国家自然科学基金(30271243)
- 作品数：12 被引量：24H指数：3
- 相关作者：陈必成昌盛张鑫杜敦峰唐莉更多>>
- 相关机构：华中科技大学温州医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 抗γ公共链抗体抑制T淋巴细胞增殖的试验被引量：3
- 2005年
- 目的探讨抗γ公共链抗体体外抑制T细胞增殖的机理。方法分离BALBc、C57BL6脾细胞进行双向混合淋巴细胞培养(MLC)。第1组于MLC同时加入抗γ公共链抗体;第2组于MLC第3天加入抗γ公共链抗体。MLC为阳性对照,单独BALBc小鼠脾细胞培养为阴性对照。1～5d取培养细胞,检测培养细胞的增殖(羧基荧光素乙酰乙酸CFSE染色)、细胞凋亡(PECD3,FITCannexinⅤ)、细胞周期(PI)。脾细胞survivin表达通过免疫细胞染色方法检测。结果阳性对照在第3天开始检测到明显的分裂峰而第1、2组都未出现分裂峰。第1、2组在第1～2天未发现细胞凋亡增加,分别于第3、4天检测到部分T细胞凋亡、M期细胞数下降及凋亡细胞数增加;第2组与阳性对照组M期细胞的百分比例差异有统计学意义[(25.97±12.85)%vs(6.36±4.81)%,P=0.008)]。MLC第3天后,在阳性对照组检测到survivin表达;阴性组及试验组均未检测到survivin,其中阳性对照组与第1组的survivin阳性细胞数百分比差异有统计学意义[(18.00±14.13)%vs(1.57±1.61)%,P=0.043]。结论阻断γ公共链可以通过诱导同种反应性T细胞凋亡途径从而抑制T细胞增殖。
- 陈必成昌盛唐莉张鑫郭晖王雪琼陈忠华
- 关键词：SURVIVINT淋巴细胞增殖SURVIVIN表达抗体混合淋巴细胞培养BALB/C小鼠
- 输注脾细胞建立输血相关的移植物抗宿主模型被引量：3
- 2006年
- 目的探讨输注同种脾细胞建立小鼠输血相关的移植物抗宿主(TA-GVHD)模型及其特点。方法分离C57BL/6(H-2b)脾细胞,分别经静脉输注给Balb/c(H-2d)裸鼠与F1代(C57BL/6×Balb/c H-2b/d),建立输血相关的移植物抗宿主模型。活体染料羧基荧光素乙酰乙酸(5,6-carboxyfluorescein diacetate succini midyl ester,CFSE)标记供者脾细胞,通过流式细胞仪分析供者细胞在受者体内的增殖;免疫组化分析供者脾细胞survivin的表达;检测Balb/c裸鼠体内抗供者抗体及IL-10浓度;分析皮肤、小肠、肝脏的病理变化。结果输注同种脾细胞成功建立急性TA-GVHD模型。受者脾脏及外周可以检测到标记后增殖的供者细胞。小鼠的病理改变主要出现在肝脏,浸润细胞早期表达survivin。小肠及皮肤未见明显的病理改变。TA-GVHD裸鼠第7天IL-10、抗-Balb/c显著升高。结论输注同种脾细胞可以建立TA-GVHD模型,并具有简单、快速、稳定的特性,为诊断、治疗GVHD提供了良好的模型。
- 陈必成昌盛向芙莉郭晖唐莉金昊曾宁陈忠华
- 关键词：淋巴细胞
- 阻断T细胞生长因子信号通路治疗移植物抗宿主病
- 2006年
- 目的探讨通过抗γ公共链单克隆抗体封闭T细胞生长因子受体治疗小鼠移植物抗宿主病(GVHD)的效果。方法通过混合淋巴细胞培养观察抗γ公共链抗体在体外对T细胞的抑制作用。经静脉输注C57BL／6(H-2b)脾细胞给F1代小鼠(C57BL／6×Balb／cH-2b/d),建立移植物抗宿主病模型。对GVHD模型小鼠短期内给予抗γ公共链抗体,一共3次,并观察其治疗效果。结果抗γ公共链抗体可抑制T细胞增殖,使凋亡细胞数增加及M期细胞数下降。输注同种脾细胞能成功建立急性GVHD模型,主要引起肝脏损伤的病理改变。单次注射抗γ公共链抗体可使GVHD小鼠肝内浸润的淋巴细胞发生凋亡;短期内连续3次注射抗γ公共链抗体可使丙氨酸转氨酶、天冬氮酸转氨酶明显低于对照组(P<0．05),但肝内仍然可观察到淋巴细胞浸润。结论体外阻断T细胞生长因子受体途径可以完全清除反应性T细胞,亦适用于GVHD治疗;但短期治疗不能完全清除反应性T细胞。
- 陈必成杨亦荣昌盛向芙莉郭晖夏鹏郑少玲陈忠华
- 关键词：移植物抗宿主病T淋巴细胞小鼠
- 术前输注供者脾细胞联合应用西罗莫司延长小鼠移植心存活时间的机理
- 2007年
