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国家自然科学基金(30271246)

作品数：12 被引量：35H指数：4
相关作者：白云段文元黄钢姜曼张华欣更多>>
相关机构：第三军医大学第三军医大学西南医院中国科学院更多>>
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文献类型

  • 12篇中文期刊文章

领域

  • 12篇医药卫生
  • 1篇生物学

主题

  • 5篇基因
  • 4篇细胞
  • 3篇心脏
  • 3篇心脏移植
  • 3篇基因工程
  • 3篇共刺激
  • 2篇真核
  • 2篇真核表达
  • 2篇蛇毒因子
  • 2篇排斥
  • 2篇排斥反应
  • 2篇细胞表达
  • 2篇内皮
  • 2篇内皮细胞
  • 2篇介导
  • 2篇急性排斥
  • 2篇急性排斥反应
  • 2篇共刺激分子
  • 2篇核表达
  • 2篇分子

机构

  • 11篇第三军医大学
  • 3篇第三军医大学...
  • 2篇中国科学院

作者

  • 11篇白云
  • 5篇黄钢
  • 5篇段文元
  • 3篇张立群
  • 3篇杨康
  • 3篇姜曼
  • 3篇张华欣
  • 3篇吴蔚
  • 2篇肖宇宏
  • 2篇兰纲
  • 2篇王婉瑜
  • 2篇李军
  • 2篇张利永
  • 2篇熊刚
  • 2篇黎万玲
  • 2篇傅晓岚
  • 2篇许雪青
  • 1篇罗娜
  • 1篇陈雪丹

传媒

  • 4篇免疫学杂志
  • 4篇第三军医大学...
  • 1篇中华器官移植...
  • 1篇重庆医学
  • 1篇西北国防医学...
  • 1篇重庆医科大学...

