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首都医学发展科研基金(ZD199915): 作品数：12 被引量：31H指数：3; 相关作者：李红霞张素梅周友珍张文晶关新元更多>>; 相关机构：北京世纪坛医院北京军区总医院香港大学更多>>; 发文基金：首都医学发展科研基金更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

MRP3基因参与卵巢癌细胞拓扑替康耐药机制形成的研究被引量：1: 2006年; 目的:分析人卵巢癌SKOV3/TPT多药耐药的分子机制,寻找可能参与拓扑替康(TPT)耐药机制的新基因。方法:采用大剂量间歇诱导法,对SKOV3细胞株用TPT反复冲击诱导培养,获得稳定的SKOV3/TPT;利用Affymetrix U133A基因表达谱芯片,比较SKOV3及SKOV3/TPT细胞的基因表达;从中选择高表达的MRP3基因进行RT-PCR验证。再将MRP3反义及正义寡核苷酸片段分别用脂质体转染进耐药细胞,用MTT法、流式细胞仪及半定量RT-PCR检测体外转染后细胞内TPT的荧光强度、耐药指数及MRP3 mRNA表达的改变。结果:基因芯片检测发现,有7个差异表达基因可能参与了SKOV3/TPT细胞的耐药,其中4个基因被上调,3个基因被下调,MRP3为上调最明显的基因。MRP3反义寡核苷酸转染SKOV3/TPT细胞后,可明显降低细胞内TPT的浓度及耐药指数(P<0.05),细胞内MRP3 mRNA的表达较未转染细胞下降了60.16%(P<0.05)。结论:SKOV3/TPT细胞耐药表型的形成涉及多个基因表达的改变。MRP3的高表达导致细胞内药物浓度降低,可能是卵巢癌细胞对TPT耐药的主要原因。; 周友珍李红霞张素梅; 关键词：卵巢肿瘤基因芯片拓扑替康

应用基因芯片技术筛选卵巢癌紫杉醇耐药差异表达基因被引量：9: 2006年; 目的应用基因芯片技术研究人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株OC3/Tax300与其亲本细胞OC3(敏感株)之间的基因表达谱差异,筛选耐药相关基因,探讨基因表达谱差异与卵巢癌肿瘤耐药之间相关性。方法分别提取C3/Tax300与OC3细胞的总RNA并纯化mRNA;将等量的mRNA逆转录,以Cy5和Cy3标记的cDNA做探针,在Biostar H140S基因表达谱芯片上进行杂交。扫描芯片荧光信号图像,用基因图像分析软件对扫描图像进行数字化处理和分析。结果共筛选出显著表达差异基因134条,其中117种基因表达水平下调,17种基因表达上调,主要涉及细胞信号蛋白和传递蛋白,蛋白翻译合成类以及细胞骨架和运动、离子通道和运输蛋白、代谢、发育等14大类相关基因。下调基因主要为EBNA-3、COP9、StIP1,上调的基因主要是JAK2、HSPS、NADH等。结论这些基因表达差异与卵巢癌化疗耐药有关。; 张文晶李红霞宋磊张素梅; 关键词：基因芯片卵巢癌耐药相关基因

卵巢癌紫杉醇耐药细胞株OC_3/PIX_3及OC_3/PIX_5的比较基因组杂交研究被引量：1: 2005年; 目的:了解两种卵巢癌紫杉醇耐药株(OC3/PIX3及OC3/PIX5)和其亲代细胞紫杉醇敏感株(OC3)染色体DNA拷贝数的差异变化,探讨耐药细胞的分子遗传学改变。方法:运用比较基因组杂交(comparative genom ic hybrid ization,CGH)技术,将OC3/PIX3及OC3/PIX5与其亲代细胞株OC3的染色体基因组进行比较分析。结果:3种细胞株的染色体2pter-p21、3q、5p、9均有遗传物质表达增加;10号染色体表达增加仅见于OC3。染色体1,4,6的遗传物质在3种细胞株的表达均有减少。3p的减少发生在OC3和OC3/PIX5。仅在OC3细胞中见到7q、8p减少。OC3和OC3/PIX5出现染色体10q22过度扩增。最有意义的变化是OC3/PIX3细胞染色体2p22的过度扩增。结论:2p22拷贝数过度扩增可能与卵巢癌紫杉醇耐药相关。; 殷冬梅李红霞关新元周友珍张素梅; 关键词：紫杉醇耐药细胞系基因组杂交

