公共文化服务平台

共 2 条记录，以下是 1-2

全选清除导出

排序方式：

人微管不稳定蛋白基因真核表达载体的构建与表达及对食管癌细胞的作用被引量：2: 2008年; 目的构建人微管不稳定蛋白基因（stathmin）真核表达载体，研究其对食管癌细胞EC9706的作用。方法采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）扩增stathmineDNA，克隆至pMD18-T载体并酶切鉴定后，亚克隆至pEGFP—C2真核表达载体。将测序鉴定正确的重组载体和空载体经脂质体转染EC9706细胞，G418筛选获得稳定转染的细胞株。通过荧光显微镜观察转染细胞荧光蛋白的表达，采用Western blot检测转染细胞中增强型荧光蛋白（EGFP）和stathmin融合蛋白的表达。选取稳定转染的细胞株，采用细胞计数法绘制细胞生长曲线，采用流式细胞仪分析细胞的增殖状态，平板克隆形成实验、裸鼠移植瘤实验分析转染细胞成瘤性。结果RT—PCR扩增获得450bp的eDNA编码序列；克隆至pMD18-T载体，经酶切鉴定后获反向插入质粒；亚克隆至pEGFP—C2载体后，经酶切与测序鉴定，重组载体pEGFP—stathmin构建成功。重组载体和空载体转染EC9706细胞，G418筛选获得稳定转染的细胞株。通过荧光显微镜观察到，转染细胞中呈现绿色荧光；经Western blot证实，重组载体表达46000的融合蛋白。与空载体转染细胞相比，转染重组载体的EC9706细胞形态变大，增殖速度减慢，细胞分裂阻滞于G2／M期，细胞克隆形成数减少，裸鼠体内成瘤性降低（P〈0．05）。结论构建的真核表达载体pEGFP—stathmin在食管癌EC9706细胞中能够稳定表达，并抑制肿瘤细胞的增殖和成瘤性。; 王峰王留兴王瑞林樊青霞赵培荣; 关键词：真核表达载体 EC9706细胞

特异性沉默Eca109细胞系stathmin基因siRNA表达载体的构建被引量：1: 2007年; 目的构建并筛选特异性沉默stathmin基因的pSUPER-S逆转录病毒载体以及稳定表达的细胞克隆。方法用DNA重组技术,将64nt能转录产生靶向stathmin小发夹RNA(shRNA)的寡核苷酸序列,定向克隆入逆转录病毒载体pSUPER-EGFP,应用脂质体将重组逆转录病毒载体pSUPER-S转染细胞系Eca109,G418筛选建立稳定产生逆转录病毒的细胞克隆,RT-PCR检测转染细胞stathminmR-NA的表达。结果重组逆转录病毒载体经EcoRⅠ、HindⅢ双酶切,可见4692nt和285nt条带;测序结果表明插入序列正确;重组载体转染Eca109细胞,可表达绿色荧光蛋白(EGFP),经G418筛选得到抗性细胞克隆,转染细胞stathmin mRNA的表达较对照组明显减弱。结论特异性沉默stathmin基因的pSUPER-S逆转录病毒载体以及稳定表达的细胞系构建和筛选成功。; 王峰王留兴王瑞林樊青霞赵培荣; 关键词：小干扰RNA STATHMIN基因 ECA109细胞

全选清除导出

共1页<1>

河南省医学科技创新人才工程项目(2003013)

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

河南省医学科技创新人才工程项目(2003013)

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