国家自然科学基金(30571864)
- 作品数：7 被引量：9H指数：2
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- pApoptin-EGFP真核表达载体的构建及其对膀胱肿瘤T24的促凋亡作用被引量：1
- 2008年
- 目的构建真核表达质粒pApoptin-EGFP并探讨其对人膀胱肿瘤细胞株T24促凋亡作用。方法采用PCR的方法从质粒p3×flag-Apoptin-myc扩增出野生Apoptin片段,将其定向克隆于pEGFP-N1载体的EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点,构建能表达Apoptin-EGFP融合蛋白的真核表达质粒pApoptin-EGFP,酶切、测序鉴定,RT-PCR、荧光显微镜分析Apoptin基因表达,脂质体介导瞬时转染膀胱肿瘤T24细胞,流式细胞仪检测调亡及细胞周期变化。结果成功构建pApoptin-EGFP重组质粒,并在被转染细胞中检测到Apoptin基因表达;瞬时转染后不同时相点均可检测到细胞凋亡,与空质粒组相比具有显著差异,细胞周期表现为G1/G0期阻滞。结论成功构建pApoptin-EGFP真核表达质粒,重组质粒能在T24细胞中顺利表达Apoptin-EGFP融合蛋白,重组质粒转染可诱导T24细胞凋亡并阻滞细胞周期于G1/G0期。
- 王亚林靳风烁万江华王洛夫吴刚
- 关键词：APOPTIN膀胱肿瘤T24凋亡
- 分子佐剂在DNA疫苗中的应用被引量：1
- 2009年
- 如何增强和提高DNA疫苗的免疫效果是新一代DNA疫苗分子设计和研究的关键问题,其中之一就是应用分子佐剂来优化DNA疫苗。分子佐剂可将以基因方式传递的免疫刺激分子与DNA疫苗共免疫,在体内表达相应的蛋白,增强T、B细胞对疫苗成分的体液及细胞免疫应答。目前研究较多的分子佐剂有:细胞因子如干扰素(IFN)、白细胞介素2(IL-2)、IL-12、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)等;共刺激分子如B7-2、CD40L等;补体佐剂如C3;免疫刺激序列如CpG、寡核苷酸(ODN)等。分子佐剂在体内与疫苗基因共表达,改善抗原的周边微环境,提高疫苗的免疫效果。因此,分子佐剂是目前DNA疫苗研究中的热点问题之一。
- 郑秀惠梁培禾李力
- 关键词：DNA疫苗分子佐剂细胞免疫体液免疫
- 肿瘤抗血管生成治疗存在的问题及解决方法被引量：3
- 2009年
- 梁培禾郑秀惠靳风烁
- 关键词：肿瘤抗血管生成治疗
- CpG-ODN治疗小鼠膀胱肿瘤的实验研究被引量：3
- 2008年
- 目的探讨含CpG序列的寡脱氧核糖核苷酸(CpG Oligodeoxynucleotide,CpG-ODN)对小鼠膀胱肿瘤的治疗作用。方法建立BTT739荷瘤小鼠动物模型,随机分为CpG-ODN治疗组和PBS对照组,于肿瘤细胞接种后第7、14天给予治疗,每组分两亚组,分别用于测量瘤重、体积及用于观察荷瘤小鼠存活情况。ELISA法检测小鼠血清中IL-12水平。流式细胞仪检测肿瘤组织中浸润性树突状细胞表面共刺激分子CD80、CD86的表达。结果第2次治疗7d后,平均瘤重CpG-ODN组为(3.30±0.81)g,对照组为(4.50±0.47)g(P<0.01),平均体积CpG-ODN组为(3.57±0.84)cm3,对照组为(4.84±0.58)cm3(P<0.01),CpG-ODN组荷瘤小鼠生存期长于PBS对照组(P<0.05)。治疗组及对照组小鼠血清中IL-12浓度分别为(391.5±28.4)pg/mL和(257.2±13.7)pg/mL(P<0.01)。肿瘤组织中浸润性树突状细胞(Tumor infiltrating dendritic cell,TIDC)表面CD80、CD86表达水平治疗组分别为(17.75±3.13)%、(18.72±2.79)%,对照组分别为(11.32±1.18)%(P<0.01)、(12.65±1.22)%(P<0.01)。结论CpG-ODN对膀胱肿瘤荷瘤小鼠具有抑瘤效应和生存期延长作用,其机制主要是通过诱导DC成熟、促进Th1型细胞因子分泌、诱导免疫应答向Th1细胞分化。
