国家自然科学基金(30440024)
- 作品数：7 被引量：11H指数：2
- 相关作者：龚建平陶德定李小兰胡俊波何小军更多>>
- 相关机构：华中科技大学湖北省新华医院钟祥市人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
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- 体外Fas介导肿瘤细胞凋亡过程中cyclins/CDKs的变化规律及调节机制被引量：1
- 2010年
- 目的:探讨Fas介导的细胞周期特异性细胞凋亡发生过程中,细胞周期蛋白(cyclins)和细胞周期依赖性蛋白激酶(cyclin-dependent kinases,CDKs)的变化规律,及其可能的调节机制。方法:以急性淋巴细胞白血病Molt-4细胞株为靶细胞,建立Fas介导的细胞周期特异性凋亡模型;采用cyclin/DNA双参数流式细胞术和Western印迹法检测cyclins的表达规律;应用Western印迹法检测CDK1的Thr-161、Tyr-15位点和CDK2的Thr-160位点磷酸化水平的变化。结果:重组人Fas配体(re-combinant human Fas ligand,rhFasL)诱导Molt-4细胞的凋亡定位在G1期。在发生细胞凋亡效应前,cyclin D3水平明显升高,而cyclin E水平和CDK2的Thr-160位点磷酸化水平均明显下降;发生凋亡效应后,cyclin D3水平明显下降,而cyclin E水平升高,CDK2的Thr-160位点磷酸化水平则明显下降,CDK1的Thr-161、Tyr-15位点磷酸化水平稍有下降。Cyclin A和Cyclin B1水平在诱导细胞凋亡过程中无明显变化。Roscovitine在特定浓度(5μmol/L)下可下调CDK2 Thr-160位点和CDK1 Thr-161位点的磷酸化水平,与rhFasL共同作用后细胞凋亡的发生率明显升高。结论:Fas介导的细胞凋亡具有细胞周期特异性,并始动于晚G1期,是G1期cyclin E/CDK2活性下降以及晚G1期检测点监督的结果;cyclin D3/CDK复合体可能是决定细胞凋亡能否发生的关键。
- 何小军全晓明沈阳陶德定龚建平
- 关键词：体外介导肿瘤细胞凋亡过程CYCLINS细胞周期依赖性蛋白激酶
- 三参数流式细胞术分析紫外线诱导的MOLT-4细胞旁观者效应
- 2009年
- 目的应用三参数流式细胞术探讨紫外线（UV）诱导的MOLT4细胞的旁观者效应（BSE）。方法以人类T细胞白血病细胞株MOLT-4为对象，以紫外线为诱导剂。将经UV照射的MOLT4细胞与DiD荧光阳性的MOLT-4细胞联合培养作为试验组，未经任何打击的DiD阳性细胞为对照组。用FITC—AnnexinV／PI法检测细胞凋亡率，用激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）观察其荧光及形态学改变，以检测其旁观者效应。结果实验组中旁观者细胞凋亡及坏死比例在0、2、4、8、12、18、24h分别为6．84％、8．09％、9．88％、13．50％、22．50％、30．99％、37．93％。而对照组为4．28％、4．93％、5．22％、5．39％、6．54％、6．77％、7．14％。试验组旁观者细胞的凋亡及坏死比例随着时间的延长而逐步增高。LSCM观察可见部分旁观者细胞出现磷脂酰丝氨酸（PS）翻转、核边集、核浓集、核碎裂等形态学改变。结论在MOLT-4细胞株，用非离子射线——UV诱导的凋亡细胞对联合培养的旁观者细胞具有旁观者效应。
- 黄丹王尊张鹏陶德定胡俊波龚建平
