四川省教育厅资助科研项目(05011)
- 作品数：12 被引量：35H指数：4
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- 转录活化子1反义寡核苷酸对肺纤维化大鼠肺组织中细胞因子和胶原表达的影响被引量：4
- 2009年
- 目的观察信号转导子与转录活化子1（STATI）反义寡核苷酸雾化吸入对博来霉素致肺纤维化大鼠肺组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原，纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1），转化生长因子-β1（TGF—β1）和羟脯氨酸表达的影响。方法将45只Wistar大鼠按随机数字表法分为生理盐水组、博来霉素组和寡核苷酸组，每组15只，分别在气管内灌注并雾化吸入生理盐水、博来霉素、STAT1反义寡核苷酸。分别于雾化后第7天、第14天和第28天每组各处死5只大鼠。肺组织HE染色和Masson染色观察肺泡炎和肺纤维化改变，免疫组织化学sP法测定肺组织中TGF—β1、PAI-1表达，逆转录PCR测定肺组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达，肺组织匀浆测定羟脯氨酸含量。样本均数间比较采用单因素方差分析和q检验。结果寡核苷酸组大鼠各时问点的肺泡炎和肺纤维化程度均较博来霉素组减轻。博来霉素组和寡核苷酸组大鼠肺组织中TGF—β1、PAI-1表达水平均明显高于生理盐水组，博来霉素组和寡核苷酸组大鼠雾化后第7天TGF—β1、PAI-1的积分吸光度值分别为182±12和169±12、128±11和113±13，明显高于生理盐水组的21±6和27±9，第28天时（68±7和87±7、54±8和57±8）仍高于生理盐水组（22±7和26±7）；雾化后第7天、第14天和第28天，寡核苷酸组大鼠I、Ⅲ型胶原mRNA表达水平分别为1．36±0．10、1．19±0．28、1．22±0．24和1．20±0．09、0．62±0．09、0．76±0．12，明显低于博来霉素组（3．29±0．28、2．04±0．25、1．91±0．30和1．63±0．15、1．58±0．13、1．12±0．09），寡核苷酸组大鼠肺组织中羟脯氨酸含量（mg／g）分别为3．02±0．13、3．24±0．31和3．60±0．16，明显低于博来霉素组的3．76±0．10、3．92±0．30和4．62±0．28。结论STAT1反义寡核苷酸雾化吸入能减轻博来霉素致肺纤维化大鼠肺泡炎和肺纤维化，其机制可能与抑制TGF—β1�
- 郭燕妮朱晨曾鸣王文军李晶范贤明
- 关键词：肺纤维化纤溶酶原激活物抑制物1
- STAT1反义寡核苷酸对肺纤维化大鼠肺组织TGF-β1和Smad4表达的影响
- 2010年
- 目的:观察信号转导子与转录活化子1(STAT1)反义寡核苷酸雾化吸入对博来霉素致肺纤维化大鼠肺组织TGF-β1和Smad4表达的影响。方法:将45只雌性Wistar大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组和干预组,每组15只,对照组大鼠气管内灌注生理盐水、模型组和干预组大鼠气管内灌注博来霉素。于气管内灌注药物后0、2、4、6天对照组和模型组大鼠给予雾化吸入生理盐水,而干预组大鼠则雾化吸入STAT1反义寡核苷酸/DOTAP复合物。分别于气管内灌注药物后第7天、第14天和第28天每组各处死5只大鼠。肺组织HE染色和Masson染色观察肺泡炎和肺纤维化改变,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)行细胞总分数测定、ELISA测定BALF中TGF-β1的浓度、免疫组织化学SP法测定肺组织中TGF-β1、Smad4表达。结果:(1)干预组大鼠各时间点的肺泡炎和肺纤维化程度均较模型组明显减轻。(2)干预组大鼠各时间点的细胞总数和中性粒细胞比例较模型组减少,巨噬细胞比例增加。(3)模型组大鼠BALF的TGF-1水平在第7d表达明显升高,14d、28d仍持续高于对照组。干预组大鼠各时间点BALF中TGF-β1含量均低于模型组。(4)模型组和干预组大鼠肺组织中TGF-β1、Smad4表达水平均明显高于对照组,模型组和干预组大鼠第7天TGF-β1、Smad4的表达值明显高于对照组,随后下降,第28天时仍高于对照组;干预组大鼠各时间点肺组织TGF-β1、Smad4表达水平均低于模型组。(5)干预组大鼠肺组织中羟脯氨酸含量明显低于模型组。(6)BALF中TGF-β1蛋白浓度、肺组织中TGF-β1蛋白表达、Smad4蛋白表达均与肺组织匀浆中羟脯氨酸含量呈正相关。结论:STAT1反义寡核苷酸雾化吸入能减轻博来霉素致肺纤维化大鼠肺泡炎和肺纤维化,其机制可能与抑制TGFβ-Smads信号转导通路中的TGF-β1和Smad4有关。
