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动脉内皮细胞中TIE2启动CREG真核表达质粒pTIE2-CREG-EGFP-N1的表达: 2011年; 背景:血管内皮发生的分子机制是细胞及基因替代治疗的首要前提。目的:构建一种通过血管内皮细胞特异蛋白TIE2启动子来启动表达的E1A激活基因阻遏子(cellular repressor of E1A-stimulated genes,CREG)和增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein,EGFP)融合的真核表达质粒。方法:根据GenBank中公布的TIE2基因的启动子序列,人工合成TIE2启动子DNA序列,经AseⅠ和NheⅠ双酶切后,亚克隆入表达质粒pEGFP-N1中构建pTIE2-EGFP-N1。同时,用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切pcDNA3.1myc-His/hCREG质粒得到CREG基因,亚克隆入质粒pTIE2-EGFP-N1中构建pTIE2-CREG-EGFP-N1,酶切鉴定。应用脂质体法将该质粒转染至体外培养的小鼠动脉内皮细胞,荧光显微镜下观察EGFP的表达;Western blot检测CREG蛋白的表达。结果与结论:经酶切鉴定证实实验构建的pTIE2-CREG-EGFP-N1质粒正确;体外转染48h,荧光显微镜下可见EGFP的表达,Western blot检测到CREG蛋白的表达。说明实验成功构建了pTIE2-CREG-EGFP-N1重组质粒,其可携带目的基因在小鼠动脉内皮细胞中有效表达。; 李杰闫承慧张效林梁振阳冯雪瑶白净韩雅玲; 关键词：TIE2 E1A激活基因阻遏子

黄芪水提取物对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块部位基质金属蛋白酶-9表达及斑块形成的影响被引量：10: 2012年; 目的探讨黄芪水提取物对载脂蛋白E基因敲除（ApoE^-/-）小鼠主动脉粥样硬化斑块部位基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达及斑块形成的影响。方法将48只8周龄雄性ApoE^-/-小鼠给予高脂饮食喂养，小鼠20周龄时根据随机表按照完全随机法分为4组各12只，即对照组、阿托伐他汀组、黄芪水提取物低剂量组及黄芪水提取物高剂量组。对照组给予生理盐水0．2ml／d，阿托伐他汀组给予阿托伐他汀10mg·b^-1·d^-1，黄芪水提取物低剂量给予黄芪水提取物1．25g·kg^-1·d^-1、黄芪水提取物高剂量给予黄芪水提取物5g·kg^-1·d^-1灌胃。予给药12周末处死各组小鼠。应用ELISA法测定血清氧化低密度脂蛋白（oxLDL）含量；HE染色、油红O染色观察小鼠主动脉粥样斑块内脂质的形成；用免疫荧光、免疫组化染色法检测观察粥样斑块部位巨噬细胞浸润水平及MMP-9表达。结果黄芪水提取物明显降低ApoE^-/-小鼠，其中黄芪水提取物高剂量组血清oxLDL含量明显低于对照组[（5．2±6．1）μg／ml比（15．8±5．4）μg／ml，P〈0．01]；与对照组比较，黄芪水提取物高剂量组ApoE^-/-小鼠动脉粥样斑块面积明显减小（17．24％±4．22％比49．87％±9．37％，P〈0．01），动脉管壁斑块弥漫程度较轻（P〈0．01）。黄芪水提取物高剂量组斑块中Mac3表达低于对照组（P〈0．01）；黄芪水提取物高剂量组与对照组主动脉斑块中MMP-9阳性表达面积平均吸光度值（MA）分别为0．0154±0．0014与0．0263±0．0065（P〈0．01）。结论黄芪水提取物能够抑制ApoE^-/-小鼠动脉MMP-9表达，延缓动脉粥样硬化斑块形成。其机制可能是通过降低ApoE^-/-小鼠血清oxLDL水平，抑制巨噬细胞的浸润、迁移及分泌MMP．9，从而抑制斑块形成。; 游洋段岩张效林康建闫承慧张秀莉丰加涛韩雅玲; 关键词：动脉粥样硬化基质金属蛋白酶9 载脂蛋白E类

