国家自然科学基金(30300321)
- 作品数：6 被引量：34H指数：4
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- 新生期小鼠卡介苗接种和呼吸道合胞病毒感染对肺部炎症和免疫状态的影响被引量：1
- 2006年
- 目的研究小鼠新生期卡介苗(BCG)接种对呼吸道合胞病毒(RSV)感染后肺部炎症和免疫状态的影响。方法新生BALB/c小鼠分4组:A组为对照组、B组为BCG接种组、C组为RSV感染组、D组为BCG接种后RSV感染组。RSV感染后1周观察肺泡灌洗液(BALF)中白细胞数及分类,ELISA法检测BALF中IFN_γ、IL_4、IL_10含量,RT_PCR检测肺组织Toll样受体4(TLR4)mRNA表达,HE染色进行肺组织炎症病理评分。结果C、D两组BALF中白细胞总数、淋巴细胞数、中性粒细胞数、IFN_γ含量以及肺组织TLR4mRNA表达量和炎症病理评分显著高于A、B组(P<0.01或0.05),BALF中IL_4、IL_10含量4组间差异无显著性,C、D两组之间在各项指标上差异无显著性。结论小鼠新生期BCG接种对RSV感染诱发的肺组织炎症和免疫状态无影响。
- 李睿刘恩梅杨锡强王莉佳王建军
- 关键词：卡介苗呼吸道合胞病毒炎症
- 呼吸道合胞病毒感染后气道上皮细胞Toll样受体4的表达及其功能被引量：8
- 2008年
- 目的观察呼吸道合胞病毒（RSV）感染后气道上皮细胞Toll样受体4（TLR4）表达变化及其信号通路的功能，探讨RSV诱导气道炎症的机制。方法体外培养人气管上皮细胞株9HTEo，以RSV感染复数为10感染上皮细胞，用半定量逆转录PCR（RT-PCR）检测TLR1-10 mRNA表达；用定量PCR检测TLR4 mRNA表达的动态变化；用流式细胞术检测TLR4蛋白表达及与细胞凋亡的关系；感染后再用TLR4激动剂脂多糖（LPS）刺激细胞，用酶联免疫法（ELISA）检测上清液中白细胞介素-8（IL-8）含量以观察病毒诱导表达的膜TLR4蛋白功能。RT-PCR和流式细胞术实验分为正常组和RSV感染组，用GraphPad 4．0统计软件进行配对t检验；实时定量PCR实验分为正常组、RSV感染组和紫外线灭活RSV感染组，采用Kruskal-Wallis检验分析；ELISA实验分为正常组、RSV感染组、单独LPS刺激组和RSV-LPS共刺激组，采用One-way ANOVA检验分析。结果（1）RSV感染组TLR2～10 mRNA表达均上调（t值为3．49～14．47，P均〈0．05），以TLR2和TLR6变化最为显著；定量PCR结果提示：感染组TLR4 mRNA 3h后开始增高（Kruskal-Wallis检测值=8．82，P〈0．05，n=6），紫外灭活RSV组TLR4 mRNA表达无明显变化；（2）流式细胞术结果表明：RSV感染组膜上TLR4表达比正常组增高（平均荧光强度：1．27±0．48，0．97±0．25，t=2．39，P〉0．05，n=10），感染组胞内TLR4表达比正常组降低（平均荧光强度：3．08±1．38，3．36±1．31；t=2．92，P〉0．05，n=10），感染组膜TLR4阳性细胞中（93．32±1．7）％为膜黏连蛋白-5阳性细胞；（3）RSV-LPS共刺激组培养上清液中IL-8含量明显高于单纯LPS刺激组（F=59．29，P〈0．01，n=3）。结论RSV感染后，上皮细胞TLR4 mRNA和蛋白表达水平上调，与TLR4信号通路相关的IL-8分泌增加；TLR4与上皮细胞凋亡的关系提示TLR4及其信号通路可能参与了RSV诱导的上皮细胞急
- 谢晓虹刘恩梅杨锡强罗嘉慧李欣王莉佳刘伟徐文飞
- 关键词：TOLL样受体4呼吸道合胞病毒气道炎症发病机制
- 卡介苗新生期接种和呼吸道合胞病毒感染对小鼠实验性哮喘的联合作用被引量：12
- 2006年
- 目的观察卡介苗(BCG)新生期接种和呼吸道合胞病毒(RSV)感染对小鼠实验性哮喘的联合作用。方法新生期小鼠分5组:对照组、鸡卵白蛋白(OVA)组、BCG+OVA组、RSV+OVA组、BCG+RSV+OVA组,除对照组外,其他各组为哮喘组都进行OVA致敏和激发。最后一次激发后24 h内测气道高反应性,进行支气管肺泡灌洗,观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞数及分类,ELISA方法检测肺泡灌洗液中细胞因子含量和血清中OVA特异性IgE水平,肺组织HE染色进行炎症病理学分析。结果(1)各哮喘组BALF中白细胞总数及各类炎症细胞数都比对照组显著升高。BCG+OVA组的白细胞总数、嗜酸性粒细胞和淋巴细胞计数显著低于其他哮喘组(P<0.05或0.01)。(2)各哮喘组与对照组比较BALF中IL-4水平显著增高(P<0.05),IFN-γ水平显著减低(P<0.05),4组哮喘组之间两两比较差异无统计学意义。各实验组IL-10水平差异无统计学意义。(3)各哮喘组血清中OVA特异性IgE水平都比对照组明显增高(P<0.05或0.01),各哮喘组之间比较差异无统计学意义。(4)随吸入乙酰甲胆碱浓度增加各组气道反应性明显增加。RSV+OVA组和BCG+RSV+OVA组的气道反应性最高,其后依次是OVA组、BCG+OVA组、对照组。RSV+OVA组和BCG+RSV+OVA组间比较差异无统计学意义。(5)各哮喘组的炎症评分都显著高于对照组。BCG+OVA组的细支气管周围炎症和支气管周围嗜酸性粒细胞浸润百分率显著低于另外三组(P均<0.05),肺泡炎症反应明显低于OVA组和BCG+RSV+OVA组(P均<0.05)。结论新生期BCG接种在OVA致敏/激发的小鼠哮喘模型中能减轻哮喘炎症和气道高反应性,但这种抗哮喘作用可被RSV感染逆转。
