国家科技重大专项(2008ZX10002-021)
- 作品数：16 被引量：53H指数：4
- 相关作者：黄培堂朱旭东殷正丰王荣伍龙更多>>
- 相关机构：军事医学科学院第二军医大学复旦大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- CCCTC-结合因子与输入蛋白13存在蛋白间相互作用
- 2011年
- 目的:研究CCCTC-结合因子(CTCF)是否与输入蛋白13(IPO13)存在相互作用。方法:采用GST pull-down及免疫共沉淀实验研究二者的相互作用。
- 王荣沈晶晶黄培堂朱旭东
- 关键词：蛋白质相互作用
- 肝癌模型的研究进展被引量：12
- 2009年
- 建立适宜的人肝癌模型，是研究肝癌发生进展及干预措施的必备平台。随着肝癌研究的深入，模型的建立和技术也不断发展，先后出现自发性肝癌模型、诱发性动物肝癌模型、移植型动物肝癌模型、基因工程肝癌模型等。建立模型的动物也多种多样，主要有鼠、兔、旱獭、猪、犬及树晌等。建立更好的模型为肝癌研究开辟了广阔前景。
- 伍龙汤钊猷李雁
- 关键词：肝癌模型干预措施肝癌发生基因工程动物诱发性
- 非转移性和转移性人肝癌血清糖蛋白凝集素亲和谱的比较研究被引量：2
- 2011年
- 目的应用凝集素亲和技术寻找肝癌转移相关特征性血清糖蛋白凝集素亲和谱,并探讨其生物学意义。方法本研究利用含有13种肿瘤相关的凝集素集合芯片技术,比较研究了非转移性和转移性人肝癌血清糖蛋白凝集素亲和谱,同时采用多重凝集素印迹方法验证凝集素芯片结果。计量资料数据采用双样本异方差t检验,进行两两比较。结果研究证明,与非转移人肝癌血清相比,转移性肝癌血清糖蛋白对麦胚凝集素(wheatgerm agglutinin,WGA)、黑接骨木凝集素(sambucus nigra lection,SNA)、红腰豆凝集素(phaseolus vulgariserythroagglutinin,PHAE)和欧曼陀罗凝集素(datura stramonium lectin,DSA)的亲和作用增强(P<0.05)。提示转移性肝癌血清糖蛋白出现了增多的唾液酸(sialic acid,sia)、N-乙酰葡萄糖胺(N-acetyl glucosamine,GlcNAc)、平分型GlcNAc及多天线、偏二天线糖链结构。结论血清糖蛋白聚糖链的变化与肿瘤侵袭和转移密切相关,为临床筛选肝癌侵袭及转移相关的糖标记提供了重要参考。
- 陈巧佩孙淳张舒康晓楠李岩郭坤孙璐秦雪刘银坤
- 关键词：肝癌肿瘤转移聚糖
- CCCTC-结合因子的表达水平影响其在细胞内的分布被引量：1
- 2011年
- 目的:研究CCCTC-结合因子(CTCF)的表达水平与其在HeLa和HepG2细胞内分布的关系。方法:利用小干扰RNA敲降CTCF的表达;利用免疫荧光染色检测CTCF在细胞内的分布。结果:在HeLa和HepG2细胞中下调CTCF的表达,检测到CTCF在细胞核内的分布比例减少,而在细胞质内的分布比例相应增加。结论:CTCF的表达水平会影响其在细胞内的分布。
- 王荣黄培堂朱旭东
- HBx-EGFP-TLM融合蛋白表达载体的构建、蛋白表达纯化及活性检测
- 2011年
- 乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)具有广泛的转录激活作用,但是由于细胞类型和实验条件的差异,外源启动子介导的HBx瞬时表达水平常表现出不均一性,为其功能的研究带来困难。为了解决HBx研究过程中遇到的这些难题,利用PCR扩增获得HBx及含转导肽TLM的EGFP编码序列,经酶切后插入pGEX-4T-1原核表达载体,成功构建重组质粒pGEX-HBx-EGFP-TLM和pGEX-EGFP-TLM。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,融合蛋白经IPTG诱导表达,采用?KTATM Purifier蛋白纯化系统纯化并进行SDS-PAGE和Western blotting分析,确定为目的蛋白。将纯化后的融合蛋白分别与AML12和SMMC-7721细胞共孵育,Western blotting和激光共聚焦显微镜检测证实TLM转导肽能够介导HBx-EGFP和EGFP进入细胞,同时进入细胞的HBx-EGFP-TLM能够发挥转录激活活性,为HBx功能的深入研究奠定了基础。
- 史晓燕张莹莹周晓巍陆健昇郭泽坤黄培堂
- 关键词：乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒X蛋白
- CCCTC-结合因子与核周蛋白α4存在分子间相互作用并调控其基因表达被引量：2
- 2010年
