贵州省科技厅农业攻关项目(NY[2011]3047)
- 作品数：10 被引量：88H指数：5
- 相关作者：任学良王仁刚史跃伟王志红王轶更多>>
- 相关机构：贵州省烟草科学研究院贵州省烟草科学研究所川北医学院更多>>
- 发文基金：贵州省科技厅农业攻关项目中国烟草总公司科技项目国家烟草专卖局基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 普通烟草八氢番茄红素脱氢酶基因的原核表达及表达谱分析被引量：4
- 2014年
- 基于NCBI数据库中本氏烟(Nicotiana benthamiana)的烟草八氢番茄红素脱氢酶PDS基因(ABE99707)的核苷酸序列,设计并合成特异性引物,以烟草栽培品种红花大金元叶片总RNA为模板,通过PCR方法获得了烟草NtPDS基因的cDNA片段。序列分析表明,该基因编码区为1749 bp,编码582个氨基酸,推测该蛋白等电点为7.53,理论分子量为65.04 kD。通过构建融合表达载体pET-32a-NtPDS,并转化大肠杆菌BL21(DE3),在37℃下经1 mmol/L IPTG诱导4 h表达后,产生了以可溶性蛋白形式存在的NtPDS融合蛋白,并通过Western blotting验证融合蛋白获得表达。利用半定量RT-PCR技术进行组织表达模式分析发现,该基因在烟草的叶片、花和茎中均有表达,在根中没有表达。该结果为进一步研究烟草八氢番茄红素脱氢酶NtPDS的活性和生物学功能奠定了基础。
- 钟晓武付强邹颉林世峰郭玉双赵杰宏任学良
- 关键词：烟草八氢番茄红素脱氢酶原核表达表达谱
- 不同烤烟品种(系)对青枯病的抗性鉴定被引量：8
- 2015年
- 采用十二孔板法、培养皿小苗法、注射接菌法及菌液灌根法,以病情指数和烟苗危害症状为主要评价指标,对贵州省12个烤烟(Nicotiana tabacum L.)品种(系)进行抗烤烟青枯病[Ralstonia solanacearum(Smith)Yabuuchi et al]鉴定和评价。结果表明,十二孔板法和培养皿小苗法不能反映烤烟的真实抗性,注射接菌法对试验操作要求较高,菌液灌根法鉴定结果较为准确。所测12个品种(系)中达到高抗水平的有贵烟1号、贵烟14号和抵字101,中抗水平的有K346、K326、岩烟97、贵烟6号、贵烟8号和贵烟9号,敏感水平的有红花大金元、长脖黄和南江3号。
- 陆宁任学良汪汉成王进王轶王仁刚王茂胜
- 关键词：抗病鉴定
- 国内外烤烟品种农艺性状的遗传多样性及与SRAP标记的关联分析被引量：25
- 2012年
- 选取258份国内外烤烟品种,在2个试验点调查13个农艺性状,利用16对引物组合获得的597个SRAP标记进行分子遗传多样性和群体结构分析,选取适宜的模型进行农艺性状与SRAP标记间关联分析。结果表明,参试品种表型和基因型变异丰富,国内品种的遗传多样性低于国外品种。总材料可分为7个亚群,分类结果与材料的地理来源和遗传背景显著相关,国外材料遗传结构相对复杂。通过比较发现MIM_Q+K和MIM_PCA+K为该群体最优的关联分析模型,共检测到18个SRAP标记与6个农艺性状显著关联(-logP>2,P<0.01),其中,me1/em9-16、me1/em9-36、me4/em9-1与株高,me1/em2-14、me7/em5-34与叶片数,me6/em2-6与脚叶宽,me2/em6-15与腰叶长在不同环境下均显著关联。
- 张吉顺王仁刚杨春元吴春史跃伟王志红王轶任学良
- 关键词：烤烟SRAP标记
- 烟草植物螯合肽合成酶PCS1基因的电子克隆和序列分析被引量：1
- 2014年
- 为了研究烟草中重金属镉的代谢转运基因,以马铃薯的植物螯合肽合成酶phytochelatin synthases 1(PCS1)基因的全长cDNA序列(GenBank登录号:AJ548472.1)为信息探针,通过电子克隆的方法从烟草栽培品种中克隆到1个植物螯合肽合成酶基因(NtPCS1),并对其进行了序列分析。序列分析结果:NtPCS1包含完整的开放读码框,编码531个氨基酸,含有2个保守域Phytochelatin_C和Phytochelatin;通过同源比对和进化分析发现,NtPCS1氨基酸序列与番茄PCS1的序列一致性达到85%,与已报道的树烟草NgPCS相比,在N端多出30个氨基酸。以上结果表明NtPCS1是栽培烟草中新发现的金属镉代谢转运基因。
- 付强钟晓武邹颉林世锋郭玉双赵杰宏王轶任学良
- 烤烟新品种(系)重要经济性状丰产性和稳定性评价研究被引量：5
- 2013年
- 为客观评价烤烟新品种(系)的丰产性、稳定性和品种生态布局,为贵州烤烟新品种(系)的审定和推广提供科学依据。将GGE方法引入烤烟区域试验分析中,同时采用GGE双表图及AMMI模型,对2011年度贵州省烤烟区域试验8个生态区域、13个烤烟新品种(系)的产量和产值进行分析。结果表明,2种分析方法均能客观评价烤烟新品系的丰产性和稳定性,GGE双标图方法能更直观准确地反映各品系的最佳适应区域。新品系YQ-1的产量和产值均表现最好,GY1007、A18和2010A4具有特殊适应性,GY1007和A18在德江地区有推广价值,而2010A4在道真地区具有推广价值。
