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分枝扩增法检测鼻咽癌患者外周血EB病毒基因被引量：3: 2004年; 目的 :应用分枝扩增法 (RAM)检测鼻咽癌患者外周血 EB病毒基因。方法 :利用人工合成的 EB病毒 EBER- 1靶基因序列 ,建立分枝扩增的方法。以 EB病毒阳性细胞株 Raji和 EB病毒阴性的人白血病细胞株 NB4作对照 ,检测鼻咽癌患者外周血中 EB病毒基因 ,并用 PCR方法作对比。结果 :RAM法能够检测样品中 1 0个分子的靶基因 ,32例鼻咽癌患者标本中 ,2 8例阳性 (87.5 % ) ,与 PCR法的检测结果相一致。结论 :RAM法敏感、特异。; 张福明李凡; 关键词：聚合酶链反应

网状分枝扩增技术检测产志贺样毒素大肠埃希菌被引量：4: 2004年; 目的通过检测产志贺毒素大肠埃希菌中的志贺样毒素,确定网状分枝扩增技术的灵敏度和特异性,从而进一步探讨该方法用于检测食品和临床标本中0157:H7和STEC的可行性。方法用网状分枝扩增技术检测合成的志贺样毒素2的基因和临床分离的菌株,确定该方法的灵敏度和特异性,与聚合酶链反应进行比较。结果网状分枝扩增技术最少能检测10个志贺样毒素DNA分子,与PCR灵敏度一样。E.coli0157:H7和志贺痢疾杆菌志贺样毒素阳性,而非致病性大肠埃希菌为阴性。用网状分枝扩增技术与PCR对分离的菌株进行检测,结果也一致。结论网状分枝扩增技术具有高度的灵敏度和特异性,操作简便,而且在等温条件下扩增核酸,因此可替代PCR检测食品和临床标本中的产志贺样毒素大肠埃希菌。; 赵春燕李凡; 关键词：产志贺样毒素大肠埃希菌核酸扩增技术聚合酶链反应

大肠埃希菌O157:H7嵌合荧光RAM检测分析被引量：1: 2006年; 目的建立大肠埃希菌O157:H7的嵌合荧光法(SYBR Green I)实时网状分枝扩增(RAM)检测技术。方法将产志贺样毒素大肠埃希菌O157:H7靶基因递比稀释确定SYBR Green I实时RAM的灵敏度,并进一步检测临床分离的菌株。结果SYBR Green I实时网状分枝扩增技术最低能检测10个产志贺样毒素大肠埃希菌O157:H7,检测信号出现的时间与靶基因的浓度成正比,临床分离3株产志贺样毒素大肠埃希菌O157为阳性,而非致病性大肠埃希菌为阴性。结论SYBR Green I实时RAM是一种快速、灵敏、准确、实时、环保的检测大肠埃希菌O157:H7的新核酸扩增技术。; 赵春燕李凡刘晓梅; 关键词：大肠埃希菌O157:H7 实时监测

食品标本处理方法对大肠埃希菌检出限影响被引量：2: 2006年; 目的研究快速、敏感、低成本的食品标本处理方法。方法在牛肉馅中接种不同浓度的大肠埃希菌O157:H7,经离心、过滤,去除PCR抑制剂,浓缩菌株,用煮沸法和酶/冻融法裂解菌株,制备模板DNA,通过PCR检测大肠埃希菌O157:H7志贺毒素基因以评价该处理方法的可行性。结果在未增菌条件下,PCR最低能检测到103CFU/g牛肉馅,增菌6h,最低能检测1 CFU/g牛肉馅,整个检测过程只需要12 h。结论所采用的标本处理方法是一种灵敏、省时、低成本的方法,能显著地提高PCR检测食品标本中的大肠埃希菌O157:H7的灵敏度。; 赵春燕易世红李凡; 关键词：聚合酶链反应标本处理

