陕西省农业科技创新项目(2011NXC01-10)
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
- 相关作者：杨增岐杜恩岐刘海金陈胜利王兴龙更多>>
- 相关机构：西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：陕西省农业科技创新项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 副猪嗜血杆菌平板凝集检测方法的建立与应用被引量：4
- 2015年
- 【目的】建立快速检测副猪嗜血杆菌抗体的平板凝集试验方法,以便能够对副猪嗜血杆菌病进行快速、准确的诊断。【方法】利用9株(Ea、Ec、Ew、A1、A2、B1、B2、C1、C2)副猪嗜血杆菌陕西分离株制备平板凝集抗原,用其免疫健康家兔制备血清抗体,建立副猪嗜血杆菌平板凝集检测方法,对制备抗原的优势菌株进行筛选,并对该方法的特异性、敏感性、抗原最佳工作浓度进行检测。【结果】选出Ew株作为制备抗原的种子菌株,成功建立了检测副猪嗜血杆菌抗体的平板凝集试验方法;该方法具有良好的特异性和敏感性,抗原最适工作浓度为8×109 CFU/mL。采用本试验建立的副猪嗜血杆菌平板凝集试验方法对临床血清样品的检测结果与临床诊断结果基本一致。【结论】建立的副猪嗜血杆菌平板凝集试验方法能够对副猪嗜血杆菌病做出较为快速、准确的诊断;陕西省存在副猪嗜血杆菌不同程度的感染,规模猪场集中饲养的猪感染副猪嗜血杆菌的比率明显高于散户。
- 高艳张定全杨增岐梁留存刘海金吴朋朋高小龙常旭东杜恩岐
- 关键词：副猪嗜血杆菌抗原制备平板凝集抗体检测
- 稳定表达新城疫病毒V蛋白禽源细胞系的建立被引量：1
- 2012年
- 为获得可以稳定表达新城疫病毒V蛋白的DF-1细胞系,以质粒载体为模板,用PCR方法扩增新城疫病毒V基因并引入酶切位点(EcoRⅠ和BamHⅠ),以同尾酶相连的方式与用EcoRⅠ和BglⅡ酶切的piggyBac转座子系统克隆质粒pTKL1-CMV-Puro-EGFP相连接,经酶切鉴定、测序分析正确后,用Lipo-fectamineTM2000将重组质粒pTKL1-CMV-Puro-EGFP-V和辅助质粒mPB共转染DF-1细胞,通过绿色荧光观察、嘌呤霉素筛选及蛋白表达的Western-blot检测,结果表明,稳定表达新城疫病毒V蛋白的DF-1细胞系已成功建立。证实piggyBac转座子系统能够用于稳定表达外源基因的禽源细胞系的构建,为piggy-Bac转座子系统在禽源细胞的应用和新城疫病毒V蛋白的研究提供了一定的参考资料。
- 唐文雅王兴龙张渭东杜恩岐陈胜利王丹阳党如意张淑霞杨增岐
- 关键词：PIGGYBAC转座子细胞系
- 陕西省副猪嗜血杆菌的分离及其基于tbpA基因的分型鉴定被引量：3
- 2011年
- 【目的】检测副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)在陕西关中地区的感染状况,并对分离菌株进行基因型分析,为该地区副猪嗜血杆菌病的流行病学研究提供依据。【方法】从陕西关中地区14个发生多发性关节炎和浆膜炎的猪场采集30份病料,分离细菌,通过其培养特性和形态观察及生化试验和PCR等方法对分离株进行鉴定,并用Blast软件对分离株的16SrRNA序列进行同源性比对,同时对分离菌株进行了几种常见药物的敏感性检测。通过3种限制性内切酶TaqⅠ、AvaⅠ、AfaⅠ,对已被鉴定为副猪嗜血杆菌菌株的转铁结合蛋白A编码基因(tb-pA)进行PCR-RFLP基因分型。【结果】分离得到了5株疑似副猪嗜血杆菌菌株,经培养特性和形态观察、生化试验、PCR鉴定及序列同源性比对,将其鉴定为副猪嗜血杆菌。PCR-RFLP分型结果表明,从5株副猪嗜血杆菌分离株中共得到了4种基因型,分别为EBC、BBJ、EBJ、EAD。药物敏感性检测结果表明,分离菌株的耐药性均较强,且不同分离株对同一药物敏感性不同。【结论】副猪嗜血杆菌病在陕西关中地区猪群中流行比较严重,其基因型较多且与其他地域的菌株有一定差异。
- 刘辉陈胜利杨增岐刘海金张淑霞杜恩岐王兴龙党如意
- 关键词：副猪嗜血杆菌