年份

  • 1篇2007
  • 6篇2006
  • 4篇2005
  • 1篇2003
共 12 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
人PD1-Fc融合分子的构建及其在CHO细胞中的表达与鉴定被引量：8
2005年
目的利用基因工程手段构建hPD1Fc重组cDNA,用真核表达系统制备有活性的hPD1Fc融合蛋白。方法PCR方法扩增编码hPD1膜外区的cDNA序列,将其与人IgG1Fc和pcDNA3.1(+)片段连接,构建成hPD1Fc重组表达载体。用脂质体法转染CHO细胞,夹心ELISA法检测上清液中融合蛋白hPD1Fc的表达,经ProteinA亲合层析纯化,SDSPAGE、免疫印迹鉴定表达产物。结果PCR扩增得到编码人PD1全长的288aa编码基因片段,将其膜外区167aa的编码序列与hIgG1Fc的cDNA片段一起连接并插入pcDNA3.1(+)表达质粒。重组质粒转染CHO细胞后,夹心ELISA法检测显示培养上清液中有hPD1Fc蛋白表达。纯化后的hPD1Fc蛋白经SDSPAGE和免疫印迹鉴定其相对分子质量约42800,与理论预测值相符。结论成功构建了hPD1Fc重组表达载体,利用哺乳动物细胞CHO表达出有活性的hPD1Fc融合蛋白,为进一步研究PD1分子在免疫耐受、自身免疫性疾病中的作用奠定了基础。
段文元白云张华欣姜曼黎万玲
关键词：基因工程真核表达
眼镜蛇毒因子消耗补体对大鼠移植心急性排斥反应的抑制作用被引量：2
2006年
目的研究中华眼镜蛇毒因子(CVF)消耗补体对大鼠心脏移植急性排斥反应的影响。方法以近交系BN大鼠为供者,Lewis大鼠为受者,建立腹腔异位心脏移植模型。实验分为2组,每组8只。CVF组:心脏移植术前3 d、2 d时,经受者尾静脉注射CVF 50μg／kg;术前12 h至移植心停跳时,经尾静脉注射CVF 20μg／kg,每2 d注射1次。对照组:术前、术后不给予受者任何特殊处理。术后观察移植心的存活时间,测定术后第1、3、5和6d及移植心停跳时的血清总补体活性(CH50法)、移植心C3沉积及CD3+T细胞浸润情况,并观察移植心的病理变化。结果CVF组和对照组的移植心存活时间分别为(11．69±0．72)d和(6．65±0．35)d,两组比较,差异有统计学意义(P<0．01)。CVF组移植心组织内C3沉积和CD3+T细胞浸润程度均较对照组同期明显减轻,病理损害程度也较对照组同期明显减轻。结论CVF消耗补体对大鼠心脏移植急性排斥反应起到了明显的抑制作用,从而延长移植心存活时间。
兰纲杨康白云吴蔚王婉瑜
关键词：补体心脏移植移植物排斥
鼠B7-H4基因重组腺病毒的构建及其在B16F10细胞中的表达、鉴定被引量：1
2006年
目的构建表达鼠B7-H4的重组腺病毒并检测其在B16F10细胞中的表达。方法采用RT-PCR技术,取小鼠肺脏,TriPure提取肺脏总RNA,反转录得到cDNA序列,PCR扩增B7-H4全长,克隆到plenti6/V5克隆载体中并经过测序证实与标准序列一致。加入适当的酶切位点,双酶切PCR扩增产物连接入pAd track CMV中构建成腺病毒穿梭质粒pAd track CMVmB7-H4,经酶切线性化后,用CaCl2的方法转化到含有腺病毒骨架质粒pAd Easy的BJ 5183大肠杆菌中,挑选同源重组菌落提取质粒,酶切线性化重组质粒并转染293细胞,包装成重组病毒颗粒。重组病毒上清感染B16F10细胞,并用PE标记的B7-H4单克隆抗体检测B16F10细胞mB7-H4蛋白的表达。结果RT-PCR扩增得到含编码mB7-H4的860 bp基因片段,与预期大小一致,并经过测序证实与标准序列一致。成功构建了mB7-H4重组腺病毒,病毒滴度达到3×1013pfu/ml,pAd mB7-H4重组腺病毒表达载体感染B16F10细胞后,荧光显微镜观察显示PE标记的mB7-H4单克隆抗体染色B16F10细胞阳性。结论成功构建了mB7-H4重组腺病毒,转染B16F10细胞后表达出有活性的B7-H4蛋白,为进一步研究B7-H4分子在器官移植、自身免疫性疾病以及肿瘤逃逸机制中的作用奠定了基础。
段文元白云罗娜许雪青
关键词：B7-H4基因工程同源重组
内皮细胞表达CD137分子介导对T细胞的抑制效应被引量：5
2005年
目的研究内皮细胞表达的CD137分子与活化的T细胞表达的CD137L交联后对T细胞的刺激效应。方法将活化的内皮细胞与活化的T细胞共培养,ELISA检测共培养上清中IL-2、IL-10和IFN-γ的含量;流式细胞仪检测内皮细胞表面标志分子CD25、CD69的表达变化;CCK-8试剂盒检测T细胞存活率,并观察用融合蛋白抗-CD137阻断CD137-CD137L共刺激通路后T细胞分泌细胞因子的变化。结果采用细胞共培养后,T细胞分泌IL-2、IL-10和IFN-γ的水平下降,而且CD25、CD69的表达水平降低,T细胞存活率下降,应用抗-CD137单克隆抗体阻断CD137-CD137L相互作用后,IL-2、IL-10和IFN-γ的分泌水平升高,CD25、CD69的表达上调,T细胞存活率上升。结论活化的内皮细胞诱导表达CD137蛋白分子与活化的T细胞上诱导表达的CD137L相互作用,通过CD137L向T细胞内传递抑制信号,抑制了T细胞合成和分泌细胞因子的功能。表明CD137-CD137L信号通路在内皮细胞与T细胞的信号作用中有着重要的地位。
张利永黄钢傅晓岚肖宇宏张立群白云
关键词：CD137CD137L共刺激分子
B7-H4——免疫调控以及肿瘤治疗的新靶点被引量：2
2006年
B7-H4又称B7s1或B7x,是B7家族中的最新发现的一个新成员,它能通过抑制T细胞的增殖、细胞因子的产生和细胞周期的进程来负性调控T细胞的免疫应答,同时大量表达B7-H4还可以促进上皮细胞的恶性转化,保护表皮细胞免于失巢凋亡,在肿瘤的发生,进展和转归中发挥重要作用。对B7-H4信号通路的进一步的研究必将为自身免疫性疾病、病毒感染性疾病和器官移植后排斥反应中T细胞介导的免疫应答调控提供了新的途径,同时也为肿瘤的诊断、治疗提供崭新的策略。