- 目的 探讨移植术前输注供者脾细胞（DST）联合应用西罗莫司（SRL）延长小鼠移植心存活时间的机理。方法 单向混合淋巴细胞培养中的刺激细胞及静脉输注的脾细胞均采用经丝裂霉素C处理后失去增殖活性的Balb／c（H-2^d）小鼠脾细胞（包括体外实验和体内实验）。（1）体外实验：分为3组，空白对照组：取正常C57BL／6（H-2^b）小鼠（136小鼠）的脾细胞作为反应细胞；SRL组：取用SRL（1．5μ·g^-1·d^-1）灌胃7d后的B6小鼠脾细胞作为反应细胞；DST＋SRL组：取行脾细胞静脉输注8d、次日予SRL（1．5μl·g^-1·d^-1）灌胃7d后的B6小鼠的脾细胞作为反应细胞。观察各组在单向混合培养中的脾细胞增殖能力。（2）体内实验：Balb／c小鼠为供者，B6小鼠为受者，建立颈部异位心脏移植模型。实验分为3组，空白对照组：单纯行心脏移植；DST组：受者移植前8d给予供者脾细胞静脉输注；DST＋SRL组：受者移植前8d给予供者脾细胞静脉输注，次日予以SRL灌胃7d（1．5μl·g^-1·d^-1）。术后观察各组移植心的存活时间、病理表现、受者淋巴细胞中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Tr细胞）和凋亡细胞比例的改变及同种抗原刺激后增殖活性变化。结果 体外实验中，DST＋SRL组反应细胞增殖活性平均为（13．76±2．81）％，明显低于空白对照组（28．14％±5．53％，P〈0．05）。体内实验中，空白对照组、DST＋SRL组以及DST组移植心平均存活时间分别为（8．6±0．48）d、（35±14．4）d和（4．83±0．52）d，DST＋SRL组存活时间显著延长（P〈0．05）；流式细胞术（FACS）分析显示DST＋SRL组脾细胞中CD4^＋CD25^＋Tr细胞比例平均为（3．39±0．21）％，明显高于空白对照组（1．57％±0．3％，P〈0．05）。结论移植术前输注供者脾细胞联合应用西罗莫司可通过清除同种反应性T细胞克隆，增加受者体内CD4^＋CD25^
- 吴轲向芙莉袁劲曾志贵周鸿敏昌盛陈忠华
- 关键词：西罗莫司
- 羧基荧光素乙酰乙酸在移植免疫研究中的应用被引量：4
- 2005年
- 目的:介绍和探讨活体荧光示踪染料羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA SE)在移植免疫研究中的应用及价值。 方法:以不同浓度的CFDA SE标记小鼠脾细胞用于体内外实验。标记Balb/c(H2d)和C57BL/6小鼠(H2b)脾细胞 行混合淋巴细胞培养,流式细胞术观察标记细胞的增殖情况。Balb/c裸小鼠(H2d)构建移植物抗宿主(GVHR)、宿 主抗移植物(HVGR)模型;通过流式细胞术检测标记细胞在外周血及脾的增殖情况。 结果:荧光显微镜观察到 标记细胞。流式细胞术检测到标记细胞荧光强度出现倍减现象,表明细胞发生了增殖;无抗原刺激组荧光强度无 明显变化,抗原刺激后24～72h标记细胞停留在脾,第3天后增殖细胞进入外周血液。 结论:羧基荧光素琥珀酰 亚胺酯(CFSE)标记技术可应用于体内、体外实验,有助于对细胞增殖及定位进行检测,在移植免疫实验研究中具 有很高的应用价值。
- 陈必成昌盛杜敦峰唐莉张鑫袁劲周洁陈忠华
- 关键词：移植免疫流式细胞术
- 抗IL-2受体γ链抗体抑制T细胞表达survivin的研究被引量：1
- 2006年
- 目的 探讨体外封闭IL-27链抑制T细胞表达survivin的机制。方法 分离Balb／C、C57BL／6小鼠脾细胞进行双向混合淋巴细胞培养（MLR）及conA刺激试验。通过免疫细胞化学染色方法检测survivin表达及其规律。不同天数内加入抗γ公共链抗体，流式细胞术检测细胞凋亡（PEcy5-CD3，FTTE—Annexin-V）、细胞周期（PI）及CD25、survivin表达。结果 同种抗原及ConA刺激后脾细胞可检测到survivin、CD25表达。活化淋巴细胞表达survivin，加抗γ公共链抗体后，不能检测到survivin的表达，而CD3^＋ Annexin-V^＋细胞数增加，M期细胞数下降，凋亡细胞（前G1期）增加；但在MLR后第1～2天，抗γ公共链抗体加入并不能使凋亡细胞增加。结论 抗IL-2γ链抗体可诱导活化的T细胞凋亡，间接抑制活化的T细胞的survivin表达。
- 陈必成唐莉昌盛张鑫郭晖陈忠华
- 关键词：凋亡SURVIVINT细胞
- 探讨抗γ公共链单抗诱导移植免疫耐受的作用机制被引量：6
