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安徽省自然科学基金(11040606M170)

作品数：17 被引量：16H指数：3
相关作者：范礼斌刘晓颖耿慧武潘林鑫李春雨更多>>
相关机构：安徽医科大学更多>>
发文基金：安徽省自然科学基金安徽省高校省级自然科学研究项目国家自然科学基金更多>>
相关领域：医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 17篇中文期刊文章

领域

  • 17篇医药卫生
  • 3篇生物学

主题

  • 13篇细胞
  • 10篇细胞定位
  • 8篇免疫
  • 8篇基因
  • 7篇荧光
  • 7篇免疫荧光
  • 6篇蛋白
  • 6篇转染
  • 6篇基因表达
  • 4篇哺乳动物
  • 3篇蛋白表达
  • 3篇细胞株
  • 2篇真核
  • 2篇突变体
  • 2篇周期
  • 2篇细胞周期
  • 2篇RACK1
  • 2篇BL21
  • 2篇哺乳动物细胞
  • 1篇蛋白2

机构

  • 17篇安徽医科大学

作者

  • 14篇范礼斌
  • 13篇刘晓颖
  • 8篇耿慧武
  • 8篇潘林鑫
  • 5篇李春雨
  • 4篇李克娟
  • 4篇乔正
  • 3篇赵健
  • 3篇刘君
  • 2篇龚芮
  • 2篇张姗靖
  • 2篇李新颖
  • 2篇顾彧
  • 2篇陈应炉
  • 2篇徐南
  • 1篇邓松华
  • 1篇杨军
  • 1篇王蓓华
  • 1篇李婧瑶
  • 1篇姜天鹏

传媒

  • 17篇安徽医科大学...