- 关键词：旁观者效应流式细胞术脱噬作用紫外线
- 紫外线诱导的Molt-4细胞旁观者效应的研究被引量：1
- 2008年
- 目的 探讨紫外线诱导的凋亡细胞是否具有旁观者效应。方法 将Molt=4细胞分为阴性对照组、DID对照组、空白对照组和细胞密度分别为2×10^5／ml和8×10^5／ml的两个实验组。每个实验组细胞被平分为两部分：一部分作为效应细胞，被标记示踪剂DID染料并予以UV照射40s；另一部分作为旁观者细胞，不经任何特殊处理。细胞联合培养共24h，每4h收获1次。运用Annexin V—FITC／PI法检测旁观者细胞的细胞凋亡率，激光共聚焦显微镜检测旁观者细胞的形态学变化。结果 阴性对照组、DID对照组和空白对照组在0、4、8、12、16、20和24h各个时间点细胞凋亡率均小于5％。2×10^5／ml实验组旁观者细胞凋亡率在0～24h分别为3．47％、4．58％、7．32％、10．41％、14．82％、19．37％和25．66％。8×10^5／ml实验组旁观者细胞凋亡率在相应时间点分别为3．76％、5．77％、10．17％、14．71％、18．92％、32．28％和38．90％。与对照组相比，实验组旁观者细胞凋亡率随时间的延长而明显升高，且旁观者细胞凋亡率随细胞密度增高而增加。对旁观者细胞进行激光共聚焦显微镜检测，发现一些经典的凋亡和坏死表现，如细胞染色体浓集、磷脂酰丝氨酸翻转、凋亡小体形成、细胞崩解等。结论 经紫外线照射的Molt-4细胞对旁观者细胞具有旁观者效应，且该效应与细胞密度相关。
- 黄丹杨长永陶德定冷彦胡俊波龚建平
- 关键词：旁观者效应紫外线细胞凋亡流式细胞术
- 人重组Fas配体体外诱导细胞周期特异性凋亡模型的建立被引量：3
- 2007年
- 目的运用人重组Fas配体(rhFasL),体外诱导稳定而又典型的Fas介导的细胞周期特异性凋亡模型,为针对其细胞凋亡过程中的细胞周期机制研究、肿瘤的生物学治疗和自身免疫性疾病的防治等提供科学的研究平台。方法以白血病细胞系(Molt-4和Jurkat细胞系)和进入细胞周期的外周血淋巴细胞为载体,用人重组Fas配体诱导细胞6～36h后,用亚G1峰法、传统的AnnexinⅤ/PI和改良后的API法进行标记并用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果改良后的API法显示人重组Fas配体诱导的细胞凋亡具有细胞周期特异性及始动位点;传统的AnnexinⅤ/PI显示在将细胞凋亡控制在10%～20%并以早期细胞凋亡为主时诱导的模型最典型;亚G1峰法只能检测晚期细胞凋亡和进行DNA直方图分析。结论人重组Fas配体体外诱导的细胞凋亡具有细胞周期特异性并始动于G1期,联合应用传统的Annex-in-Ⅴ/PI及改良后的API法能为建立稳定而又典型的体外Fas介导的细胞周期特异性凋亡模型提供技术支撑。
- 何小军肖田王尊葛军娜黄丹徐惠婷李小兰肖徽陶德定龚建平
- 关键词：细胞周期细胞凋亡流式细胞术
- Roscovitine和Mimosine在Fas介导白血病细胞凋亡中的作用及其可能机制被引量：2
- 2008年