人脐静脉内皮细胞单层通透性改变的效应因子被引量：2: 2011年; 背景:外源性刺激引起血管屏障功能损伤的分子机制是血管病理生理学尚未阐明的热点问题之一。目的:探讨炎症递质脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞单层通透性改变的效应分子,寻找有效治疗靶点。方法:应用脂多糖刺激并观察人脐静脉内皮细胞骨架蛋白F-actin和细胞单层通透性的改变。应用荧光免疫组化和Westernblot方法检测脂多糖刺激前后细胞中RhoA和SRF等信号分子的改变。并通过阻断实验证实RhoA-SRF信号通路的作用。结果与结论:100μg/L脂多糖刺激6h可引起人脐静脉内皮细胞中F-actin快速重构并形成大量应力纤维,细胞单层通透性明显增强。细胞中活化RhoA的表达明显增加,SRF发生明显的入核转位现象。应用特异性分子抑制剂Y27632抑制RhoA的活化后,细胞中F-actin重构现象消失,细胞单层通透性增加也受到明显抑制,SRF蛋白发生明显的出现转位。而应用LatrunculinB抑制脂多糖刺激的人脐静脉内皮细胞中F-actin应力纤维形成,对抗通透性增加,但RhoA活化未受到干扰,SRF入核现象则受到抑制。提示RhoA-SRF通路的活化介导了脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞中F-actin重构和内皮单层通透性增加,特异性抑制F-actin也可以阻断脂多糖引起的血管内皮单层通透性增加,同时反馈抑制SRF的入核活化现象。; 闫承慧于海波张效林康建韩雅玲; 关键词：人脐静脉内皮细胞通透性细胞骨架蛋白 RHOA ERK

干细胞移植治疗下肢缺血性疾病的研究进展: 2012年; 下肢缺血性疾病严重危害人类的健康,药物治疗疗效甚微,且有些病人无法行血运重建治疗。干细胞移植促进缺血下肢的血管新生,对缺血性疾病的治疗已日益受到关注。本文就干细胞移植治疗下肢缺血性疾病的应用作一综述。; 都晓沫王效增; 关键词：下肢动脉硬化干细胞移植

黄芪水提取物对TNF-α诱导的小鼠动脉内皮细胞VCAM-1表达的影响被引量：10: 2011年; 目的探讨黄芪水提取物对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的小鼠动脉内皮细胞VCAM-1表达的影响及机制。方法建立体外THP-1细胞与小鼠动脉内皮细胞黏附实验体系,在施加TNF-α刺激之前,采用不同浓度黄芪水提取物及不同预先黄芪水提取物孵育时间进行分组干预,并检测THP-1细胞对小鼠动脉内皮细胞的黏附率;ELISA检测细胞培养上清液中VCAM-1表达的变化。Western blot检测VCAM-1表达的变化及核转录因子NF-κB p65蛋白的核转运。结果 TNF-α刺激下,小鼠动脉内皮细胞VCAM-1和NF-κB的表达水平显著升高,而经黄芪水提取物预处理后,可具有抑制TNF-α诱导的VCAM-1表达及NF-κB p65蛋白核转移的作用,并表现一定剂量依赖性及时间依赖性,其中120 mg/L的黄芪水提取物预孵4～8 h可明显减少单核细胞对内皮细胞的黏附率,VCAM-1表达明显下调(P<0.05),NF-κB表达明显降低(P<0.05)。结论黄芪水提取物可拮抗TNF-α诱发的内皮细胞VCAM-1的表达,降低单核细胞的黏附能力,从而减轻血管内皮细胞损伤,其机制可能通过抑制转录因子NF-κB的活化有关。; 游洋段岩张效林康建闫承慧张秀莉丰加涛韩雅玲; 关键词：肿瘤坏死因子Α 核因子ΚB 血管细胞黏附分子1

主动脉夹层合并冠心病联合介入26例疗效评价被引量：7: 2012年; 目的评价冠心病合并Stanford B型主动脉夹层的患者行冠脉介入治疗(PCI)和覆膜支架联合介入治疗的疗效和安全性。方法收集2002年4月至2010年10月沈阳军区总医院完成的26例覆膜支架联合PCI治疗Stan-ford B型主动脉夹层合并冠心病患者,首先完成主动脉夹层覆膜支架置入术,3～7 d后完成PCI。观察近期及远期疗效。结果经桡动脉行主动脉造影:其中1例2个破口,夹层破口位于左锁骨下动脉外缘分别为15 mm和100 mm;其余25例均为单破口,夹层破口位于左锁骨下动脉外缘10 mm以下8例、10～30 mm 11例,>30～100 mm 6例。置入26枚支架,8例覆膜支架近心端部分或完全封闭左锁骨下动脉,术后左上肢桡动脉波动稍有减弱,但无上肢和脑缺血的症状。覆膜支架置入成功率100%。术后即刻造影:16例近端破口完全封堵,13例少量残余内漏。冠状动脉造影证实单支病变16例,2支病变8例,3支病变2例。靶病变平均狭窄(85.6±15.0)%,靶血管参考直径(2.8±0.3)mm。对32支靶血管共置入36枚支架。支架平均长度(25.5±13.6)mm。PCI即刻成功率100%,无PCI相关严重并发症发生。随访期12～114个月[平均(60±35)个月],26例均存活,无迟发内漏或需二次手术者及不良心脏事件发生。结论覆膜支架联合PCI治疗Stanford B型主动脉夹层合并冠心病安全可行,手术成功率高,术后患者恢复快,冠脉PCI的抗凝治疗未对大动脉覆膜支架术后构成不良影响,近、远期疗效可靠。; 王效增荆全民韩雅玲赵昕王凡非刘海伟刘小江张雪峰; 关键词：主动脉夹层冠心病覆膜支架经皮冠状动脉介入治疗疗效

