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凋亡素重组腺相关病毒的构建及体外抑制膀胱癌效应: 2012年; 目的探讨携带凋亡素基因的重组腺相关病毒构建方法，观察其体外抑制膀胱癌的效应。方法构建重组质粒pAAV-VP3，经EcoRI/SalI双酶切鉴定和基因测序无误后，采用三质粒共转染法包装重组腺相关病毒rAAV—VP3。收获病毒后聚合酶链反应（PCR）扩增病毒液中的目的基因鉴定重组病毒，对其进行纯化后透射电镜观察病毒颗粒，并检测病毒滴度。按每个细胞5×10^5个载体基因组的剂量感染EJ细胞后，逆转录（RT）-PCR检测VP3基因在EJ细胞中的转录，Westernblot法检测凋亡素蛋白的表达。透射电镜扫描观察感染重组病毒后肿瘤细胞的超微结构变化，流式细胞术（FCM）检测重组病毒对EJ细胞的影响。结果转染72h后重组腺相关病毒rAAV-VP3包装成功，滴度为5．1×10^11个载体基因组／ml，电镜下可见病毒颗粒。感染EJ细胞后，可检测到VP3基因的转录和凋亡素蛋白表达，电镜观察到凋亡形态学改变，FCM检测S期细胞比例降低和G2／M期细胞比例增高，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论重组腺相关病毒rAAV—VP3在体外能够发挥生物学活性，其介导的凋亡素表达抑制膀胱癌的体外效应为体内实验奠定了基础。; 王春晖王剑松王文举余力锐詹辉徐鸿毅; 关键词：VP3蛋白膀胱肿瘤

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