- 聂志林靳风烁张克勤梁培禾叶锦
- 关键词：膀胱肿瘤树突状细胞
- 小鼠受精素β亚单位真核表达载体pSG.SS.C3d3.YL-F_β构建及在HEK293细胞中的表达分析
- 2007年
- 目的:构建表达小鼠受精素β去整合素结构域(Fβ)的真核表达重组载体pSG.SS.C3d3.YL-Fβ,并对其在HEK293细胞中的表达进行分析。方法:应用PCR方法获得Fβ的cDNA片断,将其插入pSG.SS.C3d3.YL中,经酶切鉴定正确后转染HEK293细胞,并利用间接免疫荧光结合激光共聚焦技术、Western印迹技术、免疫组织化学染色技术及流式细胞仪检测技术对Fβ的表达进行检测。结果:成功构建了Fβ的真核表达重组载体pSG.SS.C3d3.YL-Fβ,该重组载体在HEK293细胞中能够表达Fβ。结论:Fβ在真核细胞中的成功表达为后续研究Fβ的高表达对受精过程的影响奠定了基础。
- 孙中义靳风烁李彦锋张军
- 关键词：间接免疫荧光HEK293细胞小鼠
- Apoptin对人膀胱癌裸鼠皮下移植瘤的抑瘤作用研究被引量：2
- 2008年
- 目的探讨Apoptin质粒对人膀胱癌裸鼠皮下移植瘤的抑瘤作用。方法皮下注射T24细胞,建立裸鼠移植瘤模型,于肿瘤直径0.5cm大小时,多点注射脂质体包裹质粒pApoptin-EGFP,设立空质粒组、生理盐水组作为对照组,观察裸鼠肿瘤生长情况;5周后处死,绘制肿瘤生长曲线,计算抑瘤率,肿瘤组织石蜡包埋,常规切片,TUNEL法检测移植瘤凋亡情况。结果成功建立移植瘤模型,注射脂质体包裹pApoptin-EGFP质粒能明显抑制移植瘤生长;TUNEL检测凋亡率为(23.24±6.12)%,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论Apoptin通过诱导凋亡能明显抑制人膀胱癌裸鼠皮下移植瘤生长。
- 王亚林靳风烁李彦锋王洛夫吴刚
- 关键词：APOPTINT24膀胱肿瘤移植瘤
- Flk-1265-2493与C3d3基因融合质粒诱导小鼠免疫应答的初步研究
- 2009年
- 目的对pSG.SS.Flk-1265-2493.C3d3.YL及pSG.SS.Flk-1265-2493.YL真核表达质粒的免疫效应进行初步研究。方法构建pSG.SS.Flk-1265-2493.C3d3.YL及pSG.SS.Flk-1265-2493.YL真核表达质粒后,48只BALB/c小鼠随机均分为疫苗组、疫苗对照组、质粒对照组、空白对照组(12只/组),分别肌肉注射接种此2种质粒、pSG.SS.YL质粒和PBS。免疫后动物:①每组6只取脾脏分离细胞,MTT法测定经Flk-1蛋白刺激后的增殖效应,乳酸脱氢酶释放法测定对培养小鼠肺微血管内皮细胞的杀伤作用;②其余6只动物于不同时间点断尾取血分离血清,ELISA法测定抗Flk-1抗体水平的动态变化。结果经Flk-1蛋白刺激,疫苗组小鼠脾淋巴细胞的增殖效应明显较强,刺激指数显著高于其他3组(P均<0.01),对靶细胞(MVECs)的杀伤活性在不同效/靶比时均显著高于其他3组(P均<0.01)。疫苗组动物血清抗Flk-1抗体比对照疫苗组抗体阳性反应出现早2周,二者峰值效价均出现在5周(血清稀释度:1∶3840vs1∶60),前者12周时仍保持较高水平(1∶960),后者10周时抗体阳性反应已消失。结论C3d3的连接有效增强了Flk-1265-2493的免疫原性。
- 梁培禾张克勤聂志林许桂莲李彦锋叶锦靳风烁
- 关键词：血管新生DNA疫苗FLK-1C3D
