江苏省自然科学基金(BK2008066)
- 作品数：5 被引量：17H指数：3
- 相关作者：唐家琪王长军潘秀珍王晶葛俊超更多>>
- 相关机构：中国人民解放军南京军区军事医学研究所南京师范大学南京医科大学更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金南京军区医学科技创新课题更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 猪链球菌2型组氨酸三聚体蛋白原核表达被引量：4
- 2009年
- 目的鉴定猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype2,S.suis2)组氨酸三聚体蛋白(Histidine Triad Pro-tein,HTP),并研究该蛋白的免疫原性,为研究S.suis2保护性疫苗奠定实验基础。方法通过与相关家族蛋白进行同源性比较,在猪链球菌Z型05ZYH33全基因组序列中发现了编码HTP的基因。设计合成引物,进行PCR扩增,并将目的片段克隆到表达载体pET28a,表达并纯化出目的蛋白,通过蛋白印迹(Western blot)检测其免疫原性。结果PCR扩增出约2.7kb的片段,并成功表达分子量在110KD左右的目的蛋白。通过His-Tag亲和层析,获得纯度较高的融合蛋白。Western blot检测结果表明,该表达产物具有免疫原性。结论S.suis2中国强毒株中存在HTP,并具有良好免疫原性,可作为S.suis2免疫保护性疫苗候选分子。
- 邵珠卿韩明月葛俊超王长军潘秀珍唐家琪
- 关键词：猪链球菌2型克隆
- 2型猪链球菌人源致病株07NJH06的分离和病原生物学鉴定被引量：3
- 2009年
- 目的系统分析鉴定南京地区脑膜炎型猪链球菌感染病人脑脊液分离株07NJH06病原生物学特性。方法采集患者脑脊液,进行细菌分离和培养,观察菌体显微形态,通过免疫凝集试验和PCR方法对分离物进行种属鉴定及毒力因子基因携带情况分析,纸片法测定菌株药物敏感性,采用小白鼠和仔猪模型评估分离菌株的致病特性。结果从病人脑脊液分离到1株革兰阳性链球菌,经免疫学、生物化学及分子生物学方法系统鉴定为2型猪链球菌(命名为07NJH06),毒力基因型为cps2J+mrp+epf+sly+gdh+fbp+srtA+,未获得含有完整毒力岛PAI89k的证据,该岛两侧边缘反向重复区靶基因以及岛内二元调控系统SalK/SalR均未检出,但针对岛内3个独立的镶嵌结构区代表基因进行扩增,其中2个结构区代表基因(05SSU0942和05SSU0965)得到特异性扩增;药敏试验显示,07NJH06株对青霉素、万古霉素等抗生素敏感,对四环素、头孢噻肟钠等抗生素耐药;动物感染试验显示,07NJH06株对小鼠和猪仔有致病性,毒力较国内暴发流行强致病株05ZYH33弱,与国际参考株毒力相当。结论07NJH06株为致病性2型猪链球菌,基本生物学特性、主要毒力基因型与既往国内暴发现场分离株相似,但不含有完整的毒力岛PAI89k基因结构,系统掌握该菌遗传信息对于阐明国内强毒株遗传进化规律有重要价值。
- 王长军郑峰潘秀珍董瑞平胡丹秦跃红唐家琪
- 关键词：2型猪链球菌毒力因子病原生物学
- 猪链球菌2型唾液酸合成酶neuB基因敲除突变株的构建及其生物学特性被引量：8
- 2009年
- 利用同源重组基因敲除方法构建猪链球菌2型强毒株05ZYH33唾液酸合成酶neuB基因敲除突变株。PCR和Southern杂交结果均显示neuB基因在1株转化重组体中完全被壮观霉素抗性基因替代,表明neuB基因敲除突变体构建成功。生物学特性鉴定显示,突变体与强毒株在菌落形态、溶血活性以及染色特性方面均无明显差异;电镜检查发现突变体表面结构组分与强毒株有显著差异,荚膜明显变薄,质地更加紧密;小鼠致病性试验结果显示,突变体毒力显著减弱。研究结果提示菌体荚膜中的唾液酸对于猪链球菌2型侵袭和致病具有重要作用。
- 董瑞萍王长军程功李明王晶潘秀珍唐家琪
- 关键词：猪链球菌2型基因敲除生物学特性
- 2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33 ofs N-片段基因敲除株的构建被引量：1
- 2009年
- 通过生物信息学分析2型猪链球菌(Streptococcus suisserotype 2,S.suis2)中国强毒株05ZYH33的基因组,预测并发现猪链球菌血清浑浊因子(Opacity factor ofS.suis,OFS)的编码基因ofs.为了构建ofsN-末端片段ofs37-683的基因敲除株,首先构建中间为壮观霉素抗性基因,两侧为ofs37-683上、下游同源序列的基因敲除质粒,并对该质粒进行PCR和酶切鉴定.根据同源重组的原理,通过电转化方法筛选得到ofs37-683基因敲除株.PCR、测序和RT-PCR分析结果均显示ofs37-683已完全被壮观霉素抗性基因替代,证实ofs37-683基因敲除株构建成功.该敲除株的获得为进一步研究ofs在猪链球菌2型致病机制中的作用奠定基础.
- 史沛举郝喜娜葛俊超王长军王晶潘秀珍唐家琪
- 关键词：2型猪链球菌
- SS2人源分离株ZYH24EF的表达纯化及其单克隆抗体的制备被引量：1
- 2009年
- 目的建立猪链球菌2型(SS2)胞外因子(EF)的免疫学检测方法。方法将SS2四川人源分离株ZYH24EF抗原性强的区域进行克隆、原核表达,对表达的融合蛋白(rEF-GST)采用亲和层析法纯化、经凝血酶作用去除标签蛋白获得纯化的EF目的蛋白。以纯化的EF免疫BALB/c小鼠,间接ELISA方法筛选阳性克隆,对获得的抗EF单克隆抗体(McAbs)进行特异性分析,并建立猪链球菌EF检测方法。结果得到rEF-GST和EF相对分子量分别为62000和35000;建立了4株稳定分泌抗EFMcAbs的杂交瘤细胞系2G1、5H7、3H4和1F2;腹水的特异性鉴定结果表明4株McAbs能特异性的识别EF;以2G1单抗腹水和抗EF多克隆抗血清建立的夹心ELISA可特异地检测EF。结论4株抗EFMcAbs的制备对猪链球菌检测试剂盒的研制以及该病的防治有重要意义。
- 徐公义王海丽葛长城王长军唐家琪
- 关键词：猪链球菌2型单克隆抗体