- 王文军郭燕妮范贤明陈媛媛湛晓勤
- 关键词：肺纤维化TGF-Β1SMAD4反义寡核苷酸
- STAT1反义寡核苷酸雾化吸入转染博莱霉素致肺纤维化大鼠模型的建立与鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的:探讨信号转导和转录活化因子1(STAT1)反义寡核苷酸(ASON)雾化吸入体内转染博莱霉素(BLM)致大鼠肺纤维化的可行性并给予鉴定。方法:取Wistar大鼠20只,气管内灌注BLM7天后,将大鼠随机分为生理盐水(NS)组、脂质体(liposome,LP)组、ASON组、5’端异硫氰酸荧光素(FITC)标记的STAT1-ASON(FITC-ASON)组各5只。FITC-ASON组大鼠于气管内灌注BLM后第7天,雾化吸入脂质体包埋全硫代磷酸修饰并5’端FITC标记的STAT1-ASON后6小时处死大鼠,通过支气管肺泡灌洗收集细胞,用荧光显微镜观察灌洗液细胞和肺组织内STAT1-ASON的分布。NS组、LP组、ASON组3组大鼠则于气管内灌注BLM后第7、9、11、13天分别雾化吸入生理盐水、脂质体、脂质体包埋的STAT1-ASON复合物,3组大鼠于第14天处死,通过支气管肺泡灌洗收集肺泡巨噬细胞(AM),用实时荧光定量聚合酶联反应(FQ-PCR)检测AM中STAT1、ICAM-1mRNA的表达;用Western-blot检测AM中STAT1、ICAM-1蛋白的表达;并检测大鼠血清肝功能指标丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)和肾功能指标尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)。结果:大鼠雾化吸入5’端FITC标记的STAT1-ASON后,其支气管肺泡灌洗液细胞和肺组织中可见诱发的黄绿色荧光且主要位于AM内;NS组AM中STAT1、ICAM-1mRNA和蛋白表达水平(1.003±0.116、1.008±0.114;0.66±0.09、0.72±0.10)与LP组(1.063±0.121、1.000±0.157;0.68±0.11、0.65±0.11)比较差异无统计学意义(P>0.05);ASON组(0.267±0.036、0.269±0.042;0.31±0.09、0.38±0.07)与NS组及LP组比较,AM中STAT1、ICAM-1mRNA和蛋白表达水平均显著下降(P<0.05);ASON组、NS组及LP组3组肝肾功能指标两两比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:脂质体包裹的STAT1-ASON雾化吸入能够到达AM和肺组织内,用于体内实验是安全的;STAT1-ASON体内转染后,能抑制AM中STAT1、ICAM-1mRNA蛋白的表达,说明STAT1-ASON雾化吸入体内转染致肺纤维化动物模型是可行的�
- 范贤明周玲王文军曾鸣朱晨徐萧洪湛晓勤
- 关键词：肺纤维化STAT1反义寡核苷酸雾化吸入
- 雾化吸人布地奈德对肺纤维化大鼠支气管肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子α及血小板衍生生长因子的影响被引量：4
- 2009年