年份

  • 3篇2022
  • 6篇2014
  • 6篇2013
  • 2篇2012
共 17 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
人通用转录因子GTFIIF2表达与定位
2014年
目的构建不同标签的人通用转录因子IIF多肽2(GTFIIF2)表达载体,观察其细胞内的表达和定位。方法设计GTFIIF2的引物,以全长cDNA序列为模板,利用聚合酶链式反应技术扩增GTFIIF2全长序列,构建pcDNA3.1-FLAG-GTFIIF2和pCDGFP-GTFIIF2质粒,利用Western blot法和免疫荧光法检测其在细胞表达与定位;构建GST-GTFIIF2质粒,转化到BL21菌株,用IPTG诱导剂诱导融合蛋白表达,用SDS-PAGE分析诱导表达情况。结果免疫荧光法检测GTFIIF2蛋白集中分布在COS7细胞核中,在细胞质没有分布;pcDNA3.1-FLAG-GTFIIF2和pCDGFP-GTFIIF2质粒能够在HEK293T细胞中有效表达;GST-GTFIIF2在BL21菌株中很好的诱导表达。结论 GTFIIF2在COS7细胞、HEK293T细胞和BL21感受态细胞中能有效表达,为更好地了解GTFIIF2蛋白在细胞内的功能提供一定的研究基础。
赵健耿慧武乔正李春雨李克娟刘晓颖范礼斌
关键词：基因表达蛋白定位BL21
人MRG15在哺乳动物细胞中表达与定位的初步研究
2013年
目的研究细胞周期调控蛋白(MRG15)在哺乳动物细胞中的表达与定位。方法以含人MRG15全长cDNA序列的质粒为模板,PCR扩增,构建MRG15真核表达载体,分别利用Western blot法和免疫荧光法检测其在哺乳动物细胞株中的表达与定位。结果 Western blot法检测结果表明MRG15在哺乳动物细胞中能有效地表达,免疫荧光法结果显示MRG15主要分布在细胞核。结论 MRG15蛋白主要在细胞核中表达,为进一步了解MRG15的功能奠定了一定基础。
姜天鹏潘林鑫赵健乔正李春雨张珊静李克娟范礼斌
关键词：蛋白表达免疫荧光
人MT2A基因在哺乳动物细胞株中的定位与表达被引量：2
2013年
目的用基因克隆方法构建带FLAG-tag的人金属硫蛋白2A(MT2A)真核表达载体,用其转染HEK 293T,COS-7细胞观察MT2A在增殖细胞内的表达和定位。方法设计带FLAG-tag的引物,以人MT2A全长cDNA序列的质粒为模板,PCR法扩增MT2A全长序列,然后插入pCDNA 3.1中构建pCDNA 3.1-MT2A-FLAG质粒;将构建的质粒转染至HEK293T细胞,提取总蛋白,进行Western blot检测;脂质体法转染至COS-7细胞,荧光显微镜下观察MT2A表达的蛋白在细胞内定位。结果正确构建了pCDNA 3.1-MT2A-FLAG质粒;其在HEK 293T细胞中能有效地表达;免疫荧光实验表明在COS-7细胞中,MT2A主要分布在细胞质内。结论该研究结果为了解MT2A在细胞内与其他蛋白质相互作用及功能提供了一定的基础。
李新颖潘林鑫耿慧武刘君刘晓颖范礼斌
关键词：金属硫蛋白细胞定位转染免疫印迹
p100^(Rb)和p80^(Rb)过表达对细胞周期和凋亡的影响
2022年
目的探究视网膜母细胞瘤蛋白(Rb)截短体p100^(Rb)和p80^(Rb)对细胞周期、凋亡的影响。方法构建pcDNA3.1-p100^(Rb)-FLAG、pcDNA3.1-p80^(Rb)-FLAG真核表达质粒;分别转染至U2OS细胞中,进行免疫荧光制片,检测p100^(Rb)和p80^(Rb)细胞定位情况;将pcDNA3.1-RB1-FLAG、p100^(Rb)和p80^(Rb)分别转染至HEK 293T细胞中,提取总蛋白进行免疫印迹,检测Rb、p100^(Rb)和p80^(Rb)的过表达;过表达Rb、p100^(Rb)和p80^(Rb)后利用流式细胞术检测细胞周期、凋亡。结果成功构建pcDNA3.1-p100^(Rb)-FLAG和pcDNA3.1-p80^(Rb)-FLAG真核表达质粒;在U2OS细胞中p100^(Rb)主要定位在细胞核,p80^(Rb)主要定位在细胞质;Rb、p100^(Rb)和p80^(Rb)在HEK 293T细胞中可过表达;过表达Rb、p80^(Rb)和p100^(Rb)后,与对照组比较,过表达的Rb实验组和p100^(Rb)实验组细胞周期G 1期百分比升高,各实验组细胞的凋亡率均显著降低(均P<0.05)。结论过表达p100^(Rb)可抑制HEK 293T细胞凋亡且阻滞细胞周期;过表达p80^(Rb)可抑制HEK 293T细胞凋亡但对细胞周期无影响。
李强李彩红周恒乔兵刘建军范礼斌
关键词：视网膜母细胞瘤蛋白过表达细胞周期凋亡
细胞内氯离子通道蛋白2的定位与表达被引量：1
2013年
目的研究细胞内氯离子通道蛋白2(CLIC2)在细胞中的定位与表达。方法以含人CLIC2全长cDNA序列的菌液为模板,PCR法构建CLIC2真核表达载体,利用免疫荧光和Western blot法检测其在细胞株中的定位与表达。结果细胞免疫荧光结果显示CLIC2在细胞质、细胞核中均有分布;Western blot的结果证明其在细胞中能有效地表达。结论 CLIC2蛋白在细胞质和细胞核中均大量分布,为进一步了解CLIC2的功能奠定了基础。
徐南潘林鑫耿慧武李春雨刘晓颖范礼斌
关键词：免疫荧光蛋白表达
人COX6B1在哺乳动物细胞株中转染表达与定位的初步研究被引量：4
2012年