- 目的:探讨细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinases,CDKs)抑制剂roscovitine和DNA合成阻滞剂含羞草碱(mimosine)在Fas介导的白血病细胞凋亡过程中的作用及其可能的机制。方法:以急性成淋巴细胞白血病细胞Molt-4和急性T细胞白血病细胞Jurkat为靶细胞,用rhFasL、Roscovitine、Mimosine分别单独作用Molt-4细胞18h(Jurkat细胞8h)、24h、24h,或rhFasL分别与后两者联合作用靶细胞,用流式细胞术检测cyclins的表达和细胞凋亡率,Western blotting法检测CDK2和CDK1的磷酸化水平。结果:Fas介导的细胞凋亡定位于G1期,Roscovitine和Mimosine作用后均可使Fas介导的细胞凋亡率明显增加(P<0.05)。Roscovitine作用后G1期的cyclinD3和cyclinE表达升高,靶细胞被阻滞在G1期的比例明显升高,并下调CDK2Thr-160位点的磷酸化水平;Roscovitine和rhFasL共同作用后,CDK2Thr-160位苏氨酸磷酸化水平进一步减弱。Mimosine作用后cyclinD3的表达下降和CDK2Thr-160位点磷酸化水平明显下降,靶细胞被完全阻滞在G1期。Mi-mosine和rhFasL共同作用后cyclinD3、E、A和B1均有所下降,CDK2Thr-160位苏氨酸和CDK1Thr-161位苏氨酸的磷酸化水平明显减弱。结论:Roscovitine和Mimosine均有协同rhFasL促进白血病细胞凋亡的作用,其机制与该两制剂阻滞细胞于G1期、抑制CKD2活性以及影响细胞周期蛋白表达有关。
- 何小军龚建平沈阳李培陶德定李小兰肖徽
- 关键词：ROSCOVITINE白血病细胞细胞凋亡周期蛋白周期蛋白依赖性激酶
- 外周血淋巴细胞凋亡依赖于细胞周期运行被引量：3
- 2008年
- 目的以培养的人类正常外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocytes,PBLs)为模型,模拟细胞周期运行的不同状态,研究细胞凋亡与细胞周期运行的关系。方法将PHA及咖啡因处理前后的PBLs,分别用喜树碱(CPT)、X-射线、抗Fas抗体和肿瘤坏死因子TNF-α诱导,流式细胞术方法对细胞凋亡进行定量检测。结果PBLs经PHA刺激后进入细胞周期并发生凋亡,在凋亡因子打击作用下凋亡明显增加,用咖啡因废除细胞周期检测点后对凋亡打击敏感性降低。未经PHA刺激的PBLs对凋亡打击无应答。结论细胞进入细胞周期总是伴随细胞凋亡的发生,细胞不进入周期,则不会发生凋亡,细胞周期不停止,也不会凋亡。细胞周期检测点是联结细胞周期和细胞凋亡的重要位点。
- 陶德定冯永东吴剑宏李小兰胡俊波龚建平
- 关键词：细胞周期细胞凋亡
- 细胞凋亡与细胞增殖协同作用的研究被引量：1
- 2009年
- 目的:通过研究细胞周期运行过程中的凋亡动力学变化情况,揭示细胞凋亡与细胞周期的协同作用。方法:将培养的人类白血病细胞株MOLT-4和用植物凝血素(PHA)及咖啡因处理的正常人外周血淋巴细胞(PBLs),分别用喜树碱(CPT)、三氧化二砷、X射线、紫外线(UV)、抗Fas抗体和肿瘤坏死因子TNF-α进行诱导,利用改良Annexin V/碘化丙锭法检测细胞凋亡。结果:培养的对数生长期MOLT-4细胞对不同的内、外源凋亡因子具有较高的敏感性,不同凋亡因子诱导的凋亡有细胞周期特异性(X射线和UV在G1期,CPT在S期,砷剂在G1/S期,TNF-α或抗Fas抗体在G1/S期),PBLs不存在这种打击依赖性的差异。未经PHA刺激的PBLs对凋亡打击无应答,PBLs经PHA刺激后进入凋亡,在外界打击作用下凋亡明显增加,在用咖啡因废除细胞周期检测点后对打击敏感性降低。拥挤或饥饿的PBLs同样对凋亡诱导无应答。结论:大多数细胞凋亡具有周期特异性,细胞周期改变可导致凋亡模式和时相的改变。细胞凋亡与增殖的协同作用是细胞周期和凋亡信号整合的重要机制。
- 彭波陶德定冯永东吴剑宏李小兰胡俊波龚建平
- 关键词：细胞周期细胞凋亡