- 目的探讨雾化吸入布地奈德对博莱霉素致肺纤维化大鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中肿瘤坏死因子α（TNF-α）及血小板衍生生长因子（PDGF）的影响。方法45只Wistar雌性大鼠随机分为生理盐水对照组（CG组）、肺纤维化模型组（MG组）、布地奈德干预组（BG组），每组15只。利用博莱霉素建立肺纤维化模型，24h后给予干预药物，分别于第7天、第14天、第28天处死动物，收集肺组织作切片行HE及Masson染色，观察其病理变化，判断肺组织肺泡炎及肺纤维化程度，测定肺组织羟脯氨酸含量，并测定BALF中TNF-α及PDGF的含量。结果BG组第7天、第14天、第28天肺组织羟脯氨酸含量低于MG组（P〈0．05）。BG组在早期（第7天、第14天）BALF中TNF—α及PDGF含量低于MG组（P〈0．05）。结论雾化吸人布地奈德对博莱霉素诱导的肺纤维化大鼠在早期具有较强的抗纤维化效应，机制可能为通过抑制细胞因子TNF-α及PDGF含量的表达，从而有效阻止肺纤维化的进展。
- 朱晨王鸿程曾鸣闫凌丽李晶范贤明
- 关键词：肺纤维化布地奈德羟脯氨酸肿瘤坏死因子Α血小板衍生生长因子
- STAT1 ASON对肺纤维化大鼠BALF细胞因子和肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响被引量：6
- 2009年
- 目的:观察信号转导子与转录活化子1(STAT1)反义寡核苷酸(ASON)雾化吸入对博莱霉素(BLM)致肺纤维化大鼠肺泡灌洗液(BALF)PDGF-BB(血小板衍生生长因子-BB)、TNF-α(肿瘤坏死因子-α)、TGF-β1(转化生长因子-β1)、IFN-γ(干扰素-γ)表达及肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响。方法:取45只健康雌性Wistar大鼠随机分成ASON组、BLM组和生理盐水(NS)组各15只,气管内分别灌注BLM(ASON组、BLM组)和NS(NS组)复制肺纤维化模型和空白对照,ASON组于第0、2、4、6天雾化吸入STAT1ASON,BLM组和NS组雾化吸入NS,各组分别于第7、14、28天均处死动物5只。观察肺泡炎和肺纤维化改变;收集BALF测定PDGF-BB、TNF-α、IFN-γ、TGF-β1的水平;测定肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达。结果:ASON组第7、14、28天肺泡炎和肺纤维化程度明显低于同时间点BLM组(P<0.05)。BLM组各时间点BALF中PDGF-BB、TNF-α、TGF-β1表达水平较NS组升高(P<0.05),ASON组较BLM组各时间点均降低(P<0.05);BLM组BALF中IFN-γ表达水平各时间点均低于NS组(P<0.05),但ASON组各时间点均较BLM组高(P<0.05)。ASON组和BLM组第7、14、28天Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达高于NS组(P<0.05);ASON组第7、14、28天Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达均较同时间点BLM组降低(P<0.05)。结论:STAT1ASON雾化吸入能够减轻BLM诱导的肺泡炎和肺纤维化程度,其机制可能与抑制BALF中TGF-β1、PDGF-BB、TNF-α的表达,抑制IFN-γ下降而减少肺组织胶原的沉积有关。
- 王文军曾鸣刘丹范贤明朱晨湛晓勤
- 关键词：反义寡核苷酸肺纤维化
- 雾化吸入布地奈德对肺纤维化大鼠肺组织MMP-2、TIMP-2表达的影响被引量：4
- 2008年
- 目的探讨布地奈德雾化吸入对博莱霉素(BLM)致肺纤维化大鼠肺组织基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)表达的影响。方法Wistar大鼠45只,随机分成博莱霉素模型组(BLM组)、生理盐水空白对照组(NS组)和布地奈德干预组(Bud组)各15只,BLM组和Bud组气管内灌注博莱霉素诱导肺纤维化,NS组在相同条件下灌注生理盐水。气管内灌注药物后,第0~6天Bud组给予布地奈德雾化吸入,其余组在相同条件下给予生理盐水雾化吸入。各组分别于第7、142、8天随机处死5只,收集肺组织作切片、行HE及Masson染色,判断肺组织肺泡炎及肺纤维化程度;行免疫组化染色,检测MMP-2和TIMP-2在肺组织的表达水平。结果与NS组相比,Bud组第7、14、28天肺组织的肺泡炎和肺纤维化程度明显加重(P<0.5);与BLM组相比,Bud组第7、14天肺组织的肺泡炎程度明显减轻(P<0.05),第7、14、28天肺纤维化程度明显减轻(P<0.05);与NS组相比,BLM组第7、14、28天MMP-2和TIMP-2表达明显增加(P<0.5);与BLM组相比,Bud组第7、142、8天MMP-2和TIMP-2表达明显降低(P<0.05)。结论布地奈德雾化吸入可减轻BLM致肺纤维化大鼠的肺泡炎和肺纤维化程度,其干预机制可能为降低肺组织内MMP-2及TIMP-2的表达,并在一定程度上调整MMP-2/TIMP2的比值。