- 2005年
- 目的探讨抗γ公共链单抗在诱导移植免疫耐受中的作用机制。方法将实验动物分为2组,每组20只。实验组:在Balb/c裸小鼠(H-2d)体内用CFSE标记的Balb/c小鼠(H-2d)T细胞(3×107个)重建其免疫系统,同时给予经丝裂霉素C处理的供者C57BL/6小鼠(H-2b)脾细胞(5×106个)静脉输注,24h后实验组受鼠经腹腔注射抗γc单克隆抗体(4G3,3E12,TUGm2,各0.5mg)和抗白细胞介素2受体(IL-2R)β链单克隆抗体(TM-β1,0.5mg)混合液;对照组:以IgG2a2.0mg作为同型对照代替抗体腹腔注射,余处理与实验组相同。经上述处理后12h和48h后处死受鼠,取其脾细胞及外周血,利用流式细胞技术检测T细胞的增殖及凋亡。结果经抗体处理12h和48h后,实验组T细胞未发生明显增殖;而对照组两时间点均可观察到CFSE标记细胞荧光强度明显地减低,表明T细胞发生了分裂增殖。同时AnnexinV法可见,实验组标记有CD3-PE单抗的T细胞12h发生了明显的凋亡,但48h却几乎无明显的凋亡细胞;而对照组两时间点则均未检测到明显的细胞凋亡。两组间12h结果差异有统计学意义(P<0.01),但48h差异无统计学意义(P>0.05)。结论移植术前给予抗γ公共链单抗联合供者细胞特异性输注,通过有效抑制针对供者抗原发生效应的T细胞增殖,可进一步促使其发生凋亡而被有效清除,从而最终实现免疫耐受,且此种耐受具有抗原特异性。
- 昌盛沈世乾陈必成张鑫杜敦峰周洁陈忠华
- 关键词：免疫耐受丝裂霉素C
- 凋亡抑制蛋白survivin在活化T细胞中的表达及其意义被引量：3
- 2005年
- 目的: 探讨survivin在活化T细胞的表达及其意义.方法: 经丝裂原与同种抗原刺激激活T细胞, 免疫细胞化学染色后观察survivin和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.用流式细胞术检测CD3、 CD25、 Survivin的表达及细胞凋亡.给BALB/c裸鼠输注C57BL/6小鼠脾细胞后第4～7天, 观察肝脏内T细胞浸润和survivin的表达.结果: ConA刺激后培养的脾细胞可表达survivin(表达不局限于G2/M期).survivin+细胞为T细胞, T淋巴母细胞可同时表达CD25和survivin.survivin+细胞中仅部分细胞表达CD25.ConA刺激淋巴细胞后第6天, 凋亡细胞的百分率明显增加(22.90% vs 5.23% P<0.001).于BALB/c裸鼠输注C57BL/6小鼠的脾细胞后, 于第4～7天,在BALB/c裸鼠肝脏中可观察到T细胞浸润并表达Survivin.结论: T细胞激活后可表达survivin, 故可作为活化T细胞的标志.T细胞持续表达survivin, 需要在体内与抗原持续接触.
- 陈必成唐莉张鑫郭晖昌盛杜敦峰陈忠华
- 关键词：T细胞SURVIVINCD25
- 供者特异性抗原静脉输注联合抗γ链单克隆抗体诱导小鼠皮肤移植物免疫耐受
- 2005年
- 目的 探讨静脉输注供者特异性抗原联合抗白细胞介素2受体(IL 2R)γ链单克隆抗体诱导移植免疫耐受的可行性。方法 在C57BL/6小鼠建立H Y皮肤移植模型,术前7 d给予5×106个供者脾细胞静脉输注,并分别于术前6 d和4 d给予抗白细胞介素2受体γ链单克隆抗体(4G3、3E12及TUGm2各0.5 mg)和抗IL 2Rβ单克隆抗体(TM β1,0.5 mg)混合液2.0 mg腹腔注射,以单纯行H Y皮肤移植模型和静脉输注供者特异性抗原的H Y皮肤移植模型为对照,观察皮肤移植物的存活时间。结果 联合给予抗白细胞介素2受体γ链单克隆抗体和供者特异性抗原输注组的皮肤移植物存活时间均超过100 d,显著长于单纯H Y皮肤移植组的33.42 d(P<0.01)及仅输注供者特异性抗原H Y皮肤移植组的14.71 d(P<0.01)。结论 在H Y皮肤移植模型中,静脉输注供者特异性抗原联合抗白细胞介素2受体γ链单克隆抗体可以成功地诱导受者对皮肤移植物的免疫耐受。
- 昌盛沈世乾陈必成杜敦峰周洁张鑫陈忠华
- 关键词：供者特异性抗原静脉输注白细胞介素2受体
- 两种荧光染料—CFSE与碘化丙啶染色方法检测细胞杀伤能力被引量：4
- 2006年
- 陈必成夏鹏杨丽红蔡勇吴存造李澄棣杨亦荣郑少玲
- 关键词：荧光染料碘化丙啶CFSE细胞毒T细胞实验小鼠