紫杉醇耐药卵巢癌细胞SKOV3/TAX基因表达谱的变化被引量：2: 2009年; 目的比较紫杉醇耐药卵巢癌细胞SKOV3/TAX及敏感细胞SKOV3基因表达谱的差异,筛查获得性紫杉醇卵巢癌耐药的相关基因。方法取对数生长期SKOV3、SKOV3/TAX细胞,抽提细胞总RNA,合成双链cDNA,生物素标记,用高通量Affymetrix人类基因组U133A基因芯片检测其基因谱。结果与SKOV3相比,SKOV3/TAX有111条基因表达发生变化(45条基因表达上调,66条基因表达下调)。结论SKOV3/TAX的部分基因表达发生变化,与卵巢癌化疗耐药有关。; 张文晶董晓琳李红霞; 关键词：卵巢肿瘤卵巢癌紫杉醇耐药相关基因

拓普替康耐药卵巢癌细胞基因的表达变化及意义: 2006年; 目的探讨人卵巢癌获得性拓普替康(TPT)耐药的相关基因。方法采用大剂量间歇诱导法,用拓普替康(TPT)反复冲击诱导培养人卵巢癌SKOV 3细胞株,建成SKOV 3/TPT耐药株。用A ffym etrix人类基因组U 133A基因表达谱芯片,比较SKOV 3/TPT及SKOV 3细胞基因表达的差异。选择高表达的基因进行RT-PCR验证。结果基因芯片检测发现,二者有283种基因表达有显著性差异。有7个差异表达基因可能参与了SKOV 3/TPT细胞的耐药机制,其中上调最明显的基因为M RP 3,其次为M RP 7、钠离子通道蛋白及固醇异构酶基因;明显下调的基因有M RP 4、假设蛋白和免疫球蛋白基因。RT-PCR检测M RP 3 mRNA在耐药细胞中呈高表达,与基因芯片结果一致。结论M RP 3、M RP 4、M RP 7、钠离子通道蛋白、固醇异构酶、假设蛋白和免疫球蛋白基因为人卵巢癌获得性TPT耐药相关基因。; 周友珍李红霞张素梅; 关键词：基因转移技术卵巢肿瘤拓普替康耐药基因

基因芯片技术筛选卵巢癌紫杉醇耐药差异表达基因的研究被引量：2: 2005年; 目的应用基因芯片技术研究人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株OC 3/T ax300与其敏感细胞系OC 3之间的基因表达谱差异,筛选耐药相关基因。方法分别提取OC 3/T ax300与OC 3细胞的总RNA并纯化mRNA;将等量的mRNA逆转录,以Cy5和Cy3标记的cDNA做探针,在B iostarH 140S基因表达谱芯片上进行杂交。扫描芯片荧光信号图像,用基因图像分析软件对扫描图像进行数字化处理和分析。结果共筛选出显著表达差异基因234种,其中217种基因表达水平下调,17种基因表达上调;下调基因主要为EB病毒编码核蛋白(EBNA-3)、信号蛋白(COP 9),上调的基因主要是酪氨酸激酶(JAK 2)、热休克蛋白(HSP s)、还原型辅酶烟胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)等。结论本研究筛选出的基因可能为进一步探讨卵巢癌肿瘤细胞耐药机制提供新的途径。; 张文晶李红霞宋磊张素梅; 关键词：基因芯片卵巢癌耐药相关基因

紫杉醇化疗后卵巢上皮性癌组织中COP9、JAK2、HSP、NADH基因表达的变化及其意义被引量：1: 2008年; 目的探讨卵巢上皮性癌（卵巢癌）紫杉醇化疗后癌组织中COP9、JAK2、HSP、NADH基因表达的变化及其意义。方法采用RT-PCR技术及实时定量PCR技术检测54份卵巢癌组织中JAK2、HSP、NADH和COP9基因的表达，并分析其临床意义。其中，接受紫杉醇化疗者33份（接受2—4、6—10个疗程化疗者分别为15、18份），未接受化疗者21份；病理分级：G1-G2 24份，G3，30份；病理类型：浆液性囊腺癌26份，黏液性囊腺癌21份，子宫内膜样腺癌7份；手术病理分期：Ⅲ期49份，Ⅳ期5份。结果RT-PCR技术检测显示，COP9基因过度表达率化疗者为39％，明显低于未化疗者的95％（P〈0．01）；而JAK2、HSP、NADH基因过度表达率化疗者分别为91％、97％及94％，明显高于未化疗者的29％、48％及43％（P〈0．05）。除JAK2基因过度表达率在不同病理分级的癌组织中比较，差异有统计学意义（P〈0．01）外，其他基因在不同病理分级、病理类型、手术病理分期及不同疗程化疗者间比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。进一步行实时定量PCR技术检测显示，化疗者COP9、JAK2、HSP和NADH基因的拷贝数分别为568、7653、5766和3200，未化疗者分别为1886、3094、3341和1522，两者分别比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。除COP9基因的拷贝数在不同疗程化疗患者的癌组织中比较，差异无统计学意义（P〉0．05）外，其他基因在不同疗程化疗、病理分级的癌组织中比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）；上述4个基因拷贝数在不同病理类型间比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。Ⅳ期患者癌组织中HSP、NADH基因拷贝数明显高于Ⅲ期（P值分别为〈0．01、〈0．05）；但COP9及JAK2基因拷贝数在两者间比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。JAK2、HSP、NADH基因表达3者间均呈明显正相关关系（r=0．56、0．44、0．57，P均〈0�; 李红霞; 关键词：紫杉酚肽水解酶类蛋白质酪氨酸激酶热休克蛋白质类