- 张小波范贤明王文军湛晓琴曾鸣朱晨
- 关键词：布地奈德肺纤维化博莱霉素
- 布地奈德对肺纤维化大鼠的影响被引量：2
- 2011年
- 目的:探讨布地奈德(budesonide,BUD)对肺纤维化大鼠肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达以及支气管肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α、TGF-β1、PDGF-BB、IFN-γ含量的影响。方法:取健康雌性Wistar大鼠随机分成博莱霉素(BLM)组、生理盐水(NS)组和BUD组,每组15只。BUD组、BLM组气管内灌注BLM,NS组气管内灌注NS,继之0～6d每天雾化1次,BUD组雾化吸入BUD,BLM组和NS组雾化吸入NS,各组分别于第7、14、28d处死大鼠各5只。用HE、Masson染色观察肺泡炎症和纤维化改变;反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-PCR,RT-PCR)法测定肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达;酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法测定BALF中TNF-α、TGF-β1、PDGF-BB、IFN-γ含量。结果:BUD组第7、14d肺泡炎程度较BLM组减轻(P<0.05),BUD组第7、14、28d肺纤维化程度均较BLM组减轻(P<0.05);BUD组第7、14、28d肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达较BLM组明显降低(P<0.05)。与BLM组比较,BUD组第7、14、28d BALF中TNF-α、TGF-β1、PDGF-BB含量较BLM组明显降低,IFN-γ含量增高(P<0.05)。结论:BUD雾化吸入可减轻BLM致肺纤维化大鼠肺泡炎症,降低肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达及BALF中TNF-α、TGF-β1、PDGF-BB含量,可抑制BALF中IFN-γ含量下降,从而减轻纤维化程度。
- 陈菊屏范贤明湛晓勤王文军
- 关键词：布地奈德肺纤维化干扰素-Γ
- 雾化吸入布地奈德对博莱霉素致大鼠肺纤维化的干预作用被引量：2
- 2008年
- 目的:观察雾化吸入布地奈德对大鼠肺纤维化的干预作用并探讨其作用机制。方法:45只Wistar雌性大鼠随机分为生理盐水对照组、肺纤维化模型组、布地奈德干预组,每组15只。利用博菜霉素建立肺纤维化模型,24h后给予布地奈德干预,并分别于7、14、28天处死动物,观察其肺组织病理变化、肺系数、肺组织胶原含量及支气管肺泡灌洗液(BALF)转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达。结果:与模型组比较,布地奈德组的肺泡炎和肺纤维化程度明显减轻,肺组织胶原含量、BALF中TGF-β1表达水平均降低(P<0.05)。结论:雾化吸入布地奈德能够抑制致肺纤维化因素导致的肺部正常组织结构的破坏及肺组织胶原的沉积,从而有效阻止肺纤维化的进展。
- 朱晨曾鸣闫凌丽李晶范贤明
- 关键词：肺纤维化布地奈德转化生长因子-Β1
- 不同时间点雾化吸入STAT1反义寡核苷酸对肺纤维化大鼠肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响被引量：1
- 2011年