- 李睿刘恩梅杨锡强王莉佳
- 关键词：卡介苗呼吸道合胞病毒哮喘小鼠
- 新生期小鼠卡介苗接种对脾脏T细胞功能亚群发育的影响被引量：12
- 2005年
- 目的 研究接种卡介苗对新生小鼠T细胞功能发育的影响。方法 新生清洁级BALB/c小鼠卡介苗接种与未接种组各 8只, 4周后取脾细胞进行CD4、CD25、CD44等表面标志及CD3+细胞胞内IFN γ、IL 10和IL 4等细胞因子的双标流式检测,并RT PCR方法检测脾细胞转录因子T bet、Foxp3、GATA 3mRNA的表达。结果 卡介苗接种组小鼠脾脏CD4+T细胞百分率为(23 .50±2. 59)%明显低于对照组(47. 38±10. 41)% (P<0. 01),但CD4+T细胞中CD25+和CD44+百分率[ (24. 92±2. 74)%和(89. 29±2. 56)% ]高于对照组 [ (20. 27±2. 85)%和 (82. 98±5. 51)% ](P<0 05);卡介苗接种组CD3+细胞中IFN γ、IL 10阳性细胞百分率分别为 ( 6. 52±2. 40 )%、(14 81±3. 65)%,高于对照组[ (3 .13±2. 03)%、(10. 90±1. 61)% ] (P<0. 05),IL 4表达两组差异无统计学意义[ (1. 17±0 46) % 和 (1. 51±0. 75)%,P>0. 05]。T betmRNA表达卡介苗接种组较未接种组明显增强[T bet/β actin为 0 44±0. 11和 0. 28±0. 06,P<0. 05 ],但Foxp3、GATA 3mRNA表达两组差异无统计学意义[Foxp3 /β actin为 0. 27±0 .11和 0. 30±0. 16,GATA 3 /β actin为 0 .46±0. 08和 0. 50±0 .10,P均>0. 05]。结论 卡介苗接种能诱导新生小鼠体内产生Th1反应。
- 李睿刘恩梅杨锡强王莉佳李欣
- 关键词：卡介苗接种脾脏转录因子
- 卡介苗联合Poly I：C接种对新生期小鼠脾脏T细胞的影响被引量：1
- 2008年
- 目的研究卡介苗（BCG）联合Poly I：C新生期接种对小鼠脾脏T细胞功能亚群发育的影响。方法新生清洁级BALB／c小鼠32只，分4组：对照组、BCG组、Poly I：C组、BCG和Poly I：C联合接种组，新生期接种4周后取脾细胞用流式细胞仪检测CD3^＋CD8^＋IFN-γ^＋、CD3^＋CD8^-IFN-γ^＋、CD3^＋CD8^＋IL-4^＋、CD3^＋CD8^-IL-4^＋、CD4^＋Foxp3^＋T细胞的比例，其分别代表Te1、TH1、Tc2、TH2和调节性T细胞（Treg）亚群。结果BCG组、Poly I：C组、BCG和Poly I：C联合接种组TH1、Tc1细胞比例明显高于对照组（P〈0．05或P〈0．01），3个接种组间比较差异无统计学意义；Tc2、TH2和Treh比例各组间比较差异没有统计学意义；3个接种组TH1／TH2和总IFN-γ／IL-4比值明显高于对照组（P〈0．05或P〈0．01），联合接种组TH1／TH2比值高于BCG组（P〈0．05），Tc1／Tc2比值各组间差异没有统计学意义；CD4^＋Foxp3^＋T细胞比例各组间比较差异没有统计学意义。结论新生期BCG和Poly I：C接种均能促进TH1、Te1细胞亚群的发育，提高TH1／TH2比值，其联合接种在TH1／TH2水平可能具有一定的协同作用，但不能影响CD4^＋Foxp3^＋Treg细胞的比例。
- 何云刘恩梅杨锡强刘崇海李欣
- 关键词：卡介苗T细胞亚群调节性T细胞
- TLR4基因3’非翻译区11367位点多态性与婴幼儿喘息性疾病的研究被引量：5
- 2009年
- 目的检测TLR4基因3’非翻译区(3’UTR)11367位点的多态性,探讨该多态性与喘息性疾病的易感性、气道分泌物的细胞因子水平、病原学以及临床表型的关系。方法采用单管双向等位基因特异性扩增技术检测TLR4基因3’UTR11367位点的基因多态性。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测喘息组患儿气道分泌物中细胞因子的水平。采用免疫荧光法进行呼吸道合胞病毒检测。结果TLR4G11367C位点核苷酸存在G/C二态性,表现为GG纯合、GC杂合两种基因型。喘息组和对照组该位点基因型、等位基因分布频率之间均存在显著性差异(P均为0.002)。GG型患儿IL-8水平、病原菌感染阳性率均明显高于GC型。不同基因型的临床表型无显著性差异。结论TLR4基因3’UTR基因多态性与喘息性疾病易感性相关,且与气道分泌物中IL-8水平、机体对RSV易感性、气道细菌定植有关。
- 赵静刘恩梅邓昱谢晓虹陈杰华
- 关键词：IL-8基因多态性喘息呼吸道合胞病毒感染
