海南省自然科学基金(80445)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：王才春谭光宏韩忠施蓉萍宿静梅更多>>
- 相关机构：海南医学院海南医学院附属医院更多>>
- 发文基金：海南省自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”海南省教育厅科研基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 人和小鼠白细胞介素-5重组蛋白疫苗的提取被引量：1
- 2006年
- 利用PCR技术从含有人和小鼠IL-5基因的质粒pORF9-hIL-5和pORF9-m IL-5质粒中扩增出人和小鼠IL-5基因序列,然后利用基因工程技术将人和小鼠IL-5基因序列分别插入原核表达质粒pQE30,获得人和小鼠IL-5重组表达质粒pQE-hIL-5和pQE-m IL-5.用酶切和DNA序列测定方法证实pQE-hIL-5和pQE-m IL-5正确后,转化感受态大肠杆菌JM109.用IPTG诱导表达重组蛋白,表达产物经N i-NTA亲合层析进行分离纯化,最后用SDS-PAGE和免疫印迹法进行鉴定.结果表明:琼脂糖凝胶电泳发现PCR扩增的人和小鼠IL-5基因序列相对分子质量大小和预期值一致,酶切pQE-hIL-5和pQE-m IL-5片段和预期值相符,DNA序列测定插入的人和小鼠IL-5 PCR产物基因序列和阅读框架正确无误.重组蛋白质在大肠杆菌中获得稳定表达,表达的重组蛋白相对分子质量与预期值相一致,纯化的蛋白浓度达93%以上,抗组氨酸抗体可特异性识别hIL-5和m IL-5重组蛋白.
- 王才春韩忠施蓉萍谭光宏
- 关键词：白细胞介素-5重组蛋白质原核表达载体
- 小鼠IL-5真核表达质粒的构建和体外表达
- 2007年
- 目的构建小鼠白细胞介素-5(IL-5)基因真核表达质粒,了解该质粒在真核细胞COS细胞中有效表达情况。方法以含有小鼠IL-5基因的克隆质粒pORF9-mIL-5为模板,通过PCR扩增小鼠IL-5全段基因,应用基因工程技术将扩增的基因片段插入pcDNA3·1(+)真核表达质粒,构建重组真核表达质粒pcDNA-mIL-5,经限制性内切酶酶切分析及测序鉴定正确后,用脂质体转染技术转染COS细胞,用WesternBlot鉴定该质粒是否能够在真核细胞中表达相应的目的蛋白质。结果成功扩增了小鼠IL-5全长基因,酶切和测序证明正确构建了重组真核表达质粒pcDNA-mIL-5,Westernblot方法证实该质粒能在COS真核细胞中有效表达小鼠IL-5目的蛋白。结论成功构建了小鼠IL-5基因的真核表达质粒载体,为进一步研究IL-5的新功能和免疫基因治疗奠定了基础。
- 谭光宏王才春黄风迎王华黄用豪林映莹宿静梅
- 关键词：白细胞介素-5真核表达质粒
