国家自然科学基金(30571876)
- 作品数：4 被引量：5H指数：2
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- 成纤维细胞与完全脱细胞人羊膜的三维黏附
- 2011年
- 目的 观察完全无细胞人羊膜基质（thoroughly acellular human amniotic membrane,TAHAM）在体外与成纤维细胞的黏附方式.方法 原代人包皮成纤维细胞（human foreskin fibroblast,HFF）种植于平皿、基质胶及用胰酶悬吊法制作的TAHAM.扫描电子显微镜下观察TAHAM的组织结构及超微结构.检测TAHAM的应力、应变.免疫荧光染色观察Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅵ型胶原、层黏连蛋白、纤维结合蛋白、转化生长因子-β1、转化生长因子-β2、成纤维细胞生长因子的表达.用倒置相差显微镜观察HFF在TAHAM上的细胞形态.激光共聚焦显微镜观察α5整合素、桩蛋白和纤维结合蛋白的空间关系.结果 TAHAM内无细胞,在扫描电镜下TAHAM表面呈纤维完整的网状结构.免疫荧光显示Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅵ型胶原、层黏连蛋白、纤维结合蛋白染色阳性,转化生长因子-β1、转化生长因子-β2、成纤维细胞生长因子染色阴性.新鲜羊膜和TAHAM的过渡应力、过渡应变、破坏应力、破坏应变的差异均无统计学意义.HFF在TAHAM上呈纺锤形,复层生长为相互连接的细胞团并长入TAHAM;HFF中的α5整合素（绿色）、桩蛋白（红色）及其分泌的纤维结合蛋白（蓝色）三色共聚焦形成白色条带.HFF在TAHAM上呈直线运动,在平皿上为无规则运动.结论 TAHAM保留了羊膜的原有主要成分和力学特征,HFF可在TAHAM上形成三维黏附,其细胞形态及细胞移动方式符合三维黏附特征.
- 卢旭亚雪原王沛崔成亮刘嵬李杨
- 关键词：羊膜细胞黏附整合素类
- pELNS—BMPs与pELNS—Wnt3a联合构建表达对成骨细胞系成骨效能的作用研究被引量：2
- 2016年
- 目的构建第三代自体失活的骨形成蛋白（bonemorphogeneticprotein，BMP）-2、4、6、7、9和Wnt3a慢病毒表达载体，并整合入小鼠间质干细胞MC3T3一E1的基因组中，构建成骨诱导因子基因修饰的小鼠间质干细胞，探讨各成骨诱导因子的成骨分化能力及通过双基因联合转染提高成骨分化能力的有效性。方法以cDNA文库为模板，构建BMP．2、4、6、7、9及Wnt3a基因表达质粒载体，酶切鉴定重组体且经测序进一步确定后，与pLP／VSVG、pLPl、pLP2质粒共转染293FT细胞。包装pELNS．BMP-2、4、6、7、9及Wnt3a后转染小鼠间质干细胞MC3T3．E1细胞，GFP荧光证实转染效果。RealtimePCR检测Runx2mRNA的表达水平，鉴定各成骨诱导因子的单独转染效能。双基因联合转染（共8组）MC3T3．E1细胞，GFP荧光证实转染效果；应用ELISA检测MC3T3-E1细胞培养上清中骨钙素（bone出protein，BGP）和碱性磷酸酶（alkalinephosphatase，ALP）的表达水平；应用RealtimePCR检测Runx2mRNA的表达水平；应用Westernblot检测BMP-2、4、6、7、9及Wnt3a蛋白的表达水平，鉴定双基因联合转染的成骨分化效能。结果重组慢病毒pELNS-BMP-2、4、6、7、9及pELNS-Wnt3a构建成功，成功转染MC3T3-E1细胞；Runx2mRNA表达水平：BMP-2〉BMP4-〉BMP-9〉BMP-7〉Wnt3a〉BMP-6。双基因（共8组）联合转染MC3T3-E1细胞，GFP荧光证实转染成功；Runx2mRNA表达水平、BGP和ALP表达水平结果显示，BMP-2与BMP-7共转染成骨效率最高，Westernblot证实BMP-2和BMP-7联合转染MC3T3-E1细胞后BMP-2、4、6、7、9及Wnt3a蛋白表达升高。结论成功构建第三代慢病毒载体pELNS可将BMP．2、4、6、7、9和Wnt3a导人小鼠间质干细胞MC3T3-E1，使其有效表达；各成骨诱导因子能促进MC3T3-E1细胞向成骨细胞分化，BMP-2和BMP-7双基因联合转染能有效提高成骨转化。
- 阮文东雪原宗亚琪孙超
- 关键词：骨再生骨形态发生蛋白质类成骨细胞
- 肾上腺功能水平对脑缺血再灌注大鼠海马bax和bcl-2基因表达的影响被引量：1
- 2008年
- 目的:观察肾上腺功能水平对大鼠脑缺血再灌注后海马bax和bcl-2基因表达的影响。方法:成年雄性Wistar大鼠36只随机分为单侧肾上腺切除组(ADX)、单侧肾上腺切除+注射糖皮质激素组(GC)和假手术对照组(sham)。所有大鼠在单侧肾上腺切除或假手术14d后行全脑再灌注手术。每组大鼠分别于再灌注后1h、4h、8h、24h随机取3只断颈处死,取海马组织提取总RNA,RT-PCR半定量检测c-fos、bax和bcl-2的表达情况。另设3只大鼠为正常组(normal)。结果:c-fos、bax表达水平在ADX、GC、sham3组之间无统计学差异(P>0.05)。Sham组bcl-2表达水平明显高于ADX组和GC组(P<0.05),而ADX组与GC组bcl-2表达无统计学差异(P>0.05)。Sham组bax/bcl-2明显低于ADX组和GC组(P<0.05),而ADX组与GC组间bax/bcl-2无统计学差异(P>0.05)。结论:肾上腺功能水平对脑缺血再灌注后大鼠海马组织c-fos和bax基因表达无影响,但肾上腺功能低下会导致脑缺血再灌注后大鼠海马组织bcl-2基因表达下调,bax/bcl-2比值升高,可能促进海马组织细胞发生凋亡,补充糖皮质激素对此bcl-2基因表达下调无纠正作用,表明还有其它机制存在。
- 倪虹冯超陈杰宋建宁戴海涛
- 关键词：脑缺血地塞米松海马
- 不同性别的大鼠骨质疏松形态计量学和生物力学研究被引量：2
- 2010年
- 目的研究不同性别骨质疏松大鼠的骨力学特性。方法基于切除卵巢雌性大鼠和切除肾上腺雄性大鼠骨质疏松模型,研究不同性别大鼠骨形态计量学和生物力学的测量结果。结果骨形态计量学提示,骨小梁厚度(Tb.Th)、平均骨小梁接点数(Tb.N)、相对类骨质体积(OV/BV)雌性大鼠低于雄性;四环素单标记面(sLS/BS)雌性大鼠高于雄性大鼠。生物力学指标提示,骨质疏松大鼠弯曲弹性模量、弯曲刚性系数低于正常;最大弯曲应力低于正常,且雌性低于雄性大鼠。弯曲韧性系数雄性大鼠高于正常,雌性大鼠低于正常。结论骨质疏松雌性大鼠骨小梁形态结构弱于雄性。骨质疏松大鼠抗应力强度减弱,骨韧性度雌性大鼠弱于雄性。因此,雌性大鼠骨质疏松的骨质力学状态弱于雄性。
- 史念珂雪原
- 关键词：骨质疏松形态计量学生物力学