E1A激活基因阻遏子对抗肿瘤坏死因子α引起的血管内皮细胞炎性损伤被引量：2: 2011年; 目的探讨E1A激活基因阻遏子表达对血管内皮细胞病理性炎症反应的生物学作用及机制。方法以E1A激活基因阻遏子过表达和基因沉默的人动脉血管内皮细胞为细胞模型,应用肿瘤坏死因子α刺激,ELISA检测白细胞介素6的变化,Rhodamin-Phalloidin检测肌动蛋白骨架F-actin分布,应用Transwell小室和Biotin标记的BSA检测单层内皮细胞通透性改变。进一步通过免疫荧光染色和Western blot检测细胞内核因子κB蛋白表达和转位情况。结果 ELISA检测发现,E1A激活基因阻遏子基因过表达显著抑制肿瘤坏死因子α刺激引起血管内皮细胞白细胞介素6的表达及分泌增加。同时,细胞F-actin应力纤维的形成和细胞单层通透性增加受到明显抑制。相反,E1A激活基因阻遏子基因沉默组白细胞介素6分泌较对照组明显增多。细胞F-actin应力纤维形成、细胞单层通透性显著增加。免疫荧光和Western blot分析证实,肿瘤坏死因子α刺激后,E1A激活基因阻遏子过表达组核因子κB出现短时的入核现象并迅速出核,对应蛋白出现相应的表达变化,而E1A激活基因阻遏子基因沉默组核因子κB表达持续增高且发生明显的入核转位现象。结论 E1A激活基因阻遏子可通过减少核因子κB的表达对抗肿瘤坏死因子α刺激引起的血管内皮细胞炎症反应和细胞通透性增加,对抗细胞病理性损伤发生。; 段岩李杰陶杰游洋栾波刘少伟张效林闫承慧韩雅玲; 关键词：E1A激活基因阻遏子血管内皮细胞炎性损伤核因子KB

E1A激活基因阻遏子蛋白过表达可抑制人血管平滑肌细胞的迁移被引量：1: 2011年; 背景:成熟动脉中膜血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)分化稳态的丧失是血管老化的一个重要原因。目的:观察E1A激活基因阻遏子(cellular repressor of E1A-stimulated genes,CREG)抑制人血管平滑肌细胞迁移的分子机制。方法:应用已建立的稳定转染CREG过表达细胞hVSMCs-CREG和CREG表达沉默的hVSMCs-siCREG细胞株通过刮伤实验和Transwell小室细胞移行实验检测细胞迁移能力,通过Western blot检测转染前后细胞中CREG蛋白、基质金属蛋白酶和JNK表达及活化情况,应用JNK和基质金属蛋白酶9抑制剂阻断研究分析上述信号分子表达变化在细胞迁移中的作用。结果与结论:Western blot结果证实,CREG蛋白表达在hVSMCs-CREG组中增加(P<0.05),而在hVSMCs-siCREG组中减少(P<0.05)。刮伤实验和Transwell实验分析结果证实hVSMCs-CREG组细胞较正常对照组细胞迁移能力受抑。相反,hVSMCs-siCREG组细胞迁移能力显著增加(P<0.05)。Western blot和明胶酶谱分析证实hVSMCs-siCREG组细胞中MMP9活性明显增加(P<0.05),同时JNK蛋白活化。进一步应用JNK抑制剂阻断研究证实,CREG蛋白表达抑制引起的血管平滑肌细胞迁移能力增加与细胞中基质金属蛋白酶9活性均受到剂量依赖性抑制。结果证实,CREG蛋白表达可抑制JNK-基质金属蛋白酶9信号通路的活化,以此抑制体外培养的人血管平滑肌细胞迁移。; 闫承慧栾波李杰张效林韩雅玲; 关键词：阻遏蛋白 E1A激活基因阻遏子血管平滑肌细胞迁移

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辽宁省自然科学基金(20092088)

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