国家自然科学基金(30571512)
- 作品数：3 被引量：27H指数：2
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- 相关机构：北京林业大学北京农学院南昌大学更多>>
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- 海藻糖-6-磷酸合成酶转基因烟草提高耐盐性的研究被引量：22
- 2008年
- 海藻糖-6-磷酸合成酶(trehalose-6-pho sphate synthase,TPS)是海藻糖合成途径中的一个关键酶,近些年来受到广泛关注,以往的研究多数集中于细菌和真菌等,而对植物体内TPS基因的研究较少。为此,我们首先通过RT-PCR(reverse tran-scription PCR)克隆得到了拟南芥的TPS基因,进而将其构建到原核高效表达载体pET30a(+)上并在大肠杆菌BL21中进行高效诱导表达。在确认该基因能够在体外正常表达之后,将其构建到植物表达载体上并转入烟草体内,通过实时荧光定量PCR检测,证明在转基因个体中目的基因已经在受体基因组上完成整合,并且在其中的2个个体中实现了正常转录。在对目标个体进行海藻糖含量的测定以及抗逆性实验后发现,S5个体具有良好的表现,其体内海藻糖的含量明显高于其它个体,并具有较强的耐受盐胁迫的能力。
- 郭蓓胡磊何欣陈雪梅蒋湘宁
- 关键词：实时荧光定量PCR转基因植物海藻糖-6-磷酸合成酶
- 拟南芥海藻糖酶基因克隆及其在大肠杆菌中高效表达与功能研究被引量：1
- 2008年
- 从拟南芥幼苗中提取RNA,通过RT-PCR克隆得到海藻糖酶基因后,将其构建到原核高效表达载体pET30a(+)上并在大肠杆菌BL21菌株中进行高效诱导表达,继而对纯化得到的海藻糖酶蛋白进行活性检测和酶学特性研究。实验结果表明,植物源的海藻糖酶基因在异体大肠杆菌中能够高效表达,纯化获得的海藻糖酶蛋白在试管条件下具有较高的海藻糖水解活性,其活性最适温度为45℃。通过GC-MS分离检测,可以明显地看到酶反应过程中底物海藻糖和产物葡萄糖的含量随反应时间变化的消长关系,这充分证明克隆基因在大肠杆菌中的表达产物具有海藻糖酶的功能。
- 郭蓓胡磊盖颖王喜智陈雪梅蒋湘宁
- 关键词：拟南芥海藻糖酶基因克隆
- 一种用高效液相色谱-电喷雾/串联质谱(HPLC-ESI/MSn)定量检测植物组织中微量1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)含量的方法被引量：4
- 2008年
- 介绍一种用高效液相色谱碳18柱(HPLC-C18)分离、电喷雾串联质谱(ESI-MSn)鉴定和定量检测植物组织中微量1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)含量的方法,其最低检测限达0.7pmol,标准曲线线性符合系数为0.9992。建立了从20～100mg微量植物样品中提取ACC和固相萃取(SPE)预纯化的方法,加样回收率为95.1%±4.2%。此种提取方法结合HPLC-ESI/MSn分析与定性定量检测苹果‘2001富士’中ACC含量为306.6ng·g-1(FW),表明此法适合于定性定量检测植物样品中的微量ACC。
- 马莹莹盖颖陈伟奇蒋湘宁
