照组（P〈0.05）.OPG mRNA表达组间比较差异有统计学意义（F=11.299,P〈0.05）;与对照组（11000±0.000）比较,10-7～10-4 mol/L组表达增强（1.058±0.027、1.053 ±0.026、1.088±0.055、1.069±0.008,P〈0.05或〈0.01）,10-3mol/L组表达降低（0.941±0.029,P〈0.05）.成骨细胞RANKL mRNA表达组间比较差异无统计学意义（F=1.311,P〉0.05）.RANKL mRNA/OPG mRNA比值,在104～10-5mol/L组逐渐降低,10-4、10-3mol/L组升高,但组间比较差异无统计学意义（F=1.376,P〉0.05）.结论 氟对小鼠成骨细胞增殖、分化呈双向调节作用,表现为低剂量刺激而高剂量抑制.低剂量染氟可能通过增加成骨细胞OPG的表达来抑制
- 郭晓英蔡偌欣孙贵范
- 关键词：氟成骨细胞骨保护素
- 不同浓度氟对大鼠切牙成釉细胞Smad2/3表达的影响
- 2011年
- 目的:研究不同浓度氟对大鼠切牙生长过程中成釉细胞内信号转导分子Smad2/3表达的影响,探讨氟斑牙的发病机制。方法:40只Wistar大鼠随机分为3组,建立氟斑牙动物模型。用HE染色和免疫组化方法观察氟对大鼠切牙成釉细胞形态及Smad2/3表达的影响,采用MetaMorph显微图像分析系统和SPSS12.0软件包分别进行图像和数据分析。结果:给氟组大鼠切牙出现典型氟斑牙症状。给氟组Smad2/3的表达显著低于对照组(P<0.01),但低氟组和高氟组间未见显著差异(P>0.05)。结论:过量氟可能通过抑制Smad2/3的表达来影响釉质的分化和发育,导致氟牙症的发生。
- 张雪莉席淑华郭晓英程广岩张颖
- 关键词：氟化物成釉细胞SMAD2/3
- 氟和铝对小鼠胚胎成骨细胞骨保护蛋白和核因子κB受体活化因子配体mRNA表达的影响被引量：3
- 2011年
- 目的观察氟和铝对小鼠胚胎成骨细胞株(MC3T3-E1)骨保护蛋白(OPG)和NF-κB受体活化因子配体(RANKL)mRNA表达的影响。方法 在细胞培养液中加入50μmol/L氟化钠或/和5μmol/L氯化铝;72 h后提取细胞总mRNA,用RT-PCR方法分析MC3T3-E1细胞OPG和RANKL的mRNA表达,进行半定量分析。结果与对照组比较,氟铝联合染毒可显著提高MC3T3-E1细胞OPG mRNA的表达(P<0.05),两者具有协同作用(P<0.05),但氟铝联合染毒对MC3T3-E1细胞RANKL mRNA的表达水平无显著改变;因此,与对照组相比,氟铝联合染毒组RANKL/OPG比值显著降低(P<0.05)。结论氟铝联合可能通过增加成骨细胞OPG基因表达水平来抑制破骨细胞的分化和成熟,从而抑制骨吸收,使骨形成大于骨吸收。
- 郭晓英蔡偌欣孙贵范
- 关键词：氟铝
- 亚慢性氟染毒对大鼠骨组织病理改变和β-连环蛋白表达的影响被引量：5
- 2011年
- 目的观察亚慢性氟染毒对大鼠骨组织中β-连环蛋白表达的影响,探讨β-连环蛋白在氟致骨损伤中的可能作用。方法 40只Wistar大鼠按体重随机分成4组,染氟组大鼠饮用含氟50、100和150mg/L的自来水,对照组大鼠饮用自来水,3个月后测定大鼠血清及骨组织氟含量,Real-time RT-PCR法和免疫组化法检测骨组织中β-连环蛋白mRNA和蛋白质表达情况。结果 HE染色显示染氟组大鼠病理学改变呈现骨皮质增厚、骨小梁增多等骨硬化表现,骺板肥大软骨细胞大量堆积且排列紊乱。染氟组大鼠骨组织中β-连环蛋白mRNA表达显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01),而且随染毒剂量升高,β-连环蛋白mRNA表达逐渐升高。免疫组化显示染氟组大鼠骨组织中β-连环蛋白主要由成骨细胞和破骨细胞表达,骺板软骨肥大细胞也有阳性表达。结论β-连环蛋白在亚慢性氟染毒大鼠骨质硬化的发生中发挥重要作用。
