湖南省自然科学基金(06jj2009)
- 作品数：7 被引量：28H指数：3
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- 新型蛋白酶抑制剂基因hwtx-11在大肠杆菌中的克隆表达及杀虫功能研究被引量：2
- 2007年
- 将化学合成的蜘蛛毒素蛋白酶抑制剂基因hwtx-11克隆至载体pGEX4T-1上,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达.重组菌株在IPTG诱导下,经SDS-PAGE和Western blot分析表明,表达的GST-HWTX-11融合蛋白的相对分子量约为33 kD.对重组菌株诱导表达后的产物进行生物活性测定,GST-HWTX-11融合蛋白对甜菜夜蛾(Spodoptera exiguaHubner)和棉铃虫(Helicoverpa armigera)在3d时的LC50分别为86.6μg/mL、119.4μg/mL;其与Cry1Ac对甜菜夜蛾和棉铃虫幼虫毒力也有明显的协同作用.
- 夏立秋曾智贺小红付祖姣单世平丁学知孙运军李文萍王海龙罗玉双
- 关键词：WESTERNBLOT生物活性测定
- 定点突变技术研究苏云金杆菌Cry1类晶体蛋白结构与功能的进展被引量：1
- 2007年
- 近年来利用定点突变技术研究苏云金杆菌(Bacillus thuringiesis,Bt)杀虫晶体蛋白(Insecticidal crystal proteins,ICP)作用机制已取得良好进展.杀虫晶体蛋白不同结构域上氨基酸残基的突变将影响其稳定性,与受体的结合,不可逆的昆虫中肠膜插入及离子通道活性的强弱等.突变研究表明,结构域Ⅰ参与不可逆结合及插入昆虫中肠膜过程;结构域Ⅱ参与受体结合,包括初始结合与不可逆结合;结构域Ⅲ在杀虫特异性和维持三维结构的稳定性方面起重要作用,同时,可能参与离子通道的形成,受体结合和插入昆虫中肠膜过程.利用各种定点突变技术对各位点进行突变可以研究单一位点的功能,到目前为止,已有很多关于这方面的研究,并且筛选到了毒力提高的工程菌株.
- 张春艳胡胜标单世平夏立秋
- 关键词：苏云金杆菌杀虫晶体蛋白定点突变
- 苏云金芽孢杆菌伴胞晶体蛋白提取方法比较研究被引量：3
- 2007年
- 采用液体双相分层法和等电点沉淀法提取苏云金芽孢杆菌伴胞晶体蛋白．原子力显微镜观测，发现液体双相分层提取的晶体蛋白具有完整典型的晶体结构；等电点法提取的得率高，不能检测到完整的晶体结构．聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，等电点法提取的蛋白质含量是液体双相法提取的蛋白含量的1～2倍．将2种方法提取的晶体蛋白对初孵棉铃虫幼虫生物测定均表现杀虫生物活性，经统计分析，液体双相法提取的蛋白质生测毒力比等电点法的高1．5～3倍．
- 罗朝辉夏立秋丁学知王海龙曾智
- 关键词：苏云金芽孢杆菌等电点原子力显微镜聚丙烯酰胺凝胶电泳
- 高效液相色谱法测定刺糖多胞菌发酵液多杀菌素含量被引量：6
- 2008年
- 为了建立刺糖多胞菌（Saccharopolyspora spinosa）发酵液中多杀菌素不同组分的分离与定量分析的高效液相色谱检测方法.以AQ12S05-1546WT（150×4.6 mmL.D.S-5μm,12 nm）为分析柱,以甲醇-乙腈-2%醋酸铵溶液（45∶45∶10,v/v/v）为流动相,流速1.5 mL/min,检测波长250 nm.结果表明多杀菌素在25-1000 mg/L范围内线性关系良好,本方法标准偏差为1.486 9,变异系数为0.79%,相关系数为0.9992,平均回收率为99.58%.多杀菌素化合物A,B,C,D,E,F的保留时间分别为7.01,3.59,3.21,8.33,5.72,4.81 min.本方法能准确测定刺糖多胞菌发酵液中多杀菌素含量,有效分离多杀菌素不同组分.
- 易勇夏立秋丁学知杨尉王海龙罗玉双
- 关键词：刺糖多孢菌高效液相色谱法多杀菌素
- 苏云金杆菌4.0718菌株InhA的鉴定和不同生长时期的表达分析
- 2008年
- 免疫抑制因子A(Immune Inhibitor A,InhA)是苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)分泌的一种锌金属蛋白酶,具有水解昆虫抗菌肽的活性.为了研究InhA在Bt4.0718菌株中的重要功能,利用SDS-PAGE分离了Bt4.0718菌株营养生长中期、芽胞早期和芽胞晚期的细胞总蛋白质,通过MALDI-TOF/TOFMS分析以及数据库搜索,鉴定到了相对分子质量为86.5kD、pI为5.37的InhA蛋白质.然后采用双向电泳(2-DE)技术检测该蛋白质在不同时期表达量的差异,发现分离和鉴定到的InhA及相对分子质量为75kD、pI为5.13的InhA precursor蛋白质在营养生长中期的表达量比较高,说明InhA在营养生长中期前己开始形成,直到芽胞早期达最大表达量,但芽胞晚期的图谱分析和质谱鉴定均未发现InhA.InhA在营养期的高效表达说明:Bt进入昆虫体内后,InhA在Bt细胞生长繁殖初期表达,并抑制昆虫体内的抗菌肽对Bt细胞的裂解作用,从而有助于Bt在昆虫宿主中的生存,为芽胞期晶体和芽胞的形成以及菌株毒力的发挥奠定了基础.
- 李小辉夏立秋袁灿丁学知尹佳
- 关键词：苏云金芽胞杆菌INHA双向电泳
- 营养因子对苏云金芽胞杆菌4.0718产杀虫蛋白Cry1和Cry2的影响
- 2008年
- 为了提高杀虫蛋白Cry1和Cry2产量,首先采用Plackett-Burman设计筛选出发酵培养基中影响苏云金芽胞杆菌4.0718表达毒蛋白Cry1的显著性因子为黄豆饼粉和MnSO4?H2O,Cry2的产量在该配方中无显著性影响因子。然后利用最速上升实验逼近Cry1最大产出区域,找到后续试验中心点。最后通过响应面优化得到黄豆饼粉和MnSO4?H2O的最佳浓度为11.5g/L和0.02g/L,使Cry1和Cry2产量分别达到0.32mg/mL和0.11mg/mL,比原优选配方产量提高了两倍多。该优化配方发酵液对棉铃虫的半致死浓度(LC50)为1.09μL/mL,杀虫活性比原优化配方显著提高。
- 刘飞夏立秋丁学知易勇莫湘涛魏薇
- 关键词：苏云金芽胞杆菌CRY1CRY2响应面优化
- 苏云金芽孢杆菌高效价杀虫剂的研究进展被引量：16
- 2008年
- 苏云金芽孢杆菌制剂是目前应用广泛而有效的一种微生物杀虫剂。本文从菌种分离筛选、构建遗传工程菌、突变筛选及定向进化等方面介绍了获得苏云芽孢金杆菌高效价杀虫的几种研究策略,并对各种策略的进展及应用前景进行了简要综述。
- 刘石泉单世平夏立秋
- 关键词：定向进化