目的构建带FLAG标签的人野生型细胞色素氧化酶亚基COX6B1表达载体,转染至HEK 293T、COS7细胞观察COX6B1蛋白在细胞内表达与定位。方法以含人COX6B1全长cDNA序列的质粒为模板,通过上游带有FLAG标签的引物,PCR方法扩增出COX6B1全长序列,然后插入真核表达载体pCDNA3.1中构建pCDNA3.1-FLAG-COX6B1表达载体。将构建的质粒转染至HEK 293T细胞,提取总蛋白,进行Western blot检测;转染至COS7细胞,在荧光显微镜下观察其细胞定位。结果成功构建了pCD-NA3.1-FLAG-COX6B1表达载体,其在HEK 293T细胞中能有效地表达;在COS7细胞中呈斑点状分布,且主要在胞质内分布,细胞核中未见其明显表达。结论 COX6B1在HEK293T、COS7细胞中均有表达,且主要分布在胞质内,这为进一步了解COX6B1的功能提供了一定的基础。
刘君耿慧武陈应炉刘晓颖范礼斌
关键词：基因表达转染细胞定位
RACK1与CLIC1的相互作用鉴定
2022年
目的探究胞内氯离子通道蛋白1(CLIC1)与活化蛋白激酶C受体1(RACK1)在细胞内的相互作用。方法构建重组质粒pcDNA3.1-RACK1-HA,转染质粒pcDNA3.1-RACK1-HA和(或)pcDNA3.1-CLIC1-FLAG到HEK 293T细胞中,转染pcDNA3.1-RACK1-HA和(或)pcDNA3.1-CLIC1-FLAG到COS7中。GST-pulldown和免疫共沉淀实验确定CLIC1和RACK1在体内及体外的相互作用。间接免疫荧光实验检测RACK1与CLIC1在细胞中的定位。结果成功构建pcDNA3.1-RACK1-HA,Western blot检测结果证明了RACK1和CLIC1可在HEK 293T细胞中表达,GST-pulldown结果显示RACK1与CLIC1在体外可直接结合,免疫共沉淀结果显示RACK1和CLIC1可在细胞内结合。间接免疫荧光实验表明RACK1与CLIC1可共定位于细胞质。结论RACK1与CLIC1可在细胞中结合。
李彩红朱亮亮王蓓华周恒李强朱昉修范礼斌
关键词：RACK1相互作用
人类胞内氯离子通道蛋白3在原核细胞及真核细胞内的表达
2014年
目的研究人类胞内氯离子通道蛋白3(CLIC3)在真核细胞中的定位和表达,及其GST融合蛋白在原核细胞中的表达。方法以含人CLIC3的全长cDNA序列的质粒为模板,PCR扩增CLIC3片段,构建真核表达载体pcDNA3.1-CLIC3-FLAG,检测其定位及表达;构建原核表达载体pGEX-5X-3-CLIC3,转化到大肠杆菌BL21菌株,IPTG诱导融合蛋白GST-CLIC3表达。结果细胞免疫荧光结果表明CLIC3在COS7细胞质和细胞核中均有分布;Western blot结果显示CLIC3在HEK-293T细胞中能有效表达;考马斯亮蓝染色结果表明融合蛋白GST-CLIC3在BL21菌株中能有效表达。结论人类的CLIC3蛋白COS7、HEK-293T及大肠杆菌BL21菌株均能有效表达,为进一步了解CLIC3的功能奠定了一定的基础。
李春雨潘林鑫刘晓颖范礼斌
关键词：细胞定位蛋白表达
OPTN基因shRNA真核表达载体的构建及干扰效应的检测
2014年
目的通过构建针对视神经病变诱导基因(OPTN)的shRNA的真核表达载体,并转染HEK293FT细胞,实现对OPTN基因表达的抑制,为进一步研究OPTN蛋白的分子机制奠定基础。方法根据Origene中OPTN基因序列设计并合成能转录shRNA的双链DNA序列,插入真核表达载体pRFP-C-RS中,构建重组载体pRFP-C-RS-shOPTN。经鉴定正确后转染HEK293FT细胞,荧光显微镜下观察shRNA转染情况,Western blot法检测OPTN蛋白表达,检测其干扰效率;沙门菌感染实验检测沙门菌在细胞内的增殖,进一步检测OPTN蛋白干扰后对OPTN蛋白作为自噬受体功能的影响。结果成功构建了针对OPTN基因的shRNA表达载体,转入HEK293FT细胞72 h之后,pRFP-C-RS-shOPTN表达增强,OPTN蛋白表达受到明显抑制;细胞内的沙门菌感染实验证明OPTN蛋白可以显著抑制沙门菌的增殖。结论靶向OPTN基因的特异性shRNA转染HEK293FT细胞后可抑制OPTN蛋白表达效率达80%以上,可用于OPTN调控自噬的进一步研究,同时自噬调节蛋白OPTN可以显著抑制沙门菌在细胞内的增殖。
顾彧范礼斌刘晓颖
关键词：RNA干扰OPTN沙门菌
人RB1及其突变体的表达与定位被引量：6
2013年
目的研究人RB1及其缺失突变体蛋白在细胞内的表达与定位。方法以含人RB1全长cDNA序列的质粒为模板,通过PCR方法分别扩增出RB1全长及其三段缺失突变体序列,然后分别构建其表达载体,利用Western blot法和免疫荧光法检测其在细胞株中的表达与定位。结果成功构建了pCDNA3.1-FLAG-RB1及其缺失突变体的表达载体,Western blot法结果证明其在细胞中都能有效地表达,免疫荧光的结果显示了RB1主要分布在细胞核,但其缺失突变体在细胞质中也有分布。结论人RB1在HEK 293T、COS7细胞中均有表达,且主要分布在细胞核内,其缺失突变体在胞质中也有分布,这为进一步了解人RB1的功能提供了一定的基础。
潘林鑫李新颖徐南李克娟乔正耿慧武刘晓颖范礼斌
关键词：RB1转染基因表达细胞定位
全选 清除 导出
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