- 目的:探讨雾化吸入信号转导子与转录活化子1(STAT1)反义寡核苷酸(ASON)干预肺纤维化大鼠的最佳时机。方法:清洁级健康雌性Wistar大鼠25只,随机分为生理盐水(NS)组、博来霉素(BLM)组和ASON 0 d组、ASON 7 d组、ASON14d组各5只。BLM组、ASON 0 d组、ASON 7 d组和ASON 14 d组大鼠气管内灌注BLM,NS组大鼠气管内灌注NS。大鼠气管内灌注BLM或NS后第0、2、4、6 d,NS组和BLM组大鼠雾化吸入NS,ASON 0 d组大鼠雾化吸入STAT1 ASON,ASON 7天组大鼠于气管内灌注BLM后第7、9、11、13d雾化吸入STAT1 ASON,ASON 14 d组于灌注BLM后第14、16、18、20d雾化吸入STAT1 ASON,各组均于气管内灌注BLM或NS后28d处死大鼠。左肺组织HE染色观察肺泡炎程度,Masson染色观察肺纤维化程度,免疫组织化学SP法测定肺组织中PAI-1、TGF-β1的表达。右肺测定肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达及羟脯氨酸含量。结果:①STAT1 ASON雾化吸入后,ASON 0 d组与BLM组、ASON 7 d组、ASON 14d组比较,肺泡炎和肺纤维化程度均明显减轻(P<0.05)。②ASON 0d组与BLM组比较,肺组织转移生长因子β1(TGF-β1)表达减少(P<0.05)。ASON 14d组与ASON 0d组比较,肺组织TGF-β1表达增多(P<0.05)。③与BLM组比较,ASON 0d组和ASON 7d组肺组织PAI-1表达降低(P<0.05);与ASON 0d组和ASON 7d组比较,ASON 14d组肺组织PAI-1表达增加(P<0.05)。④与BLM组比较,ASON 0d组肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达水平降低,ASON 7d组肺组织Ⅲ型胶原mRNA表达水平降低(P<0.05);与ASON 0d比较,A-SON 7d组和ASON 14d组肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达水平增高(P<0.05)。⑤与BLM组比较,ASON 0d组、ASON 7d组羟脯氨酸含量均减少(P<0.05);与ASON 0d组比较,ASON 7d组和ASON 14d组羟脯氨酸含量增高(P<0.05);与ASON 7d组比较,ASON 14d组羟脯氨酸含量增高(P<0.05)。结论:不同时间点雾化吸入STAT1 ASON对肺纤维化的干预作用是不同的,0d、7d可以减轻肺纤维化,其中0d雾化吸入是治疗的最佳时间。
- 郭燕妮黄建范贤明王文军熊昊
- 关键词：反义寡核苷酸肺纤维化
- 布地奈德对肺纤维化大鼠Smad4、PDGF-A及PAI-1表达的影响被引量：6
- 2012年
- 目的:探讨布地奈德(BUD)对肺纤维化大鼠肺组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、血小板衍化生长因子-A(PDGF-A)、抗生物皮肤生长因子同源物4母体(Smad4)、纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)表达的影响。方法:取健康雌性Wistar大鼠随机分成博莱霉素(BLM)组、生理盐水(NS)组和BUD组,每组15只。NS组气管内灌注NS,BUD组、BLM组气管内灌注BLM,继之0～6 d每天雾化1次,BLM组和NS组雾化吸入NS,BUD组雾化吸入BUD,分别于第7、14、28天处死3组大鼠各5只。用HE、Masson染色观察肺泡炎症和纤维化改变;免疫组化法测定肺组织中TGF-β1、PDGF-A、Smad4、PAI-1的表达。结果:第7、14天,BUD组肺泡炎程度较BLM组减轻(P<0.05);第7、14、28天,BUD组肺纤维化程度均较BLM组减轻(P<0.05)。第7、14、28天,BUD组肺组织中TGF-β1、PDGF-A、Smad4、PAI-1表达较BLM组明显降低(P<0.05)。结论:BUD雾化吸入可降低肺纤维化大鼠肺组织TGF-β1、PDGF-A、Smad4、PAI-1的表达,同时亦可减轻其肺泡炎及肺纤维化程度。
- 陈菊屏范贤明湛晓勤王文军
- 关键词：布地奈德肺纤维化纤溶酶原激活物抑制物-1