卵巢癌紫杉醇耐药细胞株OC_3/TAX_(300)建立及基因表达谱分析被引量：14: 2006年; 目的：建立人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株,探讨其基因表达谱差异与紫杉醇耐药之间相关性。方法：采用反复大剂量紫杉醇冲击法,由亲本细胞OC_3建立卵巢癌紫杉醇耐药细胞株OC_3/TAX_(300)。运用比较基因组杂交(comparative genomic hy- bridization,CGH)及基因芯片技术分析耐药及敏感株细胞染色体DNA拷贝数和基因表达谱差异。结果：OC_3/TAX_(300)耐药株历时10个月建成,耐药性稳定,耐药指数为6.70。CGH结果显示OC_3/TAX_(300)细胞染色体2p22的高水平扩增。基因表达谱芯片共筛选出显著表达差异基因134条,其中117种基因表达水平下调,17种基因表达上调,有代表性的下调基因为KCNK2、COP9,上调的基因为JAK2。结论：建立卵巢癌紫杉醇耐药细胞株OC_3/TAX_(300),耐药性稳定,可以作为筛选耐药基因和耐药逆转剂的细胞模型。OC_3/TAX_(300)细胞染色体2p22的高度扩增、KCNK2、COP9基因下调和JAK2基因上调与卵巢癌化疗耐药有关。; 李红霞关新元; 关键词：紫杉醇细胞基因表达调控基因组印迹

人卵巢癌拓扑替康耐药细胞株SKOV3/TPT的建立及生物学特性的研究被引量：3: 2005年; 目的建立人卵巢癌拓扑替康(TPT)耐药细胞株(SKOV3/TPT),研究其生物学特性和耐药特点。方法模拟临床用药特点,采用大剂量TPT(2160ng/ml)冲击建成人卵巢癌SKOV3/TPT耐药细胞株。MTT法检测多药耐药性,流式细胞仪测定细胞周期、胞内药物的积聚及P糖蛋白(Pgp)表达,从生长曲线、光镜下形态、超微结构等方面比较耐药细胞和SKOV3细胞某些生物学特性的差异。结果成功建立了SKOV3/TPT耐药株,耐药指数为10·67,对喜树碱、米托蒽醌及长春新碱有明显的交叉耐药,对紫杉醇、顺铂、5-氟尿嘧啶、足叶乙甙和甲氨蝶呤敏感。与SKOV3细胞相比,SKOV3/TPT耐药细胞倍增时间延长;G2+M期的比例明显增加(P<0·01);细胞内TPT浓度明显减少(P<0·05);无Pgp过表达。结论SKOV3/TPT细胞株呈中等水平耐药,耐药性稳定,呈非典型的多药耐药特征;对TPT耐药的主要原因可能与细胞内药物浓度降低和细胞周期改变及凋亡有关,与Pgp的过表达无关。; 周友珍李红霞张文晶魏丽惠; 关键词：卵巢肿瘤拓扑替康抗药性

染色体2p22的过度扩增及hmsh2基因的高表达与卵巢癌紫杉醇耐药相关性的研究被引量：3: 2006年; 目的研究染色体特定区域DNA拷贝改变、基因差异表达及其与紫杉醇耐药的关系。方法运用比较基因组杂交(comparativegenomichybridization,CGH)及RTPCR技术,分析卵巢癌紫杉醇耐药株染色体基因组变化和hmsh2基因在卵巢癌组织中的表达。结果CGH结果显示最有意义的变化是卵巢癌紫杉醇耐药株OC3/Tax300细胞染色体2p22过度扩增。RTPCR检测发现hmsh2基因在OC3/Tax300细胞高度表达。hmsh2基因表达阳性率在组1和组2分别为93.9%(31/33)及47.6%(10/21),差异有显著性;在低分化癌为93.3%,显著高于中、高分化癌的54.2%。结论2p22拷贝数的过度扩增及hmsh2基因的高度表达可能与卵巢癌紫杉醇耐药相关。; 李红霞关新元张素梅尹冬梅; 关键词：卵巢癌比较基因组杂交 HMSH2基因

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