网状分枝扩增法检测EB病毒基因及临床应用研究被引量：2: 2006年; 目的应用网状分枝扩增法(RAM)检测NHL外周血EB病毒基因,探讨EB病毒感染与NHL的相关性。方法利用人工合成的EBER-1启动子基因,建立网状分枝扩增检测法,以EB病毒阳性细胞株Raji和EB病毒阴性的人白血病细胞株NB4作对照,检测了NHL患者外周血中EB病毒基因。结果RAM能够检出样品中10个分子的靶基因;120例非霍奇金淋巴瘤(NHL)标本中,76例阳性(63.33%),与PCR方法检出结果相一致。结论RAM技术敏感、特异、简便易行;NHL与EB病毒感染具有较高的相关性。; 张福明李凡张淑芹; 关键词：疱疹病毒4型聚合酶链反应

网状分枝扩增方法检测志贺毒素2基因被引量：1: 2004年; 目的　建立一种快速、灵敏检测志贺样毒素 2 (STX2 )的方法。方法　用网状分枝扩增技术 (RAM )和PCR检测合成的志贺样毒素 2基因和临床分离的菌株 ,确定该方法的灵敏度和特异性。结果　RAM最少能检测 10个志贺样毒素 2的DNA分子 ,与PCR具有同样灵敏度。用PCR和RAM检测临床标本和食品中分离的 33株大肠埃希菌 ,其中 2 6株stx2基因为阳性 ,2种方法检测结果一致。结论　RAM与PCR方法相同的灵敏度和特异性 ,但操作简便 ,并且是在等温条件下扩增核酸 ,成本较低 ,适合检测食品和临床标本中大肠埃希菌志贺样毒素 2。; 赵春燕李凡; 关键词：聚合酶链式反应

网状分枝扩增法检测非霍奇金淋巴瘤外周血中EB病毒基因的研究被引量：1: 2006年; 目的探讨网状分枝扩增法(RAM)检测非霍奇金淋巴瘤(NHL)外周血EB病毒基因在EB病毒感染与NHL发病的相关性研究中的意义。方法用人工合成EBER-1启动子基因,建立网状分枝扩增检测法,以EB病毒阳性细胞株Raji和EB病毒阴性的人白血病细胞株NB4作对照,检测120例NHL患者外周血中EB病毒基因。结果RAM最少能够检出样品中10拷贝/μl的EB病毒DNA,与多重聚合酶链反应(mPCR)的灵敏度一致;并从120例NHL患者中,检出76例阳性(63·3%),与mPCR方法的阳性检出符合率为100%。结论RAM法具有高度敏感度和特异性、操作简便,且可在等温条件下扩增核酸;同时证明NHL发病与EB病毒感染具有较高的相关性。; 张福明李凡; 关键词：非霍奇金淋巴瘤

网状分枝扩增技术快速检测大肠埃希菌O157:H7及其他产志贺样毒素大肠埃希菌被引量：10: 2006年; 目的:建立一种简便、快速、灵敏和特异的检测食品和临床标本中大肠埃希菌O157 : H7及其他产志贺样毒大肠埃希菌(STEC)的方法。方法:设计并合成了检测志贺毒素2(stx2)基因特异的环形探针和捕获探针,确定网状分枝扩增方法(RAM)的灵敏度;含有stx2基因的不同血清型的菌株包括O46 : H38、 O22:H8、O111:NM,用于RAM特异度的测定。用RAM检测所有分离的菌株,并进一步对瞬时RAM进行研究。结果:RAM最低能检测10个拷贝的stx2合成靶基因和临床分离的菌株,表明RAM与PCR具有一样的灵敏度。特异度的测定结果表明不同血清型的大肠埃希菌均为stx2阳性,而非致病性大肠埃希菌ATCC23716则为阴性。在32株菌株中,28株细菌含有stx2基因,其余则为阴性,与PCR检测结果100％一致。瞬时RAM结果也表明最低能检测10个细菌,检测信号的出现依赖于样品的浓度。结论:RAM的简便和等温扩增特点可替代PCR检测各种标本中大肠埃希菌O157:H7和STEC。; 赵春燕易世红李凡; 关键词：大肠杆菌O157

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国家自然科学基金(30271251)