- 郭晓英吴思恩何杨张志瑜孙贵范
- 关键词：Β-连环蛋白骨组织
- 亚慢性氟中毒对大鼠骨组织Runx2 mRNA表达的影响被引量：4
- 2011年
- 目的观察亚慢性氟中毒对大鼠骨组织中转录因子Runx2 mRNA表达的影响,探讨Runx2在氟骨症发生中的可能作用。方法 40只Wistar大鼠按体重随机分成4组,染氟组大鼠饮用含氟50、100、150 mg/L的自来水,对照组大鼠饮用自来水;3个月后测定大鼠血清及骨组织氟含量,并采用SYBR Green Real-time RT-PCR法检测骨组织中Runx2 mRNA表达情况,同时观察骨组织病理学改变。结果 HE染色显示染氟组大鼠呈现骨皮质增厚、骨小梁增多等骨硬化表现;染氟组大鼠骨组织中Runx2 mRNA表达显著高于对照组,且随染毒剂量升高,表达亦逐渐升高。结论过量的氟可能通过增加骨组织Runx2基因表达水平来促进间充质干细胞向成骨细胞系分化,使骨形成增加。
- 郭晓英吴思思何杨孙贵范
- 关键词：氟中毒
- 氟铝联合对MC3T3-E1细胞Runx2、Osterix mRNA表达的影响被引量：1
- 2011年
- 目的观察氟铝单独及联合对小鼠成骨样细胞MC3T3-E1细胞增殖、分化及Runx2、Osterix mRNA表达的影响。方法在细胞培养液中加入50μmol/L氟化钠或/和5μmol/L氯化铝,观察MC3T3-E1细胞增殖和分化能力,用RT-PCR法测定MC3T3-E1细胞Runx2和Osterix mRNA表达的情况。结果与对照组相比,氟铝联合染毒可显著提高MC3T3-E1细胞增殖和分化能力(P<0.05),MC3T3-E1细胞Runx2和OsterixmRNA的表达水平也显著提高(P<0.05),且氟铝具有协同作用(P<0.05)。结论氟铝联合通过刺激成骨细胞增殖、分化,提高成骨细胞Runx2和Osterix基因表达水平,从而促进骨形成。
- 郭晓英蔡偌欣吴思思何杨孙贵范
- 关键词：氟铝MC3T3-E1细胞RUNX2OSTERIX
- 氟对大鼠切牙成釉细胞MMP-20及TIMP-2表达的影响及褪黑素对氟的拮抗作用
- 2011年
- 目的:通过研究不同浓度氟对大鼠切牙成釉细胞基质金属蛋白酶(MMP-20)和基质金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP-2)表达的影响,探讨氟斑牙的发病机制,并通过比较给氟组与加褪黑素组MMP-20、TIMP-2表达的差异,探讨褪黑素是否对氟斑牙的发生有拮抗作用。方法:40只Wistar大鼠随机分为6组,分别为对照组(A)、低氟组(B)、高氟组(C)、低氟组加褪黑素组(D)、高氟组加褪黑素组(E)和对照组加生理盐水组(F),建立氟斑牙动物模型。用HE染色和免疫组化染色观察不同浓度的氟及褪黑素对大鼠切牙成釉细胞的形态及MMP-20、TIMP-2表达的影响,采用MetaMorph显微图像分析系统和SPSS12.0软件包,分别进行图像和数据统计学分析。结果:给氟组大鼠切牙牙面出现白垩色改变,可见釉质表面横纹;成釉细胞形态发生改变,细胞排列紊乱,甚至成灶性堆积,可见空泡性变;MMP-20、TIMP-2在分泌期成釉细胞、成牙本质细胞均有表达,MMP-20在低氟组、高氟组的表达均显著低于对照组(P﹤0.01),但低氟组和高氟组之间无显著差别;TIMP-2在对照组和高氟组的表达差异有显著性(P﹤0.01),对照组和低氟组、低氟组和高氟组表达均无显著差别(P﹥0.05)。褪黑素组与未加褪黑素组两者的表达无显著差别。结论:过量氟可抑制MMP-20的表达,使MMP-20/TIMP-2的表达失衡,成釉基质蛋白清除延迟,导致釉质矿化不良,形成氟斑牙,褪黑素对氟斑牙的形成无拮抗作用。