段文元白云
关键词：B7-H4免疫逃逸共刺激信号
T细胞表达CD137L分子介导对血管内皮细胞的活化刺激效应
2005年
目的探讨活化T细胞表面表达的CD137L分子对内皮细胞功能的影响。方法将活化的T细胞与内皮细胞共培养,ELISA检测共培养上清中IL-1、IL-8的含量;流式细胞仪检测内皮细胞表面粘附分子ICAM-1的表达变化,并观察用融合蛋白CD137-Fc阻断CD137-CD137L共刺激通路后内皮细胞分泌细胞因子的变化。结果活化的T细胞刺激了内皮细胞活化,诱导了内皮细胞合成和分泌细胞因子IL-1、IL-8以及粘附分子ICAM-1的表达;可溶性融合蛋白CD137-Fc成功地阻断了CD137-CD137L的相互作用,内皮细胞合成和分泌细胞因子的能力降低。结论证明CD137-CD137L的相互作用在内皮细胞与T细胞的相互作用中发挥了重要的作用,提示CD137与其配体交联具有刺激内皮细胞活化的生物学功能。
张利永傅晓岚肖宇宏黄钢张立群白云
关键词：CD137CD137L共刺激分子
人B7-H1-Fc融合分子的构建及其在CHO细胞中的表达与鉴定被引量：4
2005年
目的利用基因工程手段构建hB7-H1-Fc重组cDNA,用真核表达系统制备有活性的hB7-H1-Fc融合蛋白。方法PCR方法从活化的人T细胞cDNA文库中扩增编码人B7-H1膜外区的cDNA序列,将其与人IgG1Fc和pC I-neo片段连接,构建成hB7-H1-Fc重组表达载体。用脂质体法转染CHO细胞,夹心ELISA法检测上清中融合蛋白hB7-H1-Fc的表达,经Prote in A亲合层析纯化,SDS-PAGE、免疫印迹鉴定表达产物。结果PCR扩增得到编码人B7-H1膜外区的727bp基因片段,与hIgG1Fc的cDNA片段一起连接并插入pC I-neo表达质粒。重组质粒转染CHO细胞后,夹心ELISA法检测显示培养上清中有hB7-H1-Fc蛋白表达。纯化后的hB7-H1-Fc蛋白经SDS-PAGE和免疫印迹鉴定其分子质量约51.76×103,与理论预测值相符。结论成功构建了hB7-H1-Fc重组表达载体,利用哺乳动物细胞CHO表达出有活性的hB7-H1-Fc融合蛋白,为进一步研究B7-H1分子在免疫耐受、自身免疫性疾病中的作用奠定了基础。
张华欣段文元白云黄钢
关键词：基因工程真核表达
蛇毒因子消耗补体对大鼠同种心脏移植急性排斥反应的影响被引量：6
2006年
目的探讨蛇毒因子(CVF)消耗补体对大鼠同种心脏移植急性排斥反应的影响。方法建立Wistar至SD大鼠同种异位心脏移植模型,实验组经静脉注射CVF以消耗受体血清中补体,观察移植心存活时间,并从实验组和对照组中分别抽取5只大鼠于术后1、3、5、6、7 d定时活杀,对比观察移植心急性排斥反应程度,血清补体活性以及CD4+、CD8+T细胞浸润程度。结果使用CVF的实验组,其移植心存活时间显著延长,平均达(32.39±23.82)d,部分移植心甚至达到长期存活,而对照组为(6.60±0.65)d(P<0.01),病理检查及免疫组化证实实验组急性排斥反应程度、组织内C3沉积情况和CD4+、CD8+T细胞浸润程度均较同期对照组明显减轻。结论CVF清除补体可抑制大鼠同种心脏移植急性排斥反应,显著延长移植心存活时间。
吴蔚杨康白云王婉瑜李军熊刚
关键词：心脏移植急性排斥反应蛇毒因子补体
近交系大鼠心脏移植模型建立的实验研究被引量：2
2006年
目的:建立近交系大鼠同种异位腹腔心脏移植动物模型。方法:采用改良的ono术式建立Brown Norway到Lewis大鼠的腹部异位心脏移植,将供心升主动脉、主肺动脉分别与受体腹主动脉、下腔静脉进行端侧吻合。采用分别结扎右上腔和下腔静脉后一次性集束结扎法取心,行端侧血管吻合连续缝合法。结果:共进行了48例大鼠心脏异位移植,经过预实验16只的技术总结,正式实验32只手术成功率为96.88%,供心冷、热缺血时间和心脏复跳时间明显缩短,手术时间减少至60min。结论:加强供心的综合保护和围手术期的处理,是移植模型建立的关键因素。
兰纲杨康吴蔚李军熊刚
关键词：近交系大鼠异位心脏移植
B7-H1慢病毒的制备及其在B16F10细胞中的表达鉴定被引量：1
2007年
目的构建小鼠B7-H1分子慢病毒表达载体并包装成感染性病毒颗粒,获得稳定表达B7-H1的B16F10细胞。方法以小鼠B7-H1的测序质粒为模板,PCR扩增B7-H1全长,装入pLenti6/V5-D-TOPO慢病毒表达载体,经过测序证实其序列与标准序列完全一致。将B7-H1表达载体用L ipofectam ineTM2000转染293FT细胞,包装成感染性病毒颗粒,感染B16F10细胞后,加入含B lastic id in(终浓度为4.0μg/m l)的RPM I1640培养基,筛选出稳定表达B7-H1蛋白的B16F10细胞株。结果PCR扩增得到编码小鼠B7-H1的877 bp基因片段,与预期大小一致。B7-H1重组慢病毒感染B16F10细胞后,用B7-H1单抗进行免疫组化检测,荧光显微镜观察显示B7-H1分子表达于B16F10细胞。FACS测定B16F10细胞荧光阳性率为36%。结论成功构建了B7-H1慢病毒表达载体,包装出感染性病毒颗粒,重组慢病毒感染B16F10细胞后表达出有活性的B7-H1膜表面蛋白,为进一步研究B7-H1分子在器官移植、自身免疫性疾病以及肿瘤免疫逃逸机制中的作用奠定了基础。
张立群段文元许雪青黄钢陈雪丹白云
关键词：B7-H1慢病毒基因治疗
全选 清除 导出
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