- 目的:研究CCCTC-结合因子(CTCF)是否与核周蛋白α4(KPNA4)有蛋白间相互作用并调控其表达。方法:用GSTpull-down实验研究CTCF是否与KPNA4存在蛋白间相互作用;用逆转录半定量PCR和免疫印迹检测CTCF敲降对KPNA4基因表达的影响。结果:GSTpull-down实验表明CTCF与KPNA4之间存在相互作用;当CTCF敲降时,KPNA4基因的表达随之下降。结论:CTCF与KPNA4之间存在相互作用并调控其基因表达。
- 沈晶晶黄培堂朱旭东
- 关键词：基因表达调控蛋白质相互作用
- MeplA基因在肝癌中的表达及其功能研究
- 2011年
- 目的研究甲基多巴a亚基（MeplA）基因在肝癌组织中的表达情况及其对肝癌细胞生长的影响，为了解肝癌发病的分子机制奠定理论基础。方法利用半定量PCR方法和real-timePCR方法检测MeplA基因在人正常组织和47例癌与癌旁组织中的表达情况，运用RNA干扰和过表达技术观察分析肝癌细胞的克隆形成，通过流式细胞术检测这些细胞周期的变化。结果在47例癌与癌旁组织中，半定量PCR结果显示MeplA在33．3％（10／30）的癌组织中高表达，real—timePCR结果显示MeplA在51．1％（23／45）的癌组织中表达高于癌旁组织2倍以上。在Huh7细胞株中干扰MeplA基因后，细胞克隆形成能力降低，G2／M期明显增多。过表达MeplA基因后，在Focus细胞株中细胞克隆形成能力提高，G1／S期细胞增多。结论MeplA基因在维持肝癌细胞恶性性状方面可能起到重要的作用，可能是一个新的肿瘤相关基因，对其深入研究可能会发现肝癌发病的新机制，并作为肝癌治疗的分子标记物和潜在的靶点。
- 高摹昇王玉平韩泽广
- 关键词：肝细胞癌RNA干扰
- CCCTC结合因子在HeLa细胞中调控X染色体连锁的凋亡抑制蛋白的表达
- 2010年
- 目的:确定HeLa细胞的CCCTC结合因子(CTCF)表达水平是否与细胞的抗凋亡能力相关,并研究其具体分子机制。方法:用顺铂和阿糖胞苷分别诱导HeLa细胞和CTCF敲降的HeLa-CTCF-II-11细胞凋亡,比较两者的凋亡率;用基因表达芯片检测CTCF敲降后HeLa细胞的表达谱变化,寻找并验证受CTCF调控的与凋亡相关的蛋白。结果:用顺铂和阿糖胞苷诱导后,HeLa-CTCF-II-11细胞的凋亡率显著高于HeLa细胞;HeLa细胞的CTCF敲降后,X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(XIAP)的表达显著下降。结论:CTCF敲降使HeLa细胞的抗凋亡能力下降,CTCF对XIAP基因的表达调控在这个过程中起了重要作用。
- 冯烨涂长春黄培堂朱旭东
- 关键词：基因表达调控凋亡
- 活化型肝星状细胞清除机制及其相关抗肝纤维化策略被引量：4
- 2010年
- 已知肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)活化是肝纤维化的核心环节。越来越多的基础和临床研究证实,肝纤维化可以逆转。而肝纤维化消退的主要表现之一是活化型HSCs数量不断减少。因此,如何清除活化型HSCs并使之成为抗肝纤维化治疗新策略正逐渐受到关注。现有两种可能机制用于解释活化型HSCs的清除现象,即活化型HSCs的表型逆转和凋亡。本文旨在对基于活化型HSCs清除机制的抗肝纤维化策略进展做一综述。
- 李晶殷正丰
- 关键词：肝纤维化肝星状细胞表型细胞凋亡
- Coronin-1 C蛋白表达与肝癌侵袭和转移相关被引量：1
- 2010年
- 目的 采用膜蛋白质组学技术筛选与原发性肝癌侵袭和转移相关的分子,并加以验证.方法 以不同转移潜能的人肝癌细胞HCCLM9和MHCC97L为研究对象,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和电喷雾串联质谱技术比较和鉴定差异表达的膜蛋白,进一步行Westernblot、动物模型标本和临床标本验证. 结果电喷雾串联质谱鉴定表达差异条带中蛋白质14个,其中Western blot验证coronin-1 C在人肝癌细胞HCCLM9中灰度值coronin-1 C/整合素α3比值为7.31±0.73,在MHCC97L中为2.84±0.99.coronin-1C在HCCLM9细胞中的表达水平显著性升高（t=6.27,P〈0.05）.在裸鼠肝癌组织中免疫组织化学提示coronin-1C表达也明显升高.115例临床病理标本免疫组织化学显示,coronin 1C表达越强,肿瘤的侵袭程度越强、临床病期越晚.结论 Coronin-1C与肝癌的侵袭和转移相关.
- 伍龙侯晋轩彭春伟张燕华陈创陈良冬李雁
- 关键词：蛋白质组
