国家自然科学基金(30571848)
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
- 相关作者：龚德军黄盛东袁扬徐志云刘晓红更多>>
- 相关机构：第二军医大学复旦大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人细胞外基质包被猪去细胞瓣膜支架构建的组织工程心脏瓣膜被引量：4
- 2009年
- 背景:去细胞处理的猪主动脉瓣膜植入人体后发生了免疫排斥反应,分析引起免疫排斥反应的原因是由于猪瓣膜的细胞外基质与宿主发生接触引起了免疫激活。目的:试图将人自身的细胞外基质履盖去细胞猪瓣膜表面起到隔离猪瓣膜与宿主血液成分接触的作用。同时应用免疫组化的方法验证人细胞外基质覆盖瓣膜的效果。设计、时间及地点:观察性实验,于2008-08/2009-04在解放军第二军医大学长海医院胸心外科实验室完成。材料:新鲜猪心脏瓣膜取自上海五丰上食肉联厂,采用酶消化法将猪主动脉瓣叶行脱细胞处理。密度梯度离心法从健康志愿者骨髓中获取骨髓基质干细胞。方法:用人细胞外基质包被猪去细胞瓣膜支架来构建组织工程瓣膜,再应用前期制备的抗人细胞外基质单克隆抗体,采用免疫组织化学染色鉴定人细胞外基质在体外构建的组织工程瓣膜上的黏附情况。以未构建的去细胞猪瓣叶为对照组。主要观察指标:①组织工程瓣膜上种子细胞的黏附和生长情况。②免疫组织化学法检测人细胞外基质在瓣膜上覆盖的效果。结果:光镜下观察瓣膜表面均形成了细胞层。扫描电镜所见细胞排列欠规则,未完全覆盖去细胞瓣叶表面,可见裸露的瓣膜支架。免疫组织化学方法检测构建的瓣膜表面呈阳性反应证明有人的细胞外基质黏附,而对照组呈阴性证明了检测方法具有特异性。结论:体外构建的组织工程瓣膜上检测到有人的细胞外基质黏附。
- 李秋泽徐志云黄盛东张宝仁杨立信刘晓红袁扬龚德军
- 关键词：组织工程心脏瓣膜细胞外基质
- 腺病毒介导的碱性成纤维细胞生长因子对慢性缺血冬眠心肌的保护作用
- 2007年
- 目的探讨重组腺病毒介导的碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对慢性缺血冬眠心肌的保护作用。方法制备猪慢性缺血冬眠心肌模型,并随机分为3组,分别心内注射腺病毒介导的bFGF(AdbFGF组)、空病毒(空病毒组)和生理盐水(空白对照组),每组7头猪,观察心肌间质胶原容积分数、心肌细胞核密度、核长度、心肌细胞直径以及心肌细胞增殖活性和凋亡的改变。结果与空病毒组和空白对照组比较,AdbFGF组冬眠心肌处心肌细胞直径和核长度明显增加,而心肌细胞核密度明显降低。而且心肌细胞的增殖活性增高,凋亡减少。结论bFGF一方面诱导心肌细胞增殖分裂,促进冬眠心肌细胞肥大;另一方面抑制细胞凋亡,减少冬眠心肌的损伤。
- 刘晓红白辰光袁扬龚德军刘延玲黄盛东
- 关键词：腺病毒科心肌顿抑转染
- 猪去细胞心脏瓣膜的免疫原性被引量：4
- 2009年
- 背景:在去细胞猪瓣膜(Synergraft瓣膜)的临床应用时发现异种的细胞外基质引发了人体一个强烈的炎症反应。早期的炎症反应严重地削弱了瓣膜内壁的基质结构,导致了移植物的结构破坏及衰败。从Synergraft瓣膜的事件中认识到猪去细胞瓣膜仍然具有免疫原性,尤其是在儿童患者中这种免疫反应会更强烈。因此对于细胞外基质蛋白引起的免疫排斥反应仍需要进一步的研究。目的:通过生物信息学的方法找到人与猪细胞外基质蛋白的基因序列差异,并制备抗体验证基质的免疫原性。设计、时间及地点:以Ⅳ型胶原基质为观察对象进行人、猪细胞外基质基因差异性的对比研究。于2008-06/2009-05在解放军第二军医大学长海医院胸心外科实验室完成。材料:新鲜猪瓣膜由上海五丰上食肉联厂提供,去细胞猪瓣膜、杂交瘤细胞和单克隆抗体由长海医院胸心外科实验室制备。方法:通过比较人、猪、鼠基因序列之间的相似区域和保守性位点,寻找有进化关系基因序列之间共同的保守区域、位点和序列差异,探索导致它们产生共同功能的基因序列以及基因序列间的差异片段。应用制备的抗猪Ⅳ型胶原单克隆抗体,采用免疫组化染色鉴定猪去细胞瓣膜上的猪瓣膜自身的细胞外基质存留情况。主要观察指标:Ⅳ型胶原基因序列差异分析结果、自制抗体有效性的免疫组化测试、自制抗体对猪去细胞瓣膜Ⅳ型胶原的检测结果。结果:通过基因比对的方法找到了人与猪Ⅳ型胶原的基因序列差异。通过杂交瘤技术成功制备检测细胞外基质的单克隆抗体;用免疫组化的方法检测到猪去细胞瓣膜上有猪的细胞外基质存留。结论:猪去细胞瓣膜支架上检测到有猪的细胞外基质存留,并且具有免疫原性。
- 李秋泽徐志云黄盛东张宝仁杨立信刘晓红袁扬龚德军
- 关键词：免疫原性
- 层层静电自组装多聚电解质共混膜与组织工程心脏瓣膜细胞的黏附
- 2009年
- 背景:组织工程心脏瓣膜研究中的核心和难点是种子细胞在支架材料上的黏附。层层静电自组装技术能够将多聚阴阳离子组装成多层膜状结构增加材料表面的生物相容性。目的:拟对猪去细胞瓣膜在体外进行层层静电自组装成多聚电解质共混膜,并且检测共混膜对种子细胞黏附的效果。设计时间及地点:细胞学体外观察性实验,于2008-09/2009-02在解放军第二军医大学长海医院胸心外科实验室和复旦大学高分子科学系实验室完成。材料:新鲜猪心脏瓣膜取自上海五丰上食肉联厂,采用酶消化法将猪主动脉瓣叶行脱细胞处理。密度梯度离心法从骨髓中获取骨髓单个核细胞,体外扩增培养后鉴定。方法:通过层层静电自组装技术构建20,10,5,0层的壳聚糖/透明质酸共混膜履盖在猪去细胞瓣膜支架上。将骨髓基质干细胞在涂膜支架上种植培养并检测支架对种子细胞的黏附效果。主要观察指标:扫描电镜观察、细胞计数、MTT检测组织工程心脏瓣膜上种子细胞的形态和细胞黏附效果。结果:扫描电镜观察20层壳聚糖/透明质酸多层膜样品上细胞生长情况比较好,样品上可以铺满细胞。而在组装层数为5层和10层的样品上,细胞生长的比较少。构建层数为20层的瓣叶,其细胞计数及吸光值高于10层和5层构建的瓣叶(P<0.01)。构建层数为10层和5层的瓣叶与0层比较差异无显著性意义(P>0.05)。结论:通过层层静电自组装技术构建的共混膜能够促进种子细胞的黏附,而且有一定的量效关系。
- 李秋泽吴凌翔杨立信龚德军袁阳钟伟黄盛东徐志云
- 关键词：组织工程心脏瓣膜细胞黏附