- 史跃伟郎胜勇王志红张吉顺曹廷冒邱萍
- 关键词：GGE双标图AMMI模型烤烟
- 我国主栽烤烟品种亲缘关系及育种被引量：37
- 2013年
- 以1986-2012年36个烤烟品种为材料,研究了我国主栽烤烟品种的亲缘关系和亲本来源,对主栽品种的历史演变与现状、品质性状和抗病性的系谱组成以及育种途径和方式进行了分析。结果表明:品种单一、遗传基础狭窄、品质与抗性不能兼顾是我国主栽烤烟品种存在的主要问题;在我国烤烟育种的种质资源、育种目标等方面提出了建议。
- 杨志晓王轶刘红峰王仁刚王志红史跃伟任学良杨铁钊
- 关键词：烤烟主栽品种亲缘关系
- 烟草糖基转移酶基因NtGT5a的克隆及原核表达被引量：5
- 2014年
- 为揭示烟草糖基转移酶的活性及生物学功能,从烟草栽培品种中克隆了烟草糖基转移酶基因NtGT5a,基于GenBank的烟草糖基转移酶基因NtGT5a的核苷酸序列(GenBank登录号AB176523),设计并合成特异性引物,以红花大金元叶片总RNA为模板,通过RT-PCR方法获得了烟草糖基转移酶基因NtGT5a的cDNA片段。序列分析表明,该基因编码区为1458 bp,编码485个氨基酸残基,推测的蛋白分子量为54.21 kDa,理论等电点为5.41。通过构建重组表达载体pCold-SUMO-NtGT5a,并转化大肠杆菌BL21(DE3),在15Ⅲ下经0.2 mmol/L IPTG诱导22 h表达产生了SUMO-NtGT5a重组蛋白。重组蛋白部分以包涵体形式存在,部分以可溶性蛋白形式存在。将重组蛋白的可溶性组分经过Ni-NTA柱层析纯化和凝胶过滤层析,用SUMO蛋白酶切除SUMO标签,再用镍柱纯化获得了高纯度的NtGT5重组蛋白。
- 钟晓武付强邹颉赵杰宏林世锋郭玉双任学良
- 关键词：烟草糖基转移酶基因蛋白酶
- 基于毛细管电泳的TILLING实验技术的建立
- 2014年
- CEL I内切酶特异识别并切断错配碱基,是建立TILLING实验技术平台的关键之一。本文从贵州省贵阳市当地种植的西芹中获得CEL I酶粗提物,利用一对具有已知单碱基差异的质粒作为底物验证所提CEL I酶粗提物的酶切活性,通过琼脂糖电泳和毛细管电泳对酶切产物进行检测,表明所获芹菜粗提物具有CEL I活性。本实验建立了适宜烟草TILLING实验的CEL I粗提物酶切体系:酶切温度42℃,酶切时间60 min,酶切反应总体积15μL,包括8μL PCR产物、4.5μL ddH2O、1.5μL酶切缓冲液(pH 7.5,500 mmol/L KCL,100 mmol/L Tris-Cl,15 mmol/L MgCl2)和1μL CEL I酶(稀释为原始粗提液0.05倍)。
- 付强邹颉张吉顺王轶任学良
- 关键词：TILLING毛细管电泳
- 烟草半胱氨酸蛋白酶抑制剂(CPI)基因家族的克隆及组织表达谱分析被引量：5
- 2014年
- 运用生物信息学方法,结合RT-PCR和SMART RACE技术从烟草(Nicotiana tabacum)中克隆了4个CPI基因的全长cDNA序列,分别命名为NtCPI1、NtCPI2、NtCPI3和NtCPI4,GenBank登陆号分别为KF057988、KF057989、KF057990和KF057991。基因序列分析表明4个基因分别编码98、98、120和123个氨基酸残基的蛋白质,都具有CPI反应位点的保守基序GG、QXVXQ和A/PW,同时具有植物CPI所特有的LARFAV基序,其中NtCPI3和NtCPI4的N端还包含一段27个氨基酸残基组成的信号肽。实时荧光定量PCR试验表明,4个基因的组织表达谱很广,在根、茎、叶和芽组织中都有表达。研究结果为进一步研究半胱氨酸蛋白酶抑制剂在植物中的生理功能奠定了基础。
- 林世锋元野任学良邹颉黎瑞源郭玉双赵杰宏王仁刚
- 关键词：烟草半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因家族克隆组织表达谱
- 烤烟种质资源遗传多样性和群体结构及亚群特异性研究被引量：2
- 2012年
- 筛选多态性丰富的16对SRAP引物,对不同地理来源的276份烤烟资源的遗传变异进行分析,结果表明:16对SRAP引物共检测出611个等位位点,平均每对引物对38.19个,多态性较高;国外烤烟品种遗传多样性高于国内品种,贵州烤烟品种遗传多样性水平较低;NJ法聚类、PCA分析和STRUCTURE群体结构分析结果相互吻合,证明烤烟是与地理来源和亲缘关系密切相关的资源群,贵州烤烟资源形成了独立的组群,其遗传背景独特;各烤烟群体拥有独立的特有和特缺等位位点,群体间互补等位位点丰富,利用国外品种来拓宽国内烤烟品种的遗传基础最具潜力。
- 张吉顺杨春元吴春胡重怡王仁刚郭玉双任学良
- 关键词：遗传特异性SRAP
