国家自然科学基金(30300307)
- 作品数：5 被引量：15H指数：2
- 相关作者：高天文李春英王刚田艳丽刘玲更多>>
- 相关机构：第四军医大学西京医院中国人民解放军海军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 从大容量随机噬菌体抗体库筛选人源性抗酪氨酸酶相关蛋白1抗体被引量：1
- 2005年
- 目的从大容量随机噬菌体抗体库中筛选人源性抗酪氨酸酶相关蛋白1(TRP1)单链抗体并进行鉴定及基因测序分析。方法以原核表达并纯化的TRP1为抗原,通过“吸附洗脱扩增”过程从大容量随机噬菌体抗体库中筛选特异性抗TRP1蛋白的单链抗体,分别通过ELISA和基因测序的方法对其抗原结合活性和序列进行分析鉴定。结果经过4轮筛选,获得18个能与TRP1蛋白结合的阳性克隆,其中3个克隆的噬菌体抗体能与TRP1特异性结合;基因测序分析表明,所获抗体分别属于不同的抗体克隆。结论利用噬菌体抗体库技术可以不经免疫过程制备出高特异性的人源性抗TRP1抗体。
- 李春英乔媛媛王刚陈宇萍高天文王琰
- 关键词：抗体单克隆
- 白癜风患者血清IgG及IgG1I、gG2亚类的检测与分析被引量：5
- 2006年
- 目的:检测白癜风患者血清中抗黑素细胞IgG及其亚类抗体,分析其与疾病活动期间的关系。方法:用活细胞ELISA法和WesternBlotting检测350例不同病期白癜风患者血清中抗黑素细胞IgG及IgG1、IgG2亚类抗体。结果:白癜风患者IgG1、IgG2阳性率明显高于正常人,其中尤以进展期患者IgG1血清水平增高最为显著。结论:白癜风患者体内广泛存在的抗黑素细胞膜抗原自身抗体主要为IgG1亚类抗体,与疾病活动度和严重程度有密切关系。
- 刘玲高天文
- 关键词：白癜风自身抗体IGG亚类
- 应用细胞内PCR技术构建及筛选白癜风噬菌体抗体库
- 2006年
- 目的克隆白癜风患者淋巴细胞中原始配对的自身抗体基因,构建噬菌体抗体库并筛选针对黑素细胞膜抗原的特异性抗体.方法细胞内PCR法扩增人免疫球蛋白轻链和重链可变区基因,Cre重组酶介导下完成单个细胞内的轻重链连接,获得反映体内原始配对信息的单链抗体可变区基因,构建噬菌体抗体库,筛选针对黑素细胞膜抗原的自身抗体.结果构建完成库容量约为3×l06的噬菌体抗体库,筛选得到1株针对黑素细胞膜抗原的自身抗体.结论利用细胞内PCR技术和噬菌体抗体库技术成功构建免疫文库,为进一步研究自身抗体在白癜风发生发展过程中的作用奠定了基础.
- 刘玲田艳丽李春英高天文
- 关键词：白癜风聚合酶链反应噬菌体抗体库自身抗体
- In-cellPCR技术扩增白癜风自身抗体基因被引量：7
- 2006年
- 目的从白癜风患者外周血B淋巴细胞中扩增获得原始亲本配对的抗体基因。方法以正常人的黑素细胞为抗原,用活细胞ELISA法筛选50例白癜风血清,选择其中7例抗黑素细胞膜抗体强阳性的患者外周血分离得到CD19+B淋巴细胞,以10%甲醛溶液固定,蛋白酶K溶液通透化处理,进行in-cellPCR。用特异性引物进行in-cellRT-PCR扩增人免疫球蛋白轻链和重链可变区基因,采用Cre/loxP系统在细胞内完成轻重链的连接,然后经巢式PCR扩增获得具有细胞内原始亲本配对特性的单链抗体基因。结果经in-cellPCR扩增,获得了与预期单链抗体大小一致的单一800bp产物。结论利用in-cellPCR技术可以扩增白癜风原始亲本配对的自身抗体基因。
- 田艳丽李春英王刚高天文卢涛李淼
- 关键词：白癜风聚合酶链反应自身抗体
- TRP-1反义核酸抑制恶性黑素瘤细胞增殖的体外及体内研究被引量：2
- 2004年
- 目的:观察TRP-1反义核酸在体内、外对恶性黑素瘤细胞增殖的抑制作用,探讨黑素瘤治疗的新途径。方法:构 建TRP-1反义核酸真核表达载体,将其转染恶性黑素瘤细胞,以测定的MTT结果绘制细胞生长曲线;进行黑素瘤细胞体外克 隆形成实验观察,计算各组细胞的克隆形成率;以TRP-1反义核酸转染的黑素瘤细胞及对照组细胞注射裸鼠,观察肿瘤大小 及增长速度。结果:从生长曲线可以看出,TRP-1反义核酸转染的黑素瘤细胞增殖速度明显低于对照细胞;体外克隆形成实验 结果显示:TRP-1反义核酸转染的黑素瘤细胞克隆形成率为52％,而对照组为68％(P<0.01);裸鼠成瘤试验表明,转染TRP- 1反义核酸的细胞成瘤性显著低于未转染细胞及转染载体对照细胞(P<0.01)。结论:TRP-1反义核酸在体内、外均能明显抑 制恶性黑素细胞的增殖,在恶性黑素瘤的治疗中有一定的应用前景。
- 李春英高天文齐显龙王刚刘玉峰
- 关键词：反义核酸黑素瘤增殖