- 张雪莉席淑华郭晓英程广岩张颖
- 关键词：氟成釉细胞组织金属蛋白酶抑制剂褪黑素
- 氟中毒大鼠生长板Ihh、PTHrP mRNA及蛋白表达的变化被引量：5
- 2013年
- 目的观察氟中毒大鼠生长板Ihh、PTHrP mRNA及蛋白表达的影响,探讨Ihh信号通路在氟致软骨损伤中的可能作用。方法 32只Wistar大鼠按体重随机分成4组,对照组饮用自来水,染氟组分别饮用含氟50、100和150 mg/L的自来水,3个月后测定大鼠血清及骨组织氟含量,Real-time PT-PCR法检测Ihh、PTHrP mRNA表达情况,免疫组化法检测软骨组织中PTHrP蛋白表达情况。结果染氟组大鼠生长板中Ihh、PTHrP mRNA表达显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组大鼠生长板软骨细胞不表达或极弱表达PThrP,而氟中毒大鼠生长板静止层和肥大层软骨细胞细胞质中PTHrP蛋白为阳性表达,且随染氟剂量增加而升高。结论过量氟可能通过影响Ihh、PTHrP mRNA及蛋白表达水平,造成生长板软骨增殖、分化失衡。
- 潘磊磊何杨吴思思刘爽郭晓英孙贵范
- 关键词：氟中毒IHHPTHRP生长板
- 氟铝单独及联合染毒对MC3T3-E1细胞增殖能力及细胞周期的影响被引量：5
- 2009年
- 目的观察不同浓度的氟、铝对体外培养的小鼠颅顶前成骨细胞亚克隆14(MC3T3-Esubclone 14)增殖及细胞周期的影响,以进一步阐明地方性氟中毒机制提供实验依据。方法以10-9～10-3mol/LNaF染毒MC3T3-E1细胞,同时以50μmol/LNaF及5μmol/LAlCl3单独或者联合染毒MC3T3-E1细胞,培养72h。应用CCK-8(cell counting kit-8)观察MC3T3-E1细胞增殖能力的影响;采用流式细胞术检测MC3T3-E1细胞周期变化情况。结果氟无显著促进MC3T3-E1细胞增殖的作用,较高浓度的氟(1mmol/L)抑制MC3T3-E1细胞增殖(P<0.01)。氟铝联合染毒显著刺激MC3T3-E1细胞增殖(P<0.01);G2/M期细胞明显增多,增殖指数(PI)升高(P<0.05),DNA相对含量增高(P<0.05)。结论氟对MC3T3-E1细胞无显著促增殖作用,氟铝联合能显著提高MC3T3-E1的增殖能力,使G2/M期细胞明显增多,促进成骨细胞的增殖分裂,细胞处于活跃生长状态。
- 蔡偌欣郭晓英赵鑫孙贵范
- 关键词：MC3T3-E1细胞铝细胞增殖细胞周期
- 新生小鼠成骨细胞原代培养方法的实验研究被引量：4
- 2009年
- 目的验证及比较成骨细胞原代培养常用方法,探讨两种原代培养方法的可行性和应用价值。方法取出生后24h昆明小鼠乳鼠顶骨,以含血清胶原酶消化法和分段胶原酶消化法分离成骨细胞,进行细胞形态观察,以噻唑蓝(MTT)比色实验法绘制生长曲线,以台盼兰排斥法计数活细胞率。结果与含血清胶原酶消化法相比,分段胶原酶消化法提取的成骨细胞产量多;细胞存活率高(P<0.01);对细胞损伤小,细胞纯度高,消化时间易于控制。结论分段胶原酶消化法是一种方便、高效、细胞生物学特性稳定的原代成骨细胞分离培养方法。
- 蔡偌欣郭晓英孙贵范
- 关键词：成骨细胞胶原酶原